第三章中藥制劑的理化鑒別技術講義課件

中藥制劑檢驗的程序？取樣樣品前處理性狀檢查鑒別檢查含量測定填寫檢驗報告書第三章中藥制劑理化鑒別技術一、理化鑒別的意義

中藥制劑的理化鑒別是利用其所含藥味中某種或其類指標性成分的理化性質(zhì)，通過經(jīng)典的分析方法和儀器分析方法，檢測有關成分在制劑中是否存在，進而對所含藥味與處方的一致性作出判斷，達到鑒定藥品真?zhèn)沃康摹?/p>

二、理化鑒別的特點1、選用指標性成分2、對制劑中某些假冒藥味的使用，有時缺乏鑒別能力例如，黃連、黃柏、三顆針都含有小檗堿，生產(chǎn)中用黃柏或三顆針代替黃連三、理化鑒別的方法

一般化學反應法微量升華法熒光鑒別法分光光度法薄層色譜法氣相色譜法高效液相色譜法第三節(jié)理化鑒別法第二節(jié)一般化學反應法

一.概述一般化學反應法是利用檢測試劑與制劑中的指標成分發(fā)生化學反應，根據(jù)所產(chǎn)生的顏色、沉淀或氣體等現(xiàn)象，來判斷某些成分或某些藥味的有無。一般化學反應法即通常所說的顯色反應和沉淀反應

1.排除假陽性或假陰性，進行預處理。2.選擇專屬性較強的檢測試劑，還可以做陽性或陰性對照試驗加以驗證3.一般化學反應對于備件成分一般只能鑒別其“類”，而不能鑒別其“種”例如，鹽酸-鎂粉反應，鑒別大山楂丸中的山楂，負反應——不含黃酮類成分正反應——含有黃酮類成分，但不一定就是山楂（一）生物堿概念和特點指生物體內(nèi)一類含氮的有機化合物；大部分為雜環(huán)化合物且氮原子在雜環(huán)內(nèi)；多數(shù)具有堿性且能和酸結合生成鹽；多數(shù)有較強的生理活性。莨菪麻黃金雞納麻黃堿番木鱉漢防己苦參秋水仙延胡索三尖杉烏頭附子沉淀反應（1）碘化鉍鉀反應反應

紅棕色沉淀（2）碘化汞鉀反應

類白色沉淀

（3）硅鎢酸反應

白色沉淀（4）苦味酸反應

黃色結晶性沉淀酸性條件（二）黃酮類化合物2-苯基色原酮（黃酮）色原酮2-苯基色原酮1.黃酮類：

黃酮類即以2-苯基色原酮為基本母核，且3位上無含氧基團取代的一類化合物。

2.黃酮醇類：

黃酮醇類的結構特點是在黃酮基本母核的3位上連有羥基或其他含氧基團。1黃酮和黃酮醇木犀草素，抗菌作用黃芩苷，清熱解毒槲皮素：R=H蘆?。篟=蕓香糖最常見的黃酮醇類化合物

