細胞生物學實驗報告

細胞生物學實驗報告細胞生物學試驗報告

試驗六細胞膜的滲透性

一、試驗目的

了解細胞膜[1]的滲透性及各類物質進入細胞的速度[2]

二、試驗原理

1、在等滲溶液中，細胞對各種溶質的透過性不同。有的溶質可以進

入，有的溶質不能滲入。

2、滲入的溶質能提高細胞的滲透壓，促進水分子進入細胞，引起溶

血現(xiàn)象[3]。

3、不同的溶質滲入到細胞內(nèi)的速度不同，因此溶血時間也不同。

三、試驗材料

新奇血液（雞血、豬血、牛血等）

四、試驗器材

試管（1.5cmX18cm）、試管架、10ml移液管、1ml移液管、200ml燒杯（2個）、250ml容量瓶、移液槍、膠頭滴管、菜刀、吸球、電子天平、顯微鏡、蓋玻片、載玻片、秒表

五、試驗藥品及試劑0.17MNaCl、0.17MNH4Cl、0.17MNH4Ac、0.17MNaNO3、0.12MNa2SO4、0.12M草酸銨、0.32M葡萄糖、0.32M甘油、0.32M乙醇、0.32M丙酮、肝素抗凝劑[4]

六、試驗步驟1、制備血液稀釋液

（1）抗凝劑的制備：首先稱取1克肝素鈉粉末，然后參加0.17M

NaCl溶液10ml（1∶10的比例），混合勻稱，制成肝素抗凝劑。

（2）血液稀釋液的制備：取新奇血液，按比例（肝素抗凝劑:血液

=1∶10）混合勻稱，配制成經(jīng)肝素抗凝的血液[5][6]。

（3）按比例（經(jīng)肝素抗凝的血液∶0.17MNaCl溶液=1∶10）混

合勻稱，形成一種不透亮的紅色液體[7]。

2、低滲溶液（空白對比）的觀看

取試管一只，參加10ml蒸餾水，然后再參加1ml稀釋的血液。留意觀看溶液顏色的變化。結果是溶液由不透亮的紅色變?yōu)槌吻?。記錄下這個過程所要的時間。3、紅血球的滲透性

按表一的配制，分別在以下十種等滲溶液中進展試驗。輕輕搖動，留意有無顏色變化，是否有溶血現(xiàn)象發(fā)生，登記時間（自參加稀釋血液到溶液漸漸由紅色變?yōu)橥噶脸吻?，紅血球全部溶血所需時間），填入表一的空格中。4、顯微觀看

[1]何為細胞膜？[5]留意：這一步，動作要特別快速，否則雞血會凝固?；蛘呦劝芽鼓齽﹨⒓拥綗?，再參加新奇的[2]雞血，邊加邊震蕩即可。為何不同物質進入細胞的速度不同？[6]為什么新奇的雞血會凝固？[3]何為溶血現(xiàn)象？[7]為什么這一步要使用0.17M的NaCl溶液？[4]你知道有哪些血液抗凝劑？（1）血液紅細胞的觀看

滴一滴稀釋的血液于載玻片上，蓋上蓋玻片。用光學顯微鏡觀看細胞的種類、外形和顏色。

（2）細胞破裂的觀看

在上一步的載玻片的一端滴加清水，在另一端吸水，并在顯微鏡下觀看細胞的裂開。

七、試驗結果與分析

1、比擬和分析你所觀看到的試驗結果，并解釋緣由。

結果：

（1）在所供應的試劑中不溶血的有：

（2）在所供應的試劑中不完全溶血的有：（3）在所供應的試劑中完全溶血的有：結果分析與比擬：結論：

2、繪制你所觀看到的血液細胞圖。

3、爭論溶血試驗在討論中應用的可能性。附1：試劑配制表

1、0.17MNaCl需要＿＿＿＿＿＿克NaCl，定容至100ml。2、0.17MNH4Cl需要＿＿＿＿＿＿克NH4Cl，定容至100ml。3、0.17MNH4Ac需要＿＿＿＿＿＿克NH4Ac，定容至100ml。4、0.17MNaNO3需要＿＿＿＿＿＿克NaNO3，定容至100ml。5、0.12MNa2SO4需要＿＿＿＿＿＿克Na2SO4，定容至100ml。6、0.12M草酸銨需要＿＿＿＿＿＿克草酸銨，定容至100ml。7、0.32M葡萄糖需要＿＿＿＿＿＿克葡萄糖，定容至100ml。8、0.32M甘油需要＿＿＿＿＿＿克甘油（100%），定容至250ml。9、0.32M乙醇需要＿＿＿＿＿＿克無水乙醇，定容至250ml。10、0.32M丙酮需要＿＿＿＿＿＿克丙酮，定容至250ml。

附2：表一在不同低滲溶液下溶血現(xiàn)象的調查

編號12345678910試劑10ml0.17MNaCl+1ml稀釋的雞血10ml0.17MNH4Cl+1ml稀釋的雞血10ml0.17MNH4Ac+1ml稀釋的雞血10ml0.17MNaNO3+1ml稀釋的雞血10ml0.12MNa2SO4+1ml稀釋的雞血10ml0.12M草酸銨+1ml稀釋的雞血10ml0.32M葡萄糖+1ml稀釋的雞血10ml0.32M甘油+1ml稀釋的雞血10ml0.32M乙醇+1ml稀釋的雞血10ml0.32M丙酮+1ml稀釋的雞血是否溶血時間

