特殊染色技術(shù)-病原微生物染色法（病理檢驗(yàn)技術(shù)課件）

病理檢驗(yàn)技術(shù)

特殊染色病原微生物

卡氏肺囊蟲(chóng)

卡氏肺囊蟲(chóng)是屬原蟲(chóng)還是真菌,目前還沒(méi)有明確分類(多數(shù)學(xué)者認(rèn)為屬原蟲(chóng))?？ㄊ戏文蚁x(chóng)的生活史是在肺泡里完成,成熟包囊為圓形或橢圓形,直徑約5~10um,外圍以囊壁,內(nèi)含8個(gè)囊內(nèi)小體,小體大小約1~2um,呈半月形。

卡氏肺囊蟲(chóng)病多為合并感染引起,當(dāng)人體抵抗力降低時(shí),特別是兔疫功能低下的患者如AIDS患者就容易被感染,肺囊蟲(chóng)大量緊殖引起肺囊蟲(chóng)性肺炎。

卡氏肺囊蟲(chóng)在HE片上不易被識(shí)別,卡氏肺囊蟲(chóng)性肺炎時(shí),在HE染色片僅見(jiàn)肺泡腔內(nèi)囊蟲(chóng)呈淺酸性小顆粒,常被誤診為滲出液中的蛋白,用特殊染色方法顯示卡氏肺囊蟲(chóng),則容易識(shí)別。顯示卡氏肺囊蟲(chóng)的特染色方法主要有六胺銀法,熒光桃紅一石黃法、Giemsa法、PAS法和Gram法等,以前三種方法為佳。六胺銀法

（改良

Grocott）(-)試劑配制

1.8%的鉻酸(

chromic

acid）

2.0.5%的偏重亞硫酸鈉(

sodium

metabisulphite）

3.5%的硝酸銀(

silver

nitrate)

4.3%的六次甲基四胺(

hexamethylene

teramone）

5.5%的四硼酸鈉(

sodium

tetraborat)

6.六胺銀貯備液

5%的硝酸銀5ml

3%的六次甲基四胺100ml

取5%的硝酸銀5ml,慢慢傾入3%的六次甲基四胺100ml內(nèi),即形成白色沉淀,此沉淀在慢慢搖動(dòng)中即溶解變清,此澄清液用棕色小口砂塞瓶盛裝,置于4℃的冰箱可保存約6個(gè)月。

7.六胺銀工作液

六胺銀貯備液10ml

蒸餾水25ml

5%的四硼酸鈉2ml

依次加入,混合后即可使用。

8.0.1%的氯化金(

gold

chloride)先用棕色小口砂寒瓶配成1%的貯存液,再以小滴瓶配制0.1%的氯化金,即取蒸餾水與原液作9:1稀釋即成0.1%的氯化金。9.5%的硫代硫酸鈉(

sodium

thiosulphate）

10.

Mayer蘇木精

蘇木精(

hematoxylin)0.1g

蒸餾水

100ml

碘酸鈉(

sodium

iodate)20mg

硫酸鋁銨(

aluminum

ammonium

sulphate）5g

檸檬酸(

citric

acid)0.1g

水合氯醛(

chloral

hydrate)5g

取一只200ml潔凈三角燒瓶盛蒸餾水,加入蘇木精并輕輕搖動(dòng)使完全溶解(可稍加溫)，再加入碘酸鈉及硫酸鋁銨,用玻璃棒輕輕攪動(dòng)使硫酸鋁銨完全溶解,最后加入檸檬酸與水合氯醛,此時(shí)溶液呈淡紅紫色,過(guò)濾于小口砂塞瓶?jī)?nèi)。置4℃的冰箱可保存1年以上。

(二)染色步驟

1.組織固定于10%的甲醛液中,常規(guī)脫水包埋。

2.切片厚4~5um,常規(guī)脫蠟至水。

3.8%的鉻酸氧化20分鐘。

4.流水稍洗。

5.0.5%的偏重亞硫酸鈉處理1分鐘。

6.流水沖洗5分鐘,再用蒸餾水浸洗2次。7.切片置入預(yù)熱至58~60℃的六胺銀工作液內(nèi)并加蓋,于58~60℃的溫箱內(nèi)作用

20-60分鐘,至切片呈淡黃色,即取出經(jīng)蒸餾水洗后在顯微鏡下觀察有否菌體出現(xiàn),如有淡棕色的菌體出現(xiàn),以后每隔5~10分鐘取出鏡檢以控制菌體著色深淺,至認(rèn)為顯色恰當(dāng)為止。8.蒸餾水洗。

