全內(nèi)反射熒光顯微鏡介紹課件

全內(nèi)反射熒茫顯撒鏡展局展優(yōu)勢應用分型及結(jié)構(gòu)基原理發(fā)展歷史發(fā)展歷史英光里微鏡的概念細胞中有些物質(zhì),如葉綠素等,受紫外線照射后可發(fā)光;另有一些物質(zhì)本身雖不能發(fā)樊光,但如用熒光染料或樊光抗體染色后,經(jīng)紫外線照射亦可發(fā)熒光,熒光顯微鏡就是對這類物質(zhì)進行定性和定量研究的工具之一。發(fā)展歷史全內(nèi)反動英光顯微術(shù)的發(fā)展歷程在細胞生物學方面,傳統(tǒng)光學顯微鏡始終不能解決生物枰本星微中的幾個重要問題:1.顯微圖像的信噪此不高;2.光娠對生物樣本照射的損傷3光學衍射所致的分辨極限(R≥0.61λ/nsin6):傳統(tǒng)的光學星微饒由于受到光曈遠場衍射效應的彩響存在分辨極限瑞利將之歸納為R≥0.61λ/nsin(u/2),其中R為分辨力,λ為成像光破波長,nin如/2)為物透鏡的教值孔徑,即NA值,u為孔徑角,因此光學星微鏡空間分辨極限~250nm全內(nèi)反射英光顯微術(shù)的發(fā)展歷程近年來人們開發(fā)出了一系列光學顯微鏡。其中,全內(nèi)反射熒光顯微術(shù)Totalinternalreflectionfluorescencemicrosc。py,TRFM是近年來新興的一種光學成像技術(shù)。肌纖后量,肌物探力的產(chǎn),光所正地動蛋點動跡所)195年5(19年Yanagida小Moerner小組該項技術(shù)已經(jīng)應用到組用TRFM技又用這項技術(shù)手)三華3單分子的研究中術(shù)首次在液體實現(xiàn)了限制在溶液中得到了丙烯酰胺膠體反射熒光熒光標記的單將金的米孔中的子的菱步個蛋白質(zhì)分子單分子的三維全新的成像。成像。90年代80年代早1965年20新型物鏡透鏡、聚光如Aeod等生物物理學家對TRFM技術(shù)Hirschfield世鏡和超靈敏探測器的世及基本原理進行描完成了紀出現(xiàn),使TRFM技術(shù)紀述并探索了其生第一個得到充分發(fā)展「物應用。全內(nèi)反射熒光實驗基本原理全內(nèi)反射熒光顯微鏡的基本設計思路全內(nèi)反射熒光顯微鏡的基本原理基原理全內(nèi)反射熒光顯微鏡的基本原理全內(nèi)反射熒光顯微鏡的基本設計思路熒光激發(fā)原理金鮮殺全內(nèi)反射熒光顯微術(shù)是利用全內(nèi)反射產(chǎn)生的消逝波激發(fā)樣品從而使樣品表面數(shù)百納米厚的薄層內(nèi)的熒光團受到激發(fā)熒光成像的信噪比大大提高?？梢钥吹綐悠繁砻?單分子的活動情況。這種方法的成像裝置簡單,極易和其它成像技術(shù)、探測技術(shù)相結(jié)合,目前已成功的實現(xiàn)100nm甚至更低的空間分辨率。熒光激發(fā)原理<全的別Refractedsn定律:nisine1=n2sin82TR當n1大于∩2時,全反射就可能發(fā)生:62=9o°6c=sin-1(n2/n1)即所有的入射光線全部反射出來,稱為全內(nèi)反射熒光激發(fā)原理<Refracted非均勻波e,TIRn1>n2沿