食品安全亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定-

食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽

的測定食品安全亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定-全文共35頁，當前為第1頁。一、方法適用范圍及原理亞硝酸鹽采用鹽酸萘乙二胺分光光度法測定，方法的檢出限為1mg/kg,定量限為3mg/kg。硝酸鹽采用鎘柱還原法測定，方法的檢出限為10mg/kg，定量限為30mg/kg。

食品安全亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定-全文共35頁，當前為第2頁。方法原理試樣經(jīng)沉淀蛋白質(zhì)、除去脂肪后，在弱酸性條件下，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸重氮化后，再與鹽酸萘乙二胺偶合形成紫紅色染料，與標準系列比較定量。采用鎘柱將硝酸鹽還原成亞硝酸鹽，測得亞硝酸鹽總量，由此總量減去亞硝酸鹽含量，即得試樣中硝酸鹽含量。食品安全亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定-全文共35頁，當前為第3頁。二、實驗準備（一）試劑配制（二）標準溶液的配制（三）主要儀器（四）鎘柱食品安全亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定-全文共35頁，當前為第4頁。（一）試劑配制試驗用水應(yīng)為蒸餾水、純凈水或去離子水，不能用自來水。購買試劑時要注意試劑名稱和分子式是否與標準方法一致。例如：亞鐵氰化鉀[K4Fe(CN)6.3H2O]、乙酸鋅[Zn(CH3COO)2.2H2O]、硼酸鈉[Na2B4O7.10H2O]、對氨基苯磺酸[C6H7NO3S]、鹽酸萘乙二胺[C12H14N2.2HCL]

食品安全亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定-全文共35頁，當前為第5頁。

氨緩沖溶液：量取30mL鹽酸，加100mL水，混勻后加65mL氨水，再加水稀釋至1000mL，混勻。調(diào)節(jié)pH至9.6～9.7（用PH計）。氨緩沖液的稀釋液：量取50mL氨緩沖溶液，加水稀釋至500mL，混勻。食品安全亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定-全文共35頁，當前為第6頁。（二）標準溶液配制購買固體標準的，應(yīng)注意亞硝酸鈉（NaNO2）、硝酸鈉（NaNO3）均應(yīng)為優(yōu)級純（GR），稱量前，必須在硅膠干燥器中干燥24小時以上。購買液體標準溶液的，應(yīng)注意其標示的濃度是以N計、以NO2-計、以NO3-計，最后結(jié)果均應(yīng)換算成以NaNO2計。食品安全亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定-全文共35頁，當前為第7頁。亞硝酸鈉、硝酸鈉標準儲備溶液（200μg/mL，以NaNO2計）應(yīng)置棕色瓶中5℃以下冷藏保存，有效期6個月。亞硝酸鈉、硝酸鈉標準使用液（5.0μg/mL、以NaNO2計）、必須臨用前現(xiàn)配。

食品安全亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定-全文共35頁，當前為第8頁。（三）主要儀器

小型絞肉機、粉碎機、勻漿機。天平：感量為0.1mg和1mg。分光光度計：2cm比色皿。鎘柱

食品安全亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定-全文共35頁，當前為第9頁。（四）鎘柱的制備投入足夠的鋅皮或鋅棒于500mL硫酸鎘溶液(200g/L)中，放置3h～4h。當鎘全部被鋅置換后，用玻璃棒輕輕刮下，取出殘余鋅棒，使鎘沉底，傾去上層清液，以水用傾瀉法多次洗滌（10次以上）。移入組織搗碎機中，加500mL水，搗碎約2s，用水將金屬細粒洗至標準篩上，取20目～40目之間的部分（顆粒大小約同食用鹽）。食品安全亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定-全文共35頁，當前為第10頁。食品安全亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定-全文共35頁，當前為第11頁。（四）鎘柱的裝填先用水裝滿鎘柱玻璃管，然后裝入2cm高的玻璃棉做墊，將玻璃棉壓向柱底時，應(yīng)將其中所包含的空氣全部排出。在輕輕敲擊下加入海綿狀鎘至8cm～10cm高，上面再用1cm高的玻璃棉覆蓋，上置一貯液漏斗。食品安全亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定-全文共35頁，當前為第12頁。當鎘柱填裝好后，先用25mL鹽酸(0.1mol/L)洗滌，再以水洗兩次，每次25mL。鎘柱不用時，必須用水封蓋，隨時都要保持水平面在鎘層之上，不得使鎘層夾有氣泡。如無上述鎘柱玻璃管時，可以25mL酸式滴定管代替。食品安全亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定-全文共35頁，當前為第13頁。三、樣品接收收樣人應(yīng)認真檢查樣品的包裝和狀態(tài)，若發(fā)現(xiàn)異常，應(yīng)與送樣人達成處理決定。送樣量不能少于規(guī)定數(shù)量，至少不能少于測試用量的三倍。樣品應(yīng)編號登記，加施唯一性標識，保證不同檢測狀態(tài)和傳遞過程中樣品不被混淆。

