血清乙型肝炎病毒e抗原檢測作業(yè)指導(dǎo)書

血清乙型肝炎病毒e抗原檢測作業(yè)指導(dǎo)書（ELISA）1.原理在微孔條上預(yù)包被被純化乙肝e抗體（HBeAb），配以酶標記抗原（HBeAb-HRP）及TMB等其它試劑，采用夾心法原理檢測人血清（或血漿）中乙肝e抗原（HBeAg）。2.標本采集2.1采集前病人準備：受檢者應(yīng)空腹2.2標本種類：血清或血漿2.3標本要求：采集病人靜脈血3ml（可用EDTA抗凝），室溫放置不超過4小時，分離血清備用。3.標本儲存：2-8℃保存不應(yīng)超過1周，-20℃不應(yīng)超過3個月，-70℃長期保存，應(yīng)避免反復(fù)凍融。4.標本運輸：密封，室溫運輸。5.標本拒收標準：污染、標本量不足、嚴重溶血或脂血標本不宜作此項檢測。6.試劑6.1試劑名稱：乙型肝炎病毒e抗原診斷試劑盒6.2試劑生產(chǎn)廠家：英科新創(chuàng)（廈門）科技有限公司。6.3包裝規(guī)格：96Test/Kit6.4試劑盒組成：HBeAg微孔板，HBeAg酶標記抗原，HBeAg陽性對照血清，HBeAg陰性對照血清，濃縮洗滌液，底物A，底物B，終止液，封口膜，自封袋。6.5試劑儲存條件及有效期：2-8℃避光保存，有效期9個月。7.儀器設(shè)備7.1儀器名稱：自動酶標儀7.2儀器廠家：KHB7.3儀器型號：ST3608.操作步驟8.1平衡：將試劑盒各組分取出，平衡至室溫（18-25℃），微孔板開封后，余者及時以自封袋封存。8.2配液：濃縮洗滌液配制前充分搖勻（如有晶體應(yīng)充分溶解），濃縮洗滌液和蒸餾水或去離子水按1：19稀釋后使用。8.3編號：將微孔條固定于支架，按序編號。8.4加樣：分別用加樣器在對照孔中加入陰、陽性對照血清各50l于相應(yīng)孔中。8.5加酶：分別在每孔中加入酶標記抗體50l，輕拍混勻。8.6溫育：置37℃溫育60分鐘，室溫平衡5分鐘。8.7洗滌：用洗滌液充分洗滌5次，洗滌完扣干（每次應(yīng)保持30-60秒的浸泡時間）。8.8顯色：每孔加入底物A、B各50l，輕拍混勻，置37℃暗處15分鐘。8.9終止：每孔加終止液50l，混勻。8.10測定：用酶標儀單波長450nm或雙波長450/630nm測定各孔OD值（用單波長測定時需設(shè)空白對照一孔，30分鐘內(nèi)完成測定，并記錄結(jié)果）。9.結(jié)果判斷與分析9.1臨界值（C.O.）的計算：臨界值=陰性對照孔OD值N×2.1，陰性對照OD均值大于0.1時應(yīng)重新試驗，小于0.05時以0.05計算。9.2結(jié)果判定：樣品OD值S/C.O>=1者為HBeAg陽性樣品OD值S/C.O<1者為HBeAg陰性10.質(zhì)量控制：每次試驗用含量為2NCU/ml的HBeAg質(zhì)控血清同步檢測，S/CO值應(yīng)在控制范圍內(nèi)；如失控，則要檢查試劑效期、儲藏溫度、試驗溫度是否正常、操作步驟是否正確，直至重新試驗使其在控。11.參考范圍：陰性或陽性12.臨床意義：HBeAg陽性可作為體內(nèi)HBV處在復(fù)制狀態(tài)及血清具有傳染性的一個標志；持續(xù)陽性則揭示轉(zhuǎn)為慢性。13.操作性能：靈敏度高，特異性好。14.方法局限性：樣品顯色深淺與樣品中抗原的含量沒有一定正相關(guān)。15.注意事項15.1每板建議設(shè)陰陽性對照血清各兩孔，設(shè)空白對照時，不加樣品及酶標記抗體，其余各步相同。15.2洗滌時各孔均須加滿，防止孔口內(nèi)有游離酶未能洗凈。15.3加試劑前應(yīng)將試劑瓶翻轉(zhuǎn)數(shù)次，使液體混勻。如果滴加，滴加前應(yīng)棄去1—2滴。滴加時瓶身應(yīng)保持垂直，以使滴量準確。注意勿將試劑滴在孔壁上。15.4所有樣品都應(yīng)按傳染源處理。15.5封口膜使用說明15.5.1微孔板拆封后，在取出當天所需的微孔條后，其余微孔條可以封口膜封存以避免受潮。在封存時，注意勿把封口膜粘貼到微孔條底部，以免影響其透光性。15.5.2微孔板溫育時，以封口膜覆蓋孔口，可避免其他因素對實驗帶來的非預(yù)期的影響。15.6不同品名、不同批號的試劑不可混用，以免產(chǎn)生錯誤結(jié)果。16.當檢測系統(tǒng)（儀器）不能工作時，所采取的補救措施：應(yīng)保證所有操作步驟正確無誤；可以比對陰陽對照，肉眼判讀；無法準確判讀者，應(yīng)留樣待系統(tǒng)正常后復(fù)查。17.