9.滴入0.1%的氯化金調(diào)色1分鐘。

10.蒸餾水稍洗。

11.5%的硫代硫酸鈉處理2分鐘。

12.流水沖洗5分鐘。

13.

mayer蘇木精染液染色5分鐘。

14.流水沖洗10分鐘。

15.常規(guī)脫水透明,中性樹(shù)膠封固。(三)結(jié)果

卡氏肺囊蟲(chóng)包囊壁呈棕黑色,圓形或橢圓形。成熟的包囊內(nèi)含約8個(gè)囊內(nèi)小體,小體不著染。部分包囊壁可見(jiàn)增厚形成括弧樣結(jié)構(gòu)。真菌也呈棕黑色,應(yīng)根據(jù)各種真菌的形態(tài)特點(diǎn)。

病理檢驗(yàn)技術(shù)

特殊染色病原微生物

抗酸菌抗酸染色是指對(duì)抗酸桿菌(acid-fast

bacilli)而言。抗酸桿菌屬分枝桿菌,由于菌體胞體壁上含有不等量的類脂質(zhì),主要是磷脂、脂肪酸和蠟質(zhì)三種成分,故一般不易著染。但一旦著染后可抵抗酸的脫色作用,故稱為抗酸菌。常見(jiàn)的抗酸菌為結(jié)核桿菌和麻風(fēng)桿菌。

結(jié)核桿菌(

tubercle

bacilli)為細(xì)長(zhǎng)和稍彎曲的桿狀菌,可長(zhǎng)短不一,常單條散在分布或平行相聚排列,有時(shí)呈分支狀。多見(jiàn)于結(jié)核性干酪樣壞死灶,它主要侵犯肺、淋巴結(jié)和腎臟。在病理組織中結(jié)核桿菌有多形性變化。麻風(fēng)桿菌(

leprosy

bacilli)較粗短筆直,常呈束狀排列或聚集成堆。在泡沫細(xì)胞(麻風(fēng)細(xì)胞)內(nèi)可見(jiàn)到大量麻風(fēng)桿菌,稱為麻風(fēng)球。它主要侵犯皮膚、黏膜和外周神經(jīng)(尺神經(jīng)、橈神經(jīng)等而引起鷹爪)，晚期還可侵犯各臟器。

抗酸桿菌在退行性改變時(shí)可呈顆粒狀,隨后染色減弱甚至完全不著色。例如麻風(fēng)桿菌在經(jīng)治療后,制作切片染色即呈小點(diǎn)狀。

顯示抗酸桿菌傳統(tǒng)是采用

Ziehl-Neelsen法,該法是用堿性品紅和苯酚進(jìn)行染色,在染色時(shí)進(jìn)行加熱處理,以促進(jìn)染液對(duì)菌體穿透。多年來(lái)此法是作為古典的抗酸菌染法。其后Wade-Fite在

Ziehl-Neelsen法的基礎(chǔ)上進(jìn)一步改良。下面的方法是根據(jù)此法稍改進(jìn),效果良好。

苯酚堿性品紅法(抗酸染色)

(改良Wade-fite）(-)試劑配制1.汽油松節(jié)油混合液

汽油1份

松節(jié)油1份

2.堿性品紅乙醇液

堿性品紅(

basic

fuchsin)5g

95%的乙醇100ml

取小口砂塞瓶盛裝,混合后輕輕搖動(dòng)多次使徹底溶解。

3.5%的苯酚(

phenol)取苯酚置入約50℃的溫箱使其溶解,量取5ml與蒸餾水95ml充分混溶。

4.苯酚堿性品紅液

堿性品紅乙醇液10ml

5%的苯酚水溶液90ml

5.20%的硫酸(sulphuric

acid)

(二)染色步驟

組織固定于10%的甲醛液中,常規(guī)脫水包埋。

2.切片厚4um。

3.切片在汽油松節(jié)油混合液脫蠟2次,每次約5~10分鐘。

4.用吸水紙將切片周圍余液抹干,但切片應(yīng)保持稍濕潤(rùn)。

5.流水漂洗1分鐘。

6.滴入苯酚堿性品紅液于室溫染20~30分鐘。

7.流水洗去多余染液。

8.20%的硫酸分化。

9.流水沖洗5分鐘。

10.

