血清尿素UREA測定

血清尿素UREA測定1檢驗目的指導本室工作人員規(guī)范操作本檢測項目，確保檢測結(jié)果的準確。2實驗原理在下述反應中，NAD+生成速率與樣本中尿素（尿素氮）的濃度成正比。通過在340nm處測定固定時間間隔內(nèi)吸光度的下降速率，即可測得樣本中尿素（尿素氮）的濃度。尿素酶尿素+2H2O2NH4＋+2HCO3－谷氨酸脫氫酶NH4＋+α-酮戊二酸+NADH+H+L-谷氨酸+NAD＋+H2O3標本：3.1病人準備：血清無特殊要求。要留取24小時尿樣。3.2類型：血清、血漿（不可使用肝素銨）、新鮮尿液。無溶血和凝塊的血清，如果必須使用血漿，建議使用無銨離子的抗凝血劑，如EDTA和肝素鈉。用新鮮尿液作樣品時，用蒸餾水作1:100稀釋。3.3標本存放：血清或血漿穩(wěn)定性：4～25℃保存可穩(wěn)定7天；-20℃保存可穩(wěn)定1年。尿液穩(wěn)定性：20～25℃保存可穩(wěn)定2天；4～8℃保存可穩(wěn)定7天；-20℃保存可穩(wěn)定1個月。3.4標本運輸：常溫條件下保存運輸。3.5.標本拒收標準：細菌污染的標本。4實驗材料4.1試劑：上海復星長征醫(yī)學科學有限公司UREA試劑盒（滬食藥監(jiān)械（準）字2014第2400166號YZB/滬1546-40-2014）4.1.1試劑組成試劑1（R1）：α-酮戊二酸7.5mmol/L谷氨酸脫氫酶＞800U/LNADH0.35mmol/L二磷酸腺苷1.5mmol/LTris緩沖液115mmol/L試劑2（R2）：Tris緩沖液115mmol/L尿素酶＞40000U/Lα-酮戊二酸7mmol/L4.1.2試劑準備：試劑為即用式。4.1.3試劑穩(wěn)定性與貯存：在2～8℃避光、密封的儲存條件下，試劑盒自生產(chǎn)之日起有效期為12個月。4.1.4變質(zhì)指示：當試劑有看得見的微生物生長，有濁度，或者未開蓋的液體有沉淀時，表明試劑已變質(zhì)，不能繼續(xù)使用。4.1.5注意事項：試劑中含有防腐劑疊氮化鈉，可能存在一定的刺激作用，請勿直接接觸皮膚、眼睛。一旦接觸，即用大量清水沖洗。請勿吞服。4.2校準品：使用上海復星長征醫(yī)學科學有限公司提供的UREA校準品對自動分析儀進行校準。4.3質(zhì)控品：使用正常值、病理值復合控制品。5儀器AU2700生化分析儀，羅氏P800生化分析儀,西門子ADVIA-2400生化分析儀，東芝TBA-120生化分析儀6操作步驟6.1樣品的準備：將標好號的樣品離心后放到儀器規(guī)定的位置。6.2試劑的檢測：儀器開機后，檢查各種試劑的位置，體積等確認無誤后方可進行測定。6.3項目基本參數(shù)：參見生化檢驗AU2700生化分析儀，羅氏P800生化分析儀,西門子ADVIA-2400生化分析儀，東芝TBA-120生化分析儀項目測定參數(shù)。6.4儀器操作步驟：參見生化檢驗AU2700生化分析儀，羅氏P800生化分析儀,西門子ADVIA-2400生化分析儀，東芝TBA-120生化分析儀操作規(guī)程。7質(zhì)量控制：在每一批標本中都應把非定值血清水平I與II質(zhì)控做為未知標本進行分析，以2S為質(zhì)控警告限，3S為失控限，繪制質(zhì)控圖，判斷是否在控。8計算方法：以UREA復合校準品校準儀器后，在病人結(jié)果可報告范圍內(nèi)，儀器直接報告可靠的檢測結(jié)果，以mmol/L報告。