黃酮類flavones

黃酮醇類flavonols

黃芩為清熱解毒類中藥，抗菌成分主要有黃芩苷(baicalin)、次黃芩素等。常見中藥清熱解毒、抗菌

豆科植物槐米中含有蘆丁和槲皮素。具有擴冠和抗病毒作用。2、二氫黃酮和二氫黃酮醇類二氫黃酮類：

二氫黃酮類結構可視為是黃酮基本母核的2、3位雙鍵被氫化而成。二氫黃酮醇類：

二氫黃酮醇類具有黃酮醇類的２、３位被氫化的基本母核，且常與相應的黃酮醇共存于同一植物體中。

二氫黃酮類二氫黃酮醇類甘草素

對消化性潰瘍有抑制作用

水飛薊素

保肝作用三、查耳酮和二氫查耳酮類查耳酮類

查耳酮類的結構特點是二氫黃酮C環(huán)的1、2位鍵斷裂生成的開環(huán)衍生物，即三碳鏈不構成環(huán)。二氫查耳酮類

二氫查耳酮類為查耳酮三碳鏈的雙鍵被氫飽和。

查耳酮類二氫查耳酮梨根苷4、異黃酮和二氫異黃酮類異黃酮類：異黃酮類母核為3-苯基色原酮的結構，即B環(huán)連接在C環(huán)的3位上。二氫異黃酮類：

二氫異黃酮類具有異黃酮的2、3位被氧化的基本母核。

異黃酮類二氫異黃酮類

魚鱗酮

農(nóng)業(yè)殺蟲劑大豆異黃酮

5.雙黃酮類由二分子黃酮衍生物聚合生成的二聚物，多分布于裸子植物中。銀杏中含有多種雙黃酮，如銀杏素。銀杏素6、花色素和黃烷醇類花色素類

矢車菊素：R1=OH,R2=H飛燕草素：R1=R2=OH天竺葵素：R1=R2=H錦葵花素：R1=R2=OCH3

是使花、葉、果、莖等呈現(xiàn)藍、紫、紅等顏色的色素。以苷的形式存在于細胞液中，經(jīng)水解可生成苷元——花色素及糖。環(huán)上無羰基，C環(huán)上氧原子以陽離子存在常見植物矢車菊素R1=OHR2=H飛燕草素R1=R=OH天竺葵素R1=R2=H

類別特點或組間區(qū)別組內(nèi)區(qū)別黃酮和黃酮醇2-苯基色原酮3-OH

（C2-C3雙鍵）二氫黃酮和2-苯基色原酮3-OH二氫黃酮醇（C2-C3單鍵）異黃酮和二氫異黃酮 3-苯基色原酮 C2-C3雙鍵和單鍵查耳酮和二氫查耳酮 C環(huán)開環(huán)3碳鏈為雙鍵和單鍵橙酮C環(huán)為五元環(huán) 花色素和黃烷醇 無4位羰基離子和分子其他類 均有色原酮結構 總結：各類黃酮類化合物的特點和區(qū)別槐米銀杏陳皮雌激素樣作用大豆、葛根中的大豆素等異黃酮類成分有雌激素樣作用1.鹽酸-鎂粉（或鋅粉）反應：黃酮、黃酮醇、二氫黃酮及二氫黃酮醇——橙紅～紫紅色查耳酮、橙酮、兒茶素類及異黃酮類——不反應2.四氫硼鈉反應（二氫黃酮、二氫黃酮醇類的專屬性檢識反應）

二氫黃酮類——紅色～紫色（三）蒽醌類化合物一、定義：是指分子內(nèi)具有不飽和環(huán)己二酮結構的一系列化合物，主要有苯醌、萘醌、菲醌和蒽醌四種類型。鄰菲醌對菲醌鄰菲醌α-萘醌蒽醌茜草素大黃素大黃番瀉苷A—致瀉成分番瀉葉

堿顯色反應

：

紅色蒽醌類化合物黃色OH-H+（四）皂苷1.定義

皂苷是一類結構復雜、性質(zhì)特殊的苷類化合物,因其水溶液振搖后產(chǎn)生大量、似肥皂樣的持久泡沫，故名皂苷。主要中藥有桔梗、遠志、人參、三七、絞股藍、甘草、柴胡、商陸等。（2）醋酐-濃H2SO4反應

甾體皂苷污綠色；而三萜皂苷紅、紅紫色。用此法可以初步區(qū)別甾體皂苷和三萜皂苷。（1）泡沫反應樣品水溶液振搖后，產(chǎn)生持久性泡沫鑒別反應（3）濃硫酸反應