Mayer蘇木精淺染胞核。

11.流水沖洗10分鐘。

12.于50~60℃烘箱烘干,經(jīng)二甲苯透明,中性樹(shù)膠封固。

(三)結(jié)果

抗酸菌(包括麻風(fēng)桿菌和結(jié)核桿菌)呈紅色,胞核呈藍(lán)色。(六)應(yīng)用

本法常用以檢查結(jié)核桿菌和麻風(fēng)桿菌。例如:對(duì)于疑似干酪性壞死和結(jié)核樣結(jié)節(jié),為確定是否是結(jié)核菌所致,用抗酸染色有助于確定。對(duì)皮膚組織來(lái)說(shuō),如懷疑麻風(fēng)時(shí)一般都要作抗酸染色以檢查有否麻風(fēng)菌。如為瘤型麻風(fēng)可在病灶內(nèi)找到大量麻風(fēng)桿菌；類結(jié)核型麻風(fēng)則找不到麻風(fēng)桿菌；界線類麻風(fēng)在瘤型病灶內(nèi)有大量麻風(fēng)桿菌存在,而結(jié)核樣型病灶內(nèi)則找不到菌；未定類麻風(fēng)偶爾可找到少量麻風(fēng)桿菌。病理檢驗(yàn)技術(shù)

特殊染色病原微生物

螺旋體螺旋體(spirochaeta)是一類細(xì)長(zhǎng)、柔軟、彎曲呈螺旋狀,運(yùn)動(dòng)活潑的原核細(xì)胞型微生物，具有細(xì)菌的基本結(jié)構(gòu)，細(xì)胞壁有脂多糖和壁酸。螺旋體在自然界和動(dòng)物體內(nèi)廣泛存在，而對(duì)人類能致病的有以下幾種。

1.密螺旋體(treponema)菌體長(zhǎng)約6~14um,寬為0.25~0.5um,有8~12個(gè)細(xì)密而均勻的螺旋,兩端尖直。對(duì)人致病的有梅毒螺旋體。2.疏螺旋體(borrelia)有5~10個(gè)稀疏而排列不規(guī)則的螺旋。對(duì)人致病的有回歸熱螺旋體。3.鉤端螺旋體(leptospira)菌體細(xì)長(zhǎng),螺旋數(shù)目較多而細(xì)密,一端或兩端彎曲成鉤狀。菌體常屈曲呈C形、S形。常在染色后,由于菌體粗大,細(xì)密的螺旋看不清楚。如引起高熱、出血和黃疸等多種癥狀的鉤端螺旋體。

梅毒螺旋體多用組織塊鍍銀的Levaditi法顯示,切片亦可用Warthin-Starry法、改良的Dieterle法、Steiner和Steiner法,這些都屬鍍銀法。顯示鉤端螺旋體則多用Warthin-Starry鍍銀法?；貧w熱螺旋體則可取血液涂片作Giemsa染色。硝酸銀法(I)

根據(jù)(Levaditi)(一)試劑配制1.2%的硝酸銀(silvernitrate)2.還原液

焦性沒(méi)食子酸(pyrogallicacid)4g

濃甲醛(formaldehyde)5ml

蒸餾水100ml(二)染色步驟1.取組織厚約1-2mm為宜,10%的甲醛固定2-4天。2.流水沖洗一晚。3.95%的乙醇浸泡24小時(shí)。4,蒸水沒(méi)洗,并不時(shí)輕輕搖動(dòng),至組織下沉為止。5.再換餾水浸洗約10分鐘。6.移入2%的硝酸銀液(加蓋),置于37℃的溫箱內(nèi)3天,其間于第2天更換新的2%的硝酸銀液1次。