食品安全亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定-全文共35頁，當前為第14頁。四、樣品的制備和保存（一）樣品的制備（二）樣品的保存食品安全亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定-全文共35頁，當前為第15頁。（一）樣品的制備已粉碎的樣品（鹽菜末等），應(yīng)使用圓錐四分法（堆成圓錐體——壓成扁平圓形——劃兩條交叉直線分成四等份——取對角部分）進行縮分。未粉碎的樣品（腌咸菜、腌蘿卜條等），應(yīng)間隔一定的距離取多份小塊四分法進行縮分。已切成片或塊的禽肉類樣品（排骨、雞爪等），先室溫解凍，四分法縮分。整塊的禽肉類樣品（臘肉、烤鴨等）在不同部位切取小片或截取小段四分法縮分。食品安全亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定-全文共35頁，當前為第16頁。（一）樣品的制備

將縮分后的樣品四分法分成二份，一份作留樣備用（>100g），另一份切細后用搗碎機搗碎混勻供分析(>50g)。當送樣量不能滿足留樣要求時，全部粉碎混勻，在保證分析樣用量后，全部用作留樣。食品安全亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定-全文共35頁，當前為第17頁。樣品應(yīng)冷藏儲運，在送達實驗室后要盡快測定。蔬菜類樣品應(yīng)用食品塑料袋裝好，在5℃以下冰箱冷藏保存。禽肉類樣品應(yīng)用食品塑料袋裝好，在-18℃

以下的冰柜或冰箱冷凍保存。（二）樣品的保存食品安全亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定-全文共35頁，當前為第18頁。五、試驗步驟

（一）試樣前處理。（二）試劑空白制備。（三）標準曲線制備。（四）測定。食品安全亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定-全文共35頁，當前為第19頁。（一）試樣前處理硼砂飽和液作用：硼砂溶入水中，即被水解為等量的硼酸與硼酸二氫鈉，起緩沖溶液作用。溶液pH約為9.18，即堿性。在堿性下處理樣品有幾方面作用：（1）是鋅鹽沉淀蛋白質(zhì)時，要求在堿性。（2）是堿性下處理肉制品，脂肪被皂化，減少樣品被脂肪包裹，使亞硝基根更易提取到水溶液中。（3）是溶液在堿性下亞硝基根以離子存在，易溶且穩(wěn)定，如溶液偏酸性，則形成亞硝酸，在加熱下容易揮發(fā)，也易分解，造成損失。食品安全亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定-全文共35頁，當前為第20頁。（二）試劑空白制備于50mL燒杯中，加12.5mL硼砂飽和液，以70℃左右的水約300mL將試樣洗入500mL容量瓶中，于沸水浴中加熱15min，取出后冷卻至室溫。然后一面轉(zhuǎn)動，一面加入5mL亞鐵氰化鉀溶液，搖勻，再加入5mL乙酸鋅溶液。加水至刻度，搖勻，放置0.5h，清液用濾紙過濾，棄去初濾液30mL，濾液備用。食品安全亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定-全文共35頁，當前為第21頁。（三）標準曲線制備（1）曲線至少作5個點（不包括空白）。（2）線性范圍內(nèi)相關(guān)系數(shù)應(yīng)大于0.9990。（3）測試溶液中被測組分濃度必須在校準曲線的線性范圍內(nèi)。食品安全亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定-全文共35頁，當前為第22頁。（四）測定亞硝酸鹽測定（1）鹽酸萘乙二胺溶液易變質(zhì)，最好臨用時新配。（2）用2cm比色杯，以零管調(diào)節(jié)零點，于波長538nm處測吸光度。

