優(yōu)選中藥淫羊藿總黃酮含量測定方法

優(yōu)選中藥淫羊藿總黃酮含量測定方法優(yōu)選中藥淫羊藿總黃酮含量測定方法

：陳永剛劉曉涵林勵區(qū)計明肖鳳霞羅穗紅

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優(yōu)選中藥淫羊藿總黃酮含量測定方法

上述方法測定其含量，結果其含量的均值為25.32g/kg，sR為0.25%，表明該方法的重復性較好。

2.1.6穩(wěn)定性試驗取同一供試品溶液，分別在0、15、30、45、60min測定其汲取度，結果其吸光度均值為0.1328，sR為0.36%，說明供試品溶液在60min內是穩(wěn)定的。

2.1.7加樣回收率試驗精密稱取已測含量的淫羊藿藥材(批號：080731，含量27.18g/kg)，加入淫羊藿苷進行試驗，結果其平均回收率為

101.01%，sR為3.17%，結果見表1。表1加樣回收率試驗(藥典法)

2.1.8總黃酮測定分別取供試品溶液和對比品溶液，以甲醇為空白，采納紫外可見分光光度法，在270nm波特長測定吸光度，計算，結果3批藥材中總黃酮含量均值為27.21g/kg。結果見表4。

2.2檢驗一法測定淫羊藿中總黃酮含量

2.2.1蘆丁對比品溶液的制備精密稱取經(jīng)105℃干燥至恒質量的蘆丁標準品15.0mg，加甲醇溶解并定容至100mL，配成0.15mg/mL的蘆丁標準溶液。

2.2.2樣品溶液的制備取本品葉片粉末(過3號篩)1.0g，加入80mL體積分數(shù)70%乙醇溶液，按文獻方法制備供試品溶液，備用。

2.2.3標準曲線的繪制分別精密量取蘆丁標準溶液0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0mL,相當于蘆丁0、75、150、300、450、600μg,移入10mL刻度比色管中，加入體積分數(shù)30%乙醇液至5mL，各加50g/L的亞硝酸鈉溶液0.3mL,振搖后放置5min,加入100g/L的硝酸鋁溶液0.3mL搖勻后放置6min，加1.0mol/L氫氧化鈉溶液2mL,用體積分數(shù)30%乙醇定容至刻度，以零管為空白，在510nm處測定吸光度，以對比品溶液中蘆丁的量為橫坐標，以吸光值為縱坐標，繪制標準曲線，得直線回歸方程為Y=1.136X+0.0106(r=0.9991，線性范圍0.0782～0.6256mg)。

2.2.4精密度試驗取對比品溶液(0.03128mg/mL)，連續(xù)測定5次，結果其汲取度的均值為0.3705，sR為0.11%，表明精密度良好。

2.2.5重復性試驗精密稱取同一供試品1.0g，平行5份，按上述方法測定其含量，結果其含量均值為9.722g/kg，sR為0.25%，表明該方法的重復性較好。

2.2.6穩(wěn)定性試驗取同一供試品溶液，分別在0、15、30min測定其汲取度，結果其吸光度均值為0.6766，sR為0.50%，說明供試品溶液在30min內穩(wěn)定。

2.2.7加樣回收率試驗精密稱取已測含量的淫羊藿藥材(批號:080731，含量9.742g/kg)，加入蘆丁進行試驗，結果其平均回收率為100.95%，sR為4.17%，結果見表2。表2加樣回收率試驗(檢驗一法)

2.2.8總黃酮測定取"2.2.2"項下樣品溶液3mL，至10mL容量瓶中，按"2.2.3"項下方法自"各加50g/L亞硝酸鈉溶液0.3mL,"起，依法測定吸光度，代入回歸方程，計算含量，結果3批藥材總黃酮含量均值為9.22g/kg。結果見表4。

2.3檢驗二法測定淫羊藿中總黃酮含量

2.3.1蘆丁對比品溶液的制備精密稱取經(jīng)105℃干燥至恒質量的蘆丁標準品5.0mg，加甲醇溶解并定容至100mL，即得0.050mg/mL蘆丁標準溶液。

2.3.2樣品溶液的制備取藥材1.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入體積分數(shù)95%乙醇25mL，根據(jù)文獻方法制備供試品溶液，備用。

2.3.3標準曲線的繪制吸取蘆丁標準溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL于10mL比色管中，加甲醇至刻度，搖勻，于波長360nm處比色。以對比品溶液濃度為橫坐標，以吸光值為縱坐標，繪制標準曲線，得直線回歸方程為Y=0.0273X-0.0102;r=0.9990。線性范圍為0.00495～0.02475mg/mL。

2.3.4精密度試驗取蘆丁對比品溶液(0.0198mg/mL)，連續(xù)測定5次，結果其吸光度均值為0.5440，sR為0.04%，表明精密度良好。

2.3.5重復性試驗精密稱取供試品1.0g，平行5份，制備供試品溶液，于波長360nm處測定其吸光值，結果其含量均值為7.796g/kg，sR為0.53

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%，表明重現(xiàn)性較好。

2.3.6穩(wěn)定性試驗取同一供試品溶液，分別在0、15、30、45、60min時測定其汲取度，結果其吸光度均值為0.3318，sR為0.19%，說明供試品溶液在60min內是穩(wěn)定的。

2.3.7加樣回收率試驗精密稱取已測含量的淫羊藿藥材(批號:080731，含量7.742g/kg)，加入蘆丁進行試驗，結果其平均回收率為102.63%，sR為5.24%，結果見表3。

2.3.8總黃酮含量測定分別取3批淫羊藿樣品1.0g，精密稱定，按"2.3.2"項下制備供試品溶液，于波長360nm處測定汲取值。代入回歸方程，計算試樣中總黃酮含量。結果3批樣品的平均含量為8.21g/kg,結果見表4。表3加樣回收率試驗(檢驗二法)表43種方法測定淫羊藿樣品中總黃酮含量比較

3爭論

3.1測定波長的選擇對"藥典法"測定波長的選擇，采納淫羊藿苷的甲醇溶液在波長200～800nm之間進行掃描，結果在270nm有最大汲取。同法確定了"檢驗一法"測定波長在510nm有最大汲取;"檢驗二法"測定波長在360nm有最大汲取，均與文獻報道測定波長全都。

3.2"檢驗一法"和"檢驗二法"樣品溶液的制備均采納聚酰胺柱層析純化總黃酮類化合物，主要由于黃酮類化合物大多具有酚羥基，可被聚酰胺吸附，而與不含酚羥基的成分分別，也能排解葉綠素的干擾。因此，是否加顯色劑對其含量測定無顯著影響，兩法測定結果較接近。

3.3測定方法的選擇測定結果顯示"藥典法"測得值顯著大于"檢驗一法"和"檢驗二法"測

得值。主要由于"藥典法"測定時無需顯色，在270nm有汲取的化合物均可被測定,故結果偏大。"檢驗一法"測定須經(jīng)過NaNO2Al(NO3)3NaOH顯色，只有具有鄰二酚羥基的黃酮類化合物才能被檢測出