9參考值范圍成人2.5-6.4mmol/L（注：各實驗室應有自己的參考范圍。）參考值因性別、年齡、飲食和地域的不同而有所差別。根據(jù)好的實驗室經(jīng)驗，每個實驗室應建立自己的參考值。我室參考值2.5-6.6mmol/L10臨床意義尿素是蛋白質(zhì)分解代謝的含氮終產(chǎn)物。高尿素血癥或氮血癥表現(xiàn)為血液中尿素水平升高。鑒別腎前和腎后氮血癥時可以同時檢測尿素和肌酐。因脫水、蛋白質(zhì)代謝增加、皮質(zhì)醇治療或腎臟灌注減少等引起的腎前氮血癥，表現(xiàn)為尿素水平升高而肌酐水平正常。由泌尿管道阻塞引起的腎后氮血癥，表現(xiàn)為尿素和肌酐水平都升高，但肌酐升高程度較小。發(fā)生腎病時，腎小球濾過作用明顯下降或蛋白質(zhì)攝入量大于200g/天都會導致尿素濃度升高。尿素氮的檢測用于診斷和治療某些腎臟疾病和代謝紊亂。尿素氮大約占血液中非蛋白氮的75%。它通過肝臟中的氨進行合成，是蛋白質(zhì)脫氨作用的產(chǎn)物。通過腎小球從血液中過濾尿素到尿中，是消除體內(nèi)多余氮的主要方法。血液尿素氮（BUN）水平是腎功能以及腎前狀態(tài)和腎后狀態(tài)的度量標準，腎前因素引起的BUN的升高包括心臟代償失調(diào)，缺水或增加的蛋白質(zhì)分解代謝。水平增加的腎臟因素有急性腎小球腎炎，慢性腎炎，多囊腎，腎纖維化和腎小管壞死。任何類型的泌尿道的梗塞受阻是BUN水平升高的腎后因素1。腎小球清除尿素和肌酸酐，但是，尿素隨后部分地被腎小管重吸收，然而肌酸酐卻不會。因此，血清尿素氮和血清肌酸酐測定經(jīng)常同時用于腎功能的不同診斷中。11操作性能11.1試劑空白：試劑空白吸光度：應不小于1.65試劑空白吸光度變化率（ΔA/min）：應不大于0.001。11.2分析靈敏度：1.00mmol/L樣本的吸光度變化率（ΔA/min）應不小于0.011。11.3線性范圍：試劑（盒）線性范圍應覆蓋[0～40]mmol/L。a)線性相關(guān)系數(shù)（r）應不小于0.990；b)[0～10]mmol/L范圍內(nèi)的絕對偏差應不超過±2mmol/L；[11～40]mmol/L范圍內(nèi)的相對偏差應不超過±10％。11.4準確度：相對偏差（B）應不大于±10%。11.5精密度：(1)重復性：變異系數(shù)（CV）應不大于5%；(2)批間差：相對極差（R）應不大于5%。12超出范圍結(jié)果處理本法線性上限血清/血漿為40mmol/L、尿液為5mol/L。如樣品測定值超過上限時，應將樣品用0.9%的氯化鈉溶液作1:4稀釋，重新測定，結(jié)果乘以5。13病危報警值的處理當尿素氮測定值>30mmol/L時，在經(jīng)過復查等確認手段處理后應及時向臨床主管醫(yī)生匯報。14方法局限性14.1測定結(jié)果的準確性依賴于對所使用分析儀器校準、測定溫度和測定時間的控制。14.2在樣本加入后的30秒鐘前或120秒鐘后讀取吸ΔA/min所測定的結(jié)果均不準確。14.3有關(guān)可能干擾本測定的藥物或物質(zhì)，請參閱參考文獻16.3。14.4試劑啟用后，在2～10℃避光的條件下可穩(wěn)定14天。若試劑混濁，或以水為空白在波長340nm處的吸光度值低于1.0A，則不能使用。15補救措施當儀器發(fā)生故障時，迅速聯(lián)系儀器廠家進行維修。16參考文