呈現(xiàn)紅、紅紫色（4）三氯化銻或五氯化銻反應氯仿液呈紫藍色（5）氯仿-濃硫酸反應氯仿層出現(xiàn)紅色或藍色，并具有綠色熒光（五）香豆素、內(nèi)酯類和酚類補骨脂秦皮從香豆素名稱上可以想象一下:香:豆:有芳香環(huán)有揮發(fā)性豆科香味定義順式鄰羥基桂皮酸分子內(nèi)脫水而成的內(nèi)酯-H2O順式鄰羥基桂皮酸苯駢ａ—吡喃酮反式鄰羥基桂皮酸（1）氯亞氨基-2,6-二氯醌-四硼酸鈉反應（Gibbs反應）：呈現(xiàn)藍色（2）異羥污酸鐵反應：呈紅色（3）重氮鹽偶合反應：呈紅色鑒別反應（六）揮發(fā)性成分3.鑒別反應香草醛-硫酸反應，呈紅色、紅紫色1.主要指藥材中的揮發(fā)油及小分子的萜類化合物2.常見中藥：薄荷、藿香、肉桂、桂枝、生姜揮發(fā)性成分在煎煮法煎藥的時候應怎么入藥（七）礦物藥1.朱砂（HgS）采用銅片反應，酸性條件下，置換出Hg2.石膏、牡蠣、海螵蛸等（含鈣鹽）采用草酸銨反應，生成草酸鈣沉淀，溶于鹽酸，不溶于醋酸3.雄黃（As2S2）（1）氯化鋇沉淀法（檢出S）（2）硫化氫反應（檢出As）（八）動物藥常含有蛋白質(zhì)或氨基酸，常使用茚三酮反應，顯紫紅色你知道動物藥有哪些動物藥有阿膠、鹿茸、海馬等二、儀器與試劑

試管、蒸發(fā)皿、坩堝、濾紙、水浴鍋、電爐試管坩堝蒸發(fā)皿三、操作方法

（一）供試液的制備1.固體制劑：適當?shù)娜軇┨崛?；例如：檢識氨基酸、蛋白質(zhì)，用水浸泡過夜檢識糖類、苷類、鞣質(zhì)，用60℃的熱水提取

2.液體制劑：直接取樣檢識或經(jīng)有機溶劑萃取分離后再行檢測。想一想，揮發(fā)性成分和升華性可以用什么方法提取？水蒸氣蒸餾法和升華法（二）操作方法1.試管反應：取供試液于試管中，加入試劑或試藥進行反應；2.蒸發(fā)皿或坩堝：供試液置蒸發(fā)皿或坩堝中，揮去溶劑，滴加試劑于殘留物進行檢識。四、注意事項1.試管應傾斜，試液應沿試管內(nèi)壁逐滴加入，滴管下口不得觸及內(nèi)壁2.振搖應緩慢，不得上下振搖3.白色背景下觀察沉淀或顏色，如沉淀為白色或類白色則需在黑色背景下觀察4.加熱有機溶液絕對不允許使用明火熱源五、記錄六、結果判斷將反應現(xiàn)象或結果與藥品標準對照，若一致則符合規(guī)定。若不一致則判定為不符合規(guī)定。二、方法（一）一般化學鑒別法：4.實例——抗骨增生丸的鑒別

【處方】由熟地黃、肉蓯蓉(蒸)、狗脊(鹽制)、女貞子(鹽制)、淫羊藿、雞血藤、萊菔子(炒)、骨碎補、牛膝?！捐b別方法】（1）鑒別肉蓯蓉中的生物堿

（2）鑒別淫羊藿中的黃酮類成分：樣品酸性乙醇濾液蒸干5%硫酸溶解回流提取過濾取濾液紅棕色沉淀白色沉淀白色沉淀碘化鉍鉀碘化汞鉀硅鎢酸樣品濾液1ml甲醇浸提鹽酸3～4滴鎂粉紅棕色第三節(jié)升華鑒別法一、概述