食品安全亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定-全文共35頁，當前為第23頁。（四）測定硝酸鹽的測定（1）鎘柱還原效率的測定（2）樣品濾液經(jīng)鎘柱還原（3）亞硝酸鈉總量的測定食品安全亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定-全文共35頁，當前為第24頁。（1）鎘柱還原效率的測定先用25mL鹽酸(0.1mol/L)洗滌，再以水洗2次，每次25mL,流速控制在3mL/min～5mL/min(1-2滴/秒)。吸取20mL硝酸鈉標準使用液，加入5mL氨緩沖液的稀釋液，混勻后注入貯液漏斗，使流經(jīng)鎘柱還原，以原燒杯收集流出液。當貯液漏斗中的樣液流完后，再加5mL水置換柱內(nèi)留存的樣液。食品安全亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定-全文共35頁，當前為第25頁。（1）鎘柱還原效率的測定將全部收集液如前再經(jīng)鎘柱還原一次，第二次流出液收集于100mL容量瓶中，繼以水流經(jīng)鎘柱洗滌三次，每次20mL，洗液一并收集于同一容量瓶中，加水至刻度，混勻。得到還原后溶液為100mL。食品安全亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定-全文共35頁，當前為第26頁。（1）鎘柱還原效率的測定取10.0mL還原后的溶液（相當10μg亞硝酸鈉）于50mL比色管中，加入2mL對氨基苯磺酸溶液，混勻，靜置3min～5min后各加入1mL鹽酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混勻，靜置15min，用2cm比色杯，以空白管調(diào)節(jié)零點，于波長538nm處測吸光度，代入標準曲線計算含量。食品安全亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定-全文共35頁，當前為第27頁。（1）鎘柱還原效率的測定還原效率計算：X=A×100/10X——還原效率，%A——由標準曲線計算測得的亞硝酸鈉的含量，單位為微克（μg）10——測定用溶液中亞硝酸鈉的含量，單位為微克（μg）食品安全亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定-全文共35頁，當前為第28頁。（1）鎘柱還原效率的測定還原效率大于98%為符合要求。

若不符合要求，則繼續(xù)用25mL鹽酸(0.1mol/L)洗滌，再以水洗兩次，每次25mL。實驗過程中，隨時保持鎘柱在水平面以下，加液時沿貯液漏斗管壁勻速加入，避免鎘柱內(nèi)產(chǎn)生氣泡。多次洗滌后，還原效率還不符合要求，應(yīng)該重新制備裝填鎘柱。食品安全亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定-全文共35頁，當前為第29頁。（2）樣品濾液經(jīng)鎘柱還原

先以25mL氨緩沖液的稀釋液沖洗鎘柱，流速控制在3mL/min～5mL/min（約1-2滴/秒）。

吸取20mL濾液于50mL燒杯中，加5mL氨緩沖溶液，混合后注入貯液漏斗，使流經(jīng)鎘柱還原，以原燒杯收集流出液。當貯液漏斗中的樣液流完后，再加5mL水置換柱內(nèi)留存的樣液。隨時都要保持水平面在鎘層之上，不得使鎘層夾有氣泡。將全部收集液如前再經(jīng)鎘柱還原一次，第二次流出液收集于100mL容量瓶中，繼以水流經(jīng)鎘柱洗滌三次，每次20mL，洗液一并收集于同一容量瓶中，加水至刻度，混勻。食品安全亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定-全文共35頁，當前為第30頁。（3）亞硝酸鈉總量的測定

吸取20mL

還原后的樣液于50mL比色管中，分別加入2mL對氨基苯磺酸溶液，混勻，靜置3min～5min后各加入1mL鹽酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混勻，靜置15min，用2cm比色杯，以空白管調(diào)節(jié)零點，于波長538nm處測吸光度。代入標準曲線計算。食品安全亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定-全文共35頁，當前為第31頁。六、結(jié)果計算試劑空白不為零時應(yīng)扣除。樣品溶液有顏色時，應(yīng)先不加顯色劑測定吸光度，再從加顯色劑后測得的吸光度中扣除。亞硝酸鹽含量結(jié)果應(yīng)換算成以NaNO2計，并保留兩位有效數(shù)字。在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%。食品安全亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定-全文共35頁，當前為第32頁。六、結(jié)果計算硝酸鹽含量的計算（以NaNO3計）X2=(X-X1)×1.232X2——試樣中硝酸鈉的含量，毫克每千克（mg/kg）；X——經(jīng)鎘柱還原后測得總亞硝酸鈉的含量，毫克每千克（mg/kg）。X1——計算出的試樣中亞硝酸鈉的含量，毫克每千克（mg/kg）。1.232——亞硝酸鈉換算成硝酸鈉的系數(shù)；食品安全亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定-全文共35頁，當前為第33頁。七、玻璃量器洗滌和干燥先用機械方法除去量器上的污染物，如用毛刷刷，或用水搖動(必要時可加入濾紙碎片)。油或油類物質(zhì)可選用適當?shù)娜軇┤コ?，然后注入低泡沫洗滌液并用力搖晃（必要時可以超聲）。若