7.蒸餾水浸洗3次,每次10分鐘。

8.還原液(加蓋)于室溫置暗處2天。

9.蒸餾水浸洗3次,每次約2分鐘。

10.常規(guī)脫水透明,浸蠟包埋。

11.切片厚6~8um,貼片,烤干。

12.二甲苯脫蠟2次。

13.中性樹(shù)膠封固。(三)結(jié)果

梅毒螺旋體呈黑色或棕黑色,背景呈淡黃色至淡棕黃色。(四)染色機(jī)制梅毒螺旋體用通常的染色方法是不易著染的,但它有嗜銀性,在一定條件下,螺旋體可從銀液中吸附銀離子,經(jīng)還原液處理后,螺旋體內(nèi)吸附的銀離子被還原為黑色的金屬銀而顯色。(五)應(yīng)用這方法可顯示梅毒螺旋體,也可顯示鉤端螺旋體(leptospira)。梅毒螺旋體有8~12個(gè)均勻的螺旋,兩端尖直；鉤端螺旋體細(xì)長(zhǎng),螺旋數(shù)目較多而細(xì)密,一端或兩端彎曲成鉤狀，菌體亦常屈曲呈C形或S形。對(duì)疑為梅毒樹(shù)膠種的肝和鉤端螺旋體病的肝行此法染色,有助于確定病變性質(zhì)。病理檢驗(yàn)技術(shù)

特殊染色病原微生物

胃幽門(mén)螺桿菌胃幽門(mén)螺桿菌(

helicobacter

pyloric)過(guò)去又稱胃幽門(mén)彎曲菌(

campylobacter

pyloric)。與慢性胃炎和消化性潰瘍有密切關(guān)系。胃幽門(mén)螺桿菌一般呈弧形、S形或海鷗狀,有時(shí)可見(jiàn)3~4個(gè)彎曲呈螺旋狀,常呈魚(yú)群狀分布。該菌多見(jiàn)于胃黏膜表面上皮與黏膜層之間,并貼近表面上皮細(xì)胞,部分進(jìn)入上皮細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi),胃小凹和黏膜淺層腺腔內(nèi)亦有此菌。

顯示胃幽門(mén)螺桿菌常采用硝酸銀法。May-Griinwald

giemsa法(邁格林華-吉姆薩法)、Giemsa法(吉姆薩法)、堿性品紅法、硼酸亞甲藍(lán)法和檸檬酸甲苯胺藍(lán)法等。硝酸銀法把幽門(mén)螺桿菌染成棕黑色,背景黃色,對(duì)比清晰,染片可長(zhǎng)期保存,但該法操作較煩瑣費(fèi)時(shí)。其他方法均較簡(jiǎn)便,但染片容易褪色。

硝酸銀法

(改良

Warthin-Starry)(一)試劑配制

1.1%的檸檬酸(citric

acid)

2.酸化水(pH4.0)取一大燒杯,加入500ml雙蒸餾水,然后再加入1%的檸檬酸3~4ml,以玻璃棒攪勻,用pH試紙或酸度計(jì)測(cè)pH值,再慢慢加入1%的檸檬酸,邊加邊測(cè)pH值,直至達(dá)到pH=4.0為止。

3.1%的硝酸銀液

硝酸銀(

silver

nitrate)0.5g

酸化水,pH4.050ml4.2%的硝酸銀液

硝酸銀(

silver

nitrate)0.2g

酸化水,pH4.010ml

5.5%的明膠

明膠(

gelatine)5g

酸化水,pH4.0100ml取廣口砂塞瓶一只,傾入明膠和酸化水,置于37℃溫箱內(nèi)使慢慢溶解混勻,必要時(shí)可加汞硫代水楊酸鈉(merthiolate)lomg作為保存劑。6.0.15%的對(duì)苯二酚