利用某些成分的升華性，在一定溫度下將其從制劑中升華分離出來，并以升華物所具有的某些理化性質(zhì)作為制劑鑒別的依據(jù)。

升華物的鑒別方法主要有：

利用顯微鏡觀察晶型；

可見光下觀察顏色；紫外燈下觀察熒光；加入合適的試液與其發(fā)生顯色反應或熒光反應。什么叫升華？二、儀器與試劑三、操作方法：微量升華法、坩堝法或蒸發(fā)皿法微量升華法：金屬片上放一金屬圈，圈內(nèi)放置藥材粉末，圈上覆蓋載玻片，在石棉網(wǎng)下用酒精燈緩緩加熱，至載玻片上有升華物凝集。將載玻片反轉后，置顯微鏡下觀察結晶形狀、色澤，或取升華物加試液觀察反應。第三節(jié)升華鑒別法微量升華裝置四、注意事項

制劑中若有2種以上的藥味都含有升華物，升華的溫度不同，可控制加熱的溫度分段收集升華物，分別進行鑒定；樣品粉末用量一般約0.5g，過少不易產(chǎn)生足夠量的升華物；可在載玻片上滴加少量水降溫，促使升華物凝集析出；無金屬片，可用載玻片代替。第三節(jié)升華鑒別法怎么樣通過酒精燈來控制不同的溫度

實例——牛黃解毒片中冰片的鑒別

【處方】人工牛黃、雄黃、石膏、大黃、黃芩、桔梗、冰片、甘草?！捐b別方法】取本品1片，研細，進行微量升華，所得白色升華物，加新配制的1%香草醛硫酸溶液1～2滴，液滴邊緣漸顯玫瑰紅色。冰片升華物冰片升華物顯微觀冰片升華物顯色第三節(jié)升華鑒別法一.概述熒光鑒別法是利用制劑中某些成分，如黃酮類、蒽醌類、香豆素類等在可見光或紫外光照射下能產(chǎn)生一定熒光的性質(zhì)，對中藥制劑進行鑒別。第四節(jié)熒光鑒別法舉例：大黃棕色至棕紅色熒光土大黃亮藍色熒光

紫外燈下二、儀器與試劑

紫外光燈、濾紙、回流裝置、錐形瓶、燒杯、水浴鍋三、操作方法

取制劑的提取液點在濾紙上或加入蒸發(fā)皿中，置紫外光燈下觀察所產(chǎn)生的熒光。必要時可在供試品中加酸、堿或其他試劑，再觀察熒光及其變化。UV第四節(jié)熒光鑒別法四.注意事項熒光強度較弱，故一般需在暗室中觀察熒光；供試液一般用毛細管吸取，少量多次點在濾紙上，使斑點集中且具有一定濃度；紫外光對人的眼睛和皮膚有損傷，操作者應避免與紫外光較長時間接觸；試驗時，一般將供試品置于紫外光燈下約10cm處觀察所產(chǎn)生的熒光。紫外光波長一般為365nm，如用254~265nm波長觀察熒光，應加以說明。第四節(jié)熒光鑒別法二、方法（三）熒光鑒別法4.實例——復方雞血藤膏