附3：溶血結果的推斷

（1）不溶血：液體分2層，上層淺黃色透亮，下層紅色不透亮，鏡檢紅細胞完好。（2）不完全溶血：溶液混濁，上層變紅色，鏡檢有局部紅細胞裂開。（3）完全溶血：液體變紅而且透亮，鏡檢發(fā)覺細胞全成碎片。

附4：細胞膜內(nèi)外物質交換示意圖

原始生命向細胞進化所獲得的重要形態(tài)特征之一，是生命物質外面消失了一層膜性構造，即細胞膜。細胞膜和細胞內(nèi)膜系統(tǒng)總稱為生物膜(biomembrane)。

細胞膜(cellmembrane)，又稱原生質膜，是細胞構造中分隔細胞內(nèi)、外不同介質和組成成分的界面。其厚度通常為7～8nm，由脂類和蛋白質組成。一般蛋白質占60%-80%，類脂占20%-40%，碳水化合物約占5%。關于細胞膜的構造模型，流體鑲嵌模型是目前被最廣泛承受和認可的觀點。該模型由美國加州大學的辛格(S.J.Singer)和尼克森(G.L.Nicolson)于1972年提出。該模型突出了膜的流淌性和不對稱性，其構造特征是：生物膜的骨架是磷脂雙分子層，其中磷脂分子的疏水性尾部相對，極性頭部朝向水相。蛋白質或嵌在脂雙層外表，或嵌在其內(nèi)部，或橫跨整個脂雙層，表現(xiàn)出分布的不對稱性。依據(jù)在膜上的位置不同，膜蛋白可分為兩類：通過強疏水或親水作用同膜脂堅固結合不易分開的，稱為整合蛋白(integralprotein)或內(nèi)在蛋白；附著在膜表層，與膜結合比擬疏松簡單分別的，稱為外周蛋白(peripheralprotein)。細胞膜的外表還有糖類分子，形成糖脂、糖蛋白。因脂雙層具有流淌性，故蛋白質分子也可以在脂雙層中橫向移動；又因膜的內(nèi)外外表上脂類和蛋白質的分布不勻稱，反映了膜兩側的功能不同。

細胞膜是細胞與四周環(huán)境和細胞與細胞間進展物質交換和信息傳遞的重要通道。其最重要的特性是半透性，或稱選擇透過性，對進出入細胞的物質有很強的選擇透過性。這是細胞膜最根本的一種功能，假如丟失了這種功能，細胞就會死亡。細胞膜的功能有：

1)分隔形成細胞和細胞器，為細胞的生命活動供應相對穩(wěn)定的內(nèi)環(huán)境，膜的面積大大

增加，提高了發(fā)生在膜上的生物功能；

2)屏障作用，膜兩側的水溶性物質不能自由通過；3)選擇性物質運輸，伴隨著能量的傳遞；

4)生物功能：激素作用、酶促反響、細胞識別、電子傳遞等；5)物質轉運功能：細胞與四周環(huán)境之間的物質交換，是通過細胞膜的轉運功能實現(xiàn)的，其主要轉運方式有四種，即單純集中、易化集中、主動轉運、入胞和出胞作用。6)細胞膜的受體功能：受體是細胞識別和結合化學信息的特別構造，其本質是蛋白質。試驗八細胞融合試驗目的

把握細胞融合原理、應用PEG融合細胞的方法以及細胞融合率的計算。試驗用品

1.材料雞紅細胞

2.器材和儀器一般光學顯微鏡、一般低速離心機、恒溫水浴箱、刻度離心管、試管、載玻片、蓋玻片

3.試劑50％PEG(MW4,000)、Hanks液(pH7.4)、生理鹽水試驗內(nèi)容

一、原理

細胞融合(Cellfusion)，即在自然條件下或用人工方法(生物的、物理的、化學的)使兩個或兩個以上的細胞合并形成一個細胞的過程。人工誘導的細胞融合，在六十年月作為一門新興技術而進展起來。由于它不僅能產(chǎn)生同種細胞融合，也能產(chǎn)生種間細胞的融合，因此細胞融合技術目前被廣泛應用于細胞生物學和醫(yī)學討論的各個領域。

細胞融合的誘導物種類許多．常用的主要有滅活的仙臺病毒(Sendaivirus)，聚乙二醇

(Polyethyleneglycol，PEG)和電脈沖。目前應用最廣泛的是聚乙二醇，由于它易得、簡便，且融合效果穩(wěn)定。PEG的促融機制尚不完全清晰，它可能引起細胞膜中磷脂的酰鍵及極性基團發(fā)生構造重排。二、方法

1.取新奇雞血以0.85％生理鹽水制成10％的懸液。2.稱取0.5克PEG(MW=4,000)放入試管內(nèi)，在酒精燈上溶化之，快速參加0.5ml預熱的37℃Hanks液混勻制成50％的PEG溶液。放入37℃水浴中備用。

3.取上述10％的雞紅細胞懸液1ml放入離心管中，沿離心管壁滴加50％PEG溶液，邊加邊晃動試管使之混勻，37℃水浴20min。

4.取出離心管，緩慢滴加9mlHanks液以終止PEG的作用，800g離心3min，棄上清。5.用貼壁的液體重懸細胞，取一滴制成滴片，加蓋片鏡檢。結果：在高倍鏡下可以看到有兩個或兩個以上的雞紅細胞膜融合在一起，形成一個異核