對(duì)苯二酚(hydroquinone)15mg

酸化水,pH4.0

10ml7.顯影液2%的硝酸銀液

6ml5%的明膠18ml0.15%的對(duì)苯二酚8ml此液需在下述染色步驟第4步操作完成之前依次充分混合,置于56℃的水浴箱內(nèi)保溫待用。(二)染色步驟1.組織固定于10%的甲醛液中,常規(guī)脫水包埋。2.切片厚4~6um,常規(guī)脫蠟至水。3.蒸餾水浸洗切片2次,每次1分鐘。4.切片置入1%的硝酸銀液內(nèi)(加蓋)于56℃的水浴箱孵育1小時(shí)。5.從1%的硝酸銀液取出切片,不用水洗,即置入顯影液內(nèi)(加蓋),維持在56℃的水浴箱內(nèi),至切片呈淡黃棕色時(shí)取出,平放在玻璃架上,用預(yù)熱至56℃的自來(lái)水徹底沖洗。6.流水沖洗5分鐘。7.常規(guī)脫水透明,中性樹(shù)膠封固。(三)結(jié)果胃幽門(mén)螺桿菌呈棕黑色,背景呈黃棕色。螺旋體亦呈棕黑色。病理檢驗(yàn)技術(shù)

特殊染色病原微生物

細(xì)菌細(xì)菌(bacteria)是屬原核生物界的一種單細(xì)胞微生物。細(xì)菌體積從1um至數(shù)微米,直徑約0.8-1.2um。按其外形主要分為球菌、桿菌及螺形菌三大類。球菌菌體呈球形,又分為雙球菌、鏈球菌、葡萄球菌等；桿菌菌體呈桿狀,長(zhǎng)短不一,有些桿菌是直的,有些則稍彎曲,有些又有分支；螺形菌菌體彎曲,又可分為弧菌和螺菌?；【挥幸粋€(gè)彎曲,呈逗點(diǎn)狀，螺菌菌體可有數(shù)個(gè)彎曲。

細(xì)菌由細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)和核質(zhì)構(gòu)成。細(xì)胞壁是一層較薄的膜狀結(jié)構(gòu),其功能是維持細(xì)胞的外形。細(xì)胞膜位于細(xì)胞壁的內(nèi)層,由磷脂和蛋白質(zhì)構(gòu)成；細(xì)胞質(zhì)為細(xì)胞膜所包裹,是細(xì)菌的基礎(chǔ)物質(zhì),內(nèi)含核糖體等物質(zhì)。核質(zhì)多在菌體中央,無(wú)核膜和核仁。此外,有些細(xì)菌還有莢膜、鞭毛、菌毛和芽胞等特殊結(jié)構(gòu)。

細(xì)菌染色常用革蘭(Gram)法,該法是由丹麥細(xì)菌學(xué)家Christiangram于1884年創(chuàng)建，至今有一百多年仍在廣泛應(yīng)用。Gram染色可把細(xì)菌區(qū)分為兩類。標(biāo)本先用結(jié)晶紫染色,再加碘媒染,使之生成結(jié)晶紫-碘復(fù)合物,此時(shí)不同細(xì)菌均被染成藍(lán)紫色。繼后通過(guò)用苯胺、丙酮等分化處理,仍保持不脫色的為Gram陽(yáng)性菌,完全脫色的或經(jīng)堿性品紅、碳酸鋰胭脂紅染成紅色的為Gram陰性菌。Gram染色,最古老的是Gram法,其后有Gram-Weigert法,Conn等改良Weigert法，Brown和Brenn的改良Gram法,Brown和Hopps改良的Gram法等。不管那一種方法，顯示Gram陽(yáng)性菌都是以結(jié)晶紫作為主要染料,結(jié)晶紫是一種六甲基對(duì)玫瑰苯胺,染色后呈明亮的藍(lán)紫色，是一種較為理想的細(xì)菌染料。苯胺結(jié)晶紫法

(改良

gram-weigert)(-)試劑配制

1.苯胺結(jié)晶紫染液

結(jié)晶紫(

crystal

violet)2g

無(wú)水乙醇(

absolute

alcohol)10ml

苯胺(

aniline)2ml

蒸餾水88ml

結(jié)晶紫溶于無(wú)水乙醇,苯胺與蒸餾水盛于小口砂塞瓶加塞后稍用力搖勻混合,再與完全溶解的結(jié)晶紫液混合。此液用前需過(guò)濾,約可保存2~3個(gè)月。

2.