【處方】滇雞血藤膏粉、川牛膝、續(xù)斷、紅花、黑豆、糯米、飴糖?！捐b別方法】取本品粉末1g，加水l0ml，加熱10分鐘，濾過，濾液置紫外光燈（365nm）下觀察，顯淡藍色熒光。第四節(jié)熒光鑒別法第五節(jié)薄層色譜鑒別法一、概述（一）原理使用本法鑒別中藥制劑，通常在同一塊薄層板上點加供試品和對照品，在相同條件下展開，顯色檢出色譜斑點后，將所得供試品與對照品的色譜圖進行對比分析，從而對藥品進行定性鑒別。（二）固定相選擇合適的吸附劑是吸附色譜法成功的關鍵。良好的吸附劑應具備：①不與樣品及流動相發(fā)生化學反應②不溶于流動相③具有較大的表面積和一定的吸附能力。④具有一定的細度，顆粒要均勻。極性吸附劑：氧化鋁、硅膠、聚酰胺、硅藻土、硅酸鎂非極性吸附劑：活性炭1.氧化鋁①是一種吸附力很強的極性吸附劑。②含水量越高，吸附能力越弱。③根據(jù)含水量的多少，分為I~V級?？赏ㄟ^活化或者去活化得到不同活度級別的氧化鋁。通常在400℃左右加熱6小時，可得I~II級氧化鋁2.硅膠①吸附力比氧化鋁弱。②吸附能力與游離硅醇基的數(shù)量和含水量有關。③含水量>17%則失去吸附能力，不可做吸附劑。硅膠的活化：將含水硅膠在100~110℃溫度下加熱30min。溫度超過500℃硅膠將失去活性。市售硅膠硅膠G（加入粘合劑煅石膏14%~22%硅膠F（加入了紫外光下能產(chǎn)生熒光的物質(zhì)）硅膠H（不含粘合劑）硅膠GF（含粘合劑和熒光物質(zhì)）硅膠HF（不含粘合劑，含有熒光物質(zhì)）硅膠S（含淀粉）（三）流動相①由一種或幾種溶劑混合組成。②解吸附：把物質(zhì)從固定相上洗脫下來。常用的流動相極性順序：

水>甲醇>乙醇>丙酮>正丁醇>乙酸乙酯>三氯甲烷>乙醚>苯>四氯化碳>環(huán)己烷>石油醚選擇原則：相似相溶極性大小水親水性有機溶劑甲醇>乙醇>丙酮親脂性有機溶劑弱親脂性有機溶劑：正丁醇>乙酸乙酯強親脂性有機溶劑：三氯甲烷>乙醚>苯>石油醚（三）溶劑（流動相）流動相的選擇：四、操作步驟1.儀器與材料

薄層板及固定相涂布器點樣器展開箱顯色與檢測儀器第五節(jié)薄層色譜鑒別法（1）

薄層板具有一定機械強度、化學惰性、耐一定溫度、表面平整、厚度均勻，價格合理，常用為玻璃板。玻璃板的常用規(guī)格：5cm×20cm、10cm×20cm、20cm×20cm，要求光滑、平整、洗凈后不附水珠、干燥。第五節(jié)薄層色譜鑒別法

（2）固定相

硅膠：常用極性吸附劑，具表面活性中心，略帶酸性；氧化鋁：常用極性吸附劑，具表面活性中心，略帶堿性；硅藻土：中性吸附劑；纖維素：液-液分配色譜擔體（水為固定液），具一定粘性；聚酰胺：特殊有機薄層材料。第五節(jié)薄層色譜鑒別法硅膠G(含粘合劑煅石膏)，GF254(含254nm熒光劑)，硅膠H(不含粘合劑)，硅膠HF254

（3）涂布器有手工、半自動、全自動薄層涂布器第五節(jié)薄層色譜鑒別法（4）點樣器材

常用微升毛細管或手動、半自動、全自動點樣器微升毛細管全自動點樣器手動點樣器第五節(jié)薄層色譜鑒別法

（5）展開箱

上行展開可用適合薄層板大小的專用平底或雙槽展開缸，展開時須能密閉；水平展開用專用的水平展開缸。第五節(jié)薄層色譜鑒別法（6）顯色與檢測儀器顯色有噴霧法及浸漬法噴霧瓶薄層色譜數(shù)碼相機成像系統(tǒng)第五節(jié)薄層色譜鑒別法

2.操作方法

制板點樣展開顯色與檢視第五節(jié)薄層色譜鑒別法

2.操作方法（1）制板

市售薄層板：臨用前，110℃活化30min氧化鋁和硅膠需要飽和，

聚酰胺薄膜不用活化自制薄層板一份固定相研磨混勻涂布器三份水（或含有黏合劑的水溶液）自然干燥用前活化鋪制薄層板第五節(jié)薄層色譜鑒別法

2.操作方法（2）點樣注意：點樣時勿損傷薄層表面第五節(jié)薄層色譜鑒別法

2.操作方法（3）展開

展開劑的制備：新鮮配制展開：點樣后的薄層板放入加有展開劑的層析缸中，密閉，一般上行展開，薄層板浸入展開劑深度一般要求溶劑最初的前沿距原點約5mm，展開至規(guī)定展距后立即將薄層板取出，晾干，以備檢測。展距：一般8～15cm，高效板5～8cm預吸附中展開中第五節(jié)薄層色譜鑒別法

