色譜柱選擇與維護

色譜柱選擇與維護第1頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月

色譜柱的選擇與維護公司簡介如何選擇色譜柱A、固定相的選擇B、PH的選擇如何維護色譜柱廣州菲羅門科學儀器有限公司第2頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月中國全權總代理廣州菲羅門科學儀器有限公司第3頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月廣州菲羅門科學儀器有限公司

我們的宗旨:以最真誠和迅速的態(tài)度替用戶提供優(yōu)質服務,解決分析的問題和需要第4頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月1982成立于美國加州提供一系列非常完整的色譜柱極少數專門提供色譜耗材公司-液相和氣相免費提供超過10000應用譜圖免費提供技術支持免費提供技術資料第5頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月第6頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月2004LabvisionHPLCColumnReport2004年一月到六月Labvision調查美國1200實驗室結果使用柱子數量的比例Phenomenex 25%W 22.5%A 7.7%S 7.6%其他5%以下第7頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月如何選擇適當的色譜柱第8頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月理想的柱子可以適用于分析所有的化合物永遠不會壞理想分離度第9頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月決定峰分離度的三個要素峰保留時間選擇性(出峰的順序)柱效第10頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月如何得到最理想的分析結果流動相,被分析物,和固定相三者之間的作用影響峰保留時間和峰分離性.峰保留時間短一般峰型較好,但分離可能不理想.所以為了調節(jié)最理想的分析結果,可以改變下列的一項或數項條件:流動相固定相pH溫度

第11頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月固定相的選擇

疏水性的選擇極性的選擇苯基的選擇

第12頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月固定相疏水性考慮的要素

鍵合相的種類(C18,C8,Phenyl,etc)表面積鍵合相的鍵合率第13頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月Luna?C18(2)–月神品質可靠,世界暢銷的C18柱重復性高–可以同時提供3個不同的批次的柱子第14頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月Luna?C18(2)GinsengRootColumn: Luna5μmC18/ODS(2)Dimensions:150x4.6mmIDElutionType:GradientEluentA: Acetonitrile/water(15:85)EluentB: Acetonitrile/water(80:20)

FlowRate:1.5mL/minTemperature:25°CDetection: UV-VisAbs.–VariableWave.@205nmAppID1125第15頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月Luna?C8(2)&C5

減少疏水性化合物的保留時間 減少分析的時間第16頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月Synergi?Max-RP

疏水性和C18柱類似–但這是一支C12柱 提供比C18柱更尖的柱峰,尤其是分析堿性化合物第17頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月Synergi?Max-RPBasicDrugsatNeutralpH 第18頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月疏水性的比較C18phasesC8phase300?C18phase第19頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月極性選擇性的考慮首先考慮固定相的極性封尾,封端基團分析物的極性官能基

之間的作用第20頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月極性選擇性如何增加極性的選擇性

極性基團封端極性基團鑲嵌苯基第21頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月極性選擇性Columns: Luna?5mC18(2) YMC-Pack?5mProC18

Synergi?4mPolar-RP?(Ether-linkedPhenyl)

150x4.6mmMobilephase: 75:25Methanol:waterFlowrate: 1mL/minComponents: 1.Estrone 2.Estradiol第22頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月極性選擇性Luna?C18(2)Synergi?Polar-RP?YMC-Pack?ProC181+21+212第23頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月SynergiMax-RP-C12SynergiHydro-RP-C18SynergiFusion-RP–C18SynergiPolar-RP–PhenylSynergi?第24頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月SilicaAdvantageBalancingEfficiency&BackpressureLinearVelocity(mm/sec)PlateHeight(H)5μ4μ3μFlowRate(mL/min)PressureDrop(Bar)higherefficiencieslowerbackpressuresSynergi?第25頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月Synergi?第26頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月Synergi?Max-RP與C18柱性能類似的C12柱第27頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月Synergi?Polar-RP?保留極性和苯基化合物100%水溶液穩(wěn)定增加極性的選擇性第28頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月Synergi?Hydro-RP

疏水性非常強..

極性封端100%水溶性穩(wěn)定增進極性的選擇性第29頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月SynergiHydro-RPVS.Luna?C18(2)Synergi?Hydro-RP第30頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月

SynergiHydro-RPSynergiMax-RPMobilePhase: A:20mMKH2PO4,pH4.6 B:AcetonitrileGradient: A/B(95:5)toA/B(65:35)in15minFlowrate: 1.5mL/minSample: 1.Morphine 2.Hydromorphone 3.Codeine 4.Nalorphine 5.OxycodoneSynergi?Hydro-RP第31頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月Synergi?Fusion-RP

增加極性的選擇性同時減少疏水性的分析時間

在水溶液中100%穩(wěn)定在LC-MS下面基本無流失第32頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月min02468101214mAU0100200300400500VWD1A,Wavelength=210nm(S:\HPCHEM\1\DATA\SW1003\TEST0034.D)min02468101214mAU050100150200250300350VWD1A,Wavelength=210nm(S:\HPCHEM\1\DATA\SW1003\FUSI0046.D)RunningConditionsMobilephase:75:2520mMPotassiumphosphatepH2.5:AcetonitrileFlowrate: 1.5ml/minTemperature:AmbientDetection: 210nmInjection: 1.Maleicacid 2.Chlorpheniramine 3.Triprolidine 4.Diphenhydramine Synergi