Weigert碘液

碘片(

iodine)

1g

碘化鉀(

potassium

iodine)2g

蒸餾水100ml

取蒸餾水4ml,加入碘化鉀使完全溶解,繼續(xù)加入碘片,輕輕搖動(dòng)使完全溶解后再加入其余蒸餾水。

3.苯胺二甲苯

苯胺(

aniline)1份

甲苯(

xylene)2份

(二)染色步驟

1.組織固定于10%的甲醛液中,常規(guī)脫水包埋。2.切片厚4um,常規(guī)脫蠟至水。

3.

Mayer蘇木精液復(fù)染胞核3分鐘。

4.流水沖洗10分鐘。

5.伊紅液于56℃的溫箱內(nèi)染5分鐘。

6.稍水洗。

7.苯胺結(jié)品紫(用小濾紙過(guò)濾在切片上)染色5分鐘。

8.傾去染液,用濾紙吸干切片周圍染液。

9.

Weigert碘液直接滴在切片上約2分鐘。

10.傾去碘液,稍水洗,用濾紙徹底吸干切片上的水分。

11.苯胺二甲苯進(jìn)行分化,并輕輕搖動(dòng)切片,必要時(shí)可更換新的苯胺二甲苯進(jìn)行分化，至切片無(wú)顏色脫出,立即傾去切片上的苯胺二甲苯。

12.滴入二甲苯以洗去苯胺,然后在鏡下觀察。如分化不夠,可再次滴入苯胺二甲苯進(jìn)行分化,至切片上革蘭陽(yáng)性菌顯示清晰為止。

13.二甲苯反復(fù)多次洗切片,徹底把苯胺除去。

14.中性樹(shù)膠封固。(三)結(jié)果

組織中革蘭陽(yáng)性藍(lán)紫色,陰性菌不著染。纖維素也是藍(lán)紫色,胞核呈藍(lán)色,其他組織成分呈淡紅色。病理檢驗(yàn)技術(shù)

特殊染色病原微生物乙型肝炎病毒病毒性肝炎(

viral

hepatitis)是由肝炎病毒引起的肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞變性壞死為主要病變的傳染病?，F(xiàn)已知肝炎病毒主要有五種型別:甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、丁型肝炎病毒及戊型肝炎病毒。近年還發(fā)現(xiàn)有庚型肝炎病毒、TT型肝炎病毒等。而乙型肝炎病毒在世界范圍內(nèi)傳播,嚴(yán)重危害人類健康。

乙型肝炎病毒有三種不同的形態(tài):①小球形顆粒；②管形顆粒；③大球形顆粒。大球形顆粒又稱Dane顆粒,是一種具有內(nèi)核外殼的、雙層結(jié)構(gòu)的、完整的病毒顆粒。內(nèi)核有20面體的對(duì)稱結(jié)構(gòu),表面含有乙型肝炎核心抗原(HBcAg),外殼有乙型肝炎表面抗原(HbsAg）。

HBcAg顆粒主要存在于乙型肝炎患者的肝細(xì)胞核內(nèi),而

HBsAg顆粒則存在于肝細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)，通過(guò)免疫酶組化方法可顯示肝切片內(nèi)的

HBcAg和

HBsAg。近年用地衣紅等可顯示

HBsAg。

顯示

HBsAg的染色有地衣紅法、醛品紅法和維多利亞藍(lán)法等。地衣紅法染液配制簡(jiǎn)易,特異性高,但染色效果受不同廠家和批號(hào)的染料影響,肝細(xì)胞內(nèi)的脂褐素也著染。醛品紅法染液配制也簡(jiǎn)單,染色時(shí)間短,也著染脂褐素。維多利亞藍(lán)法著色深,特異性高,可復(fù)染胞核,紅藍(lán)對(duì)比清晰,染液保存期長(zhǎng)。不足之點(diǎn)染液配制較煩瑣,配制后1周才能使用，染色時(shí)間也較長(zhǎng)。地衣紅法

(根據(jù)