2.操作方法（4）顯色與檢視顯色：噴霧法或浸漬法噴霧顯色法熒光顯色法第五節(jié)薄層色譜鑒別法

2.操作方法（4）顯色與檢視

熒光淬滅斑點熒光淬滅法的GF254薄層板日光檢視紫外光365nm或254nm下檢視第五節(jié)薄層色譜鑒別法Rf值（比移值）計算：Rf值=從基線至樣品斑點中心的距離從基線至展開劑前沿的距離成分1=d1d成分1=d2d

4.注意事項

制備薄層板應清潔干燥后制板；預制薄層板選擇符合要求的產(chǎn)品；使用新鮮溶劑配制展開劑；配制多元展開劑時，各種溶劑應分別量取后再混合。

第五節(jié)薄層色譜鑒別法（二）特點1.簡便、快速、易普及、具有分離和分析雙重功能，專屬性較強。2.系統(tǒng)適應性實驗

靈敏度、分離度、重復性（1）靈敏度供試品、對照品、稀釋若干倍的對照品，也能顯示清晰斑點（2）分離度（3）重復性3.對照物的設置（1）對照物分為對照品、對照藥材和對照提取物三種（2）設置方式a.設置一種或數(shù)種對照品b.設置對照提取物c.設置一種或數(shù)種對照藥材d.同時設置對照品和對照藥材

例：首烏丸的薄層色譜鑒別

提取方法：甲醇提取固定相：硅膠G+0.5%NaOH展開劑：甲苯-乙酸乙酯-甲酸（15:2:1）1大黃素2大黃素甲醚3-4何首烏對照藥材5首烏丸首烏丸的薄層色譜第五節(jié)薄層色譜鑒別法

紫外-可見分光光度法

1.概述

中藥制劑中有些化學成分在可見紫外光區(qū)有選擇性吸收，顯示特征吸收光譜，在一定條件下利用這些吸收光譜的特征，以鑒別制劑中的某些成分。第六節(jié)紫外-可見分光光度法

2.方法

規(guī)定吸收波長法對照品對比法規(guī)定吸收波長和吸光度比值法多溶劑光譜法

3.注意事項

分光光度計應進行準確度檢定后使用；使用配對吸收池，若使用不配對吸收池，應在所測量波長范圍內(nèi)進行基線校正；設定的參數(shù)應合理；測定時應將樣品室蓋關嚴。

4.例：（1）規(guī)定吸收波長法：樣品經(jīng)適當處理后，測定吸收光譜，在一定波長處有最大吸收。復方丹參滴丸中丹參的鑒別：在283nm的波長處有最大吸收。復方丹參滴丸紫外光譜圖第三節(jié)理化鑒別法

（2）對照品對比法：取對照品或對照藥材及供試品經(jīng)處理后，制成對照品及供試品溶液，分別測定吸收光譜，比較二者吸收光譜的一致性。

大山楂丸的紫外光譜鑒定：樣品與山楂對照品在280±2nm處皆有最大吸收，在254±4nm處皆有最小吸收。大山楂丸的紫外光譜第七節(jié)氣相色譜鑒別法

一、概述

在一定的色譜條件下，相同物質(zhì)應具有相同的色譜特性（分配系數(shù)）和色譜行為(保留時間）

保留時間：從進樣開始，到該組分色譜峰頂點的時間間隔。（1）適應范圍：適合分析制劑中的揮發(fā)性成分

（2）原理：利用保留值進行鑒別，即在同一色譜條件下，供試品應呈現(xiàn)與對照品保留時間相同的色