Fusion-RP480?一般的C18柱極性增大疏水性減少第33頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月SynergiFusion-RPAvgsymm:0.91SynergiMax-RPAvgsymm:0.77LunaC18(2)Avgsymm:0.82RunningConditionsMobilephase:A:25mMTrispH9B:ACNGradient: 40%-70%Bin15minutesFlowrate: 1.0ml/minDetection: 230nmComponents: 1.Scopolamine,LogP= 2.Lidocaine,LogP=2.44 3.Noscapine,LogP=1.97 第34頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月苯基的選擇性影響被分析物和固定相之間產生的作用 Luna?Phenyl-Hexyl使用甲醇可以增加作用效果第35頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月Luna?Phenyl-Hexyl具有疏水性和苯基雙重的選擇性 重復性高和穩(wěn)定的苯基固定相第36頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月Luna?Phenyl-HexylGreenTea(綠茶)Column:Luna?5uPhenyl-HexylDimensions:250x4.6mmMobilePhaseA:0.2%AceticacidinWater/Acetonitrile(91:9)B:Water/Acetonitrile(20:80)Gradient:100%Atot=25min,(68:32)t=25mintot=35min,hold100%Bfor10min.FlowRate:1ml/minTemperature:350CAppID14436第37頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月苯基的影響Columns: Luna?5mC18(2)150x4.6mm Luna?5mPhenyl-Hexyl150x4.6mm Synergi?4mmPolar-RP150x4.6mmMobilephase: 50:50Acetonitrile:20mMPotassiumphosphate pH2.5Flowrate: 1.0mL/minComponents: Acidic,aromaticcompounds 1.Indoprofen 2.Ethylparaben 3.Naproxen 4.Diflunisal 5.Indomethacin 6.Ibuprofen第38頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月C18(2)Phenyl-HexylPolar-RP苯基的影響第39頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月pH的影響當選擇流動相的pH時,我們必需考慮到pH對分析物和柱子兩者的影響第40頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月pH對柱子的影響即使鍵合完美,封端完好,硅膠表面還是會存在Si-O-H的微酸游離基pKa~3.5如果流動相的pH是4以上,此Si-O-H的游離基會脫氫,成為帶負電的Si-O-(這會造成和分析物之間的極性反應,而造成峰拖尾)如果流動相的pH是8(或10)以上,硅膠會被破壞,造成柱子損害第41頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月pH對分析物的影響基本上,反相柱的峰保留時間長短,主要歸因于疏水性的非極性反應.所以要增長峰保留時間,必需選擇流動相的pH能夠讓分析物保持中性對酸性分析物(pKa~3-6),基本選擇pH在pKa以下對堿性分析物(pKa~9-11),基本選擇pH在pKa以上第42頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月對堿性分析物的分析建議多數硅膠柱沒法于高pH條件下穩(wěn)定,所以一般分析堿性化合物時,會選擇于pH~1.5-3下進行分析.在此pH條件下,硅膠表面的游離Si-O-H會保持中性,減少離子間的二極反應,因而減少峰拖尾,峰型較好但是在低pH條件下,堿性化合物的極性增加,疏水性減少,如果要增加峰保留時間,流動相的有機溶劑比率必需減少第43頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月對堿性分析物的分析建議在高pH條件下,堿性化合物可以保持中性,疏水性因而增加,但是如果峰保留時間太長,可以將流動相的有機溶劑比率增加,以縮短保留時間.增加選擇分析條件的彈性流動相的有機溶劑比率增加,以縮短保留時間外,并可以增進峰型(尖)但是問題是:如何在高pH(8以上)條件下分析?第44頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月高pH對堿性分析物的分析選擇使用高分子柱使用最新技術突破的

雙子星柱(GEMINI)第45頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月Gemini?C18–雙子星柱第46頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月Gemini?C18–雙子星柱在pH1-12范圍內很穩(wěn)定適用于酸,中,堿性化合物,特別是分析中,堿性化合物很理想可以更有彈性的調節(jié)pH以得到合適的分析條件第47頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月ParticleTechnologyPolymerSilicaTwin第48頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月Gemini?C18第49頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月流動相pH的影響pH1–12Stability第50頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月Gemini?

C18第51頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月pKa第52頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月pKa第53頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月總結

將固定相和被分析物之間的疏水性,極性,和苯基關系密切考慮以選擇適當的柱子和分析pH范圍第54頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月C18phasePhenylphase固定相的影響第55頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月HydrophobicityRankingPhaseDescription&ColumnFingerprintSorbentCharacteristics&ApplicationUse選擇柱子的絕佳參考資料第56頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月方法開發(fā)的絕佳參考資料第57頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月如何保護柱子和延長柱子的壽命使用保護柱柱子使用完后,立刻沖洗樣品前處理-過濾,固態(tài)萃取盡可能每一種分析方法使用一支專門柱第58頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月5%原理–C18柱的基本沖洗方法使用柱體積10倍的以下溶液沖洗,以0.1-0.2ml/min流速95/5=水:乙晴5/95=水:乙晴梯度沖洗-于分析結束后由5%乙晴增加到95%乙晴第59頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月保護柱套和柱芯第60頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月為何要使用保護柱將樣品中的顆粒和死吸附的雜質攔截以保護昂貴的分析柱可以增加柱子的壽命和保持柱效第61頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月一般的保護柱有何缺點增加系統(tǒng)的死體積峰變寬保留時間改變第62頁，課件共68頁，創(chuàng)作于2023年2月我們的保護柱套有何不同通用-適用于所有的柱子直接與柱子連接幾乎體積同時不改變峰保留絕對不與流動相作用使用容易價格合理第63頁，課件共68頁，創(chuàng)作于