Shikata)(一)試劑配制

1.0.5%的高錳酸鉀(

potassium

permanganate）

2.0.5%的硫酸(

sulphuric

acid)

3.酸化高錳酸鉀液

0.5%的高錳酸鉀1份

0.5%的硫酸1份

臨用前混合后用,不能保存。

4.2%的草酸(

oxalic

acid）

5.酸化地衣紅乙醇液

地衣紅1g

70%的乙醇100ml

鹽酸(

hydrochloric

acid）1ml

先將地衣溶解于70%的乙醇,待其徹底溶解后,再加入濃鹽酸,其pH相當(dāng)于1.0，放置2天后即可用。(二)染色步驟

1.組織固定于10%的甲醛液中,常規(guī)脫水包埋。

2.切片厚4um,常規(guī)脫蠟至水。

3.酸化高錳酸鉀液氧化5分鐘。

4.稍水洗。

5.2%的草酸漂白2分鐘,脫去高錳酸鉀著色。

7.70%的乙醇稍浸洗。

8.酸化地衣紅乙醇液浸染(加蓋)5小時(shí)或更長(zhǎng)。

9.70%的乙醇浸洗2次,每次約10~30秒,其間把切片提起放下,至切片無(wú)染液脫出為止。

10.常規(guī)脫水透明,中性樹(shù)膠封固。(三)結(jié)果

肝細(xì)胞內(nèi)的HBsAg陽(yáng)性物質(zhì)呈棕紅色至深棕色(圖3-13),微細(xì)顆粒狀或均質(zhì)狀。陽(yáng)性物質(zhì)可形成圓形或橢圓形的團(tuán)塊,也可充滿整個(gè)胞質(zhì),呈環(huán)形或半月形圍繞胞核；有時(shí)可見(jiàn)于肝細(xì)胞胞質(zhì)邊緣,呈花邊狀。彈性纖維、脂褐素也染為深棕色,其余底色為較淺淡的灰棕色,肝細(xì)胞胞核不著色。陽(yáng)性物質(zhì)的輪廓很清楚。病理檢驗(yàn)技術(shù)

特殊染色病原微生物真菌真菌(fung)舊稱霉菌,真菌的種類很多,在自然界分布極廣,其中有很多與人類的日常生活有密切聯(lián)系,但大部分為非致病性,僅少數(shù)真菌可感染人體形成真菌病。真菌一般不產(chǎn)生外毒素和內(nèi)毒素,其致病作用可能與在人體內(nèi)繁殖引起的機(jī)械性損傷和所產(chǎn)生的酶類、酸性代謝產(chǎn)物有關(guān)。

真菌有單細(xì)胞和多細(xì)胞兩種類型。在病理切片上常見(jiàn)的深部真菌有單細(xì)胞真菌,菌體呈圓形或橢圓形,如組織胞漿菌、新型隱球菌等；多細(xì)胞真菌,菌體呈絲狀,并分支交織成團(tuán),稱為絲狀菌,其結(jié)構(gòu)分菌絲和孢子,如曲菌、白色念珠菌等。大多數(shù)真菌的細(xì)胞壁是由纖維素和明角質(zhì)混合組成,含有多糖,故用高碘酸無(wú)色品紅法均能染成紅色。真菌用HE染色一般著色不良,因此,用特殊染色方法顯示,高碘酸無(wú)色品紅法可顯示大多數(shù)真菌,這是廣泛采用的常規(guī)檢驗(yàn)方法。無(wú)色品紅-醛品紅法和六胺銀法適用于曲菌、白色念珠菌等,特別是六胺銀法對(duì)馬爾尼菲青霉菌和毛霉菌的染色效果甚佳,新型隱球菌主要應(yīng)用黏液朋脂紅法或愛(ài)爾新藍(lán)法(pH2.5),也可用六胺銀法顯示。

高碘酸-無(wú)色品紅法

(根據(jù)

McManus)(-)試劑配制1.0.5%的高碘酸(

predic

acid)

2.無(wú)色品紅液

堿性品紅1g

蒸餾水200ml

1mol/l的鹽酸(

hydrochlore

acid）20ml

偏重亞硫酸鈉1-1.5g

活性炭