細(xì)胞培養(yǎng)過程中的污染和預(yù)防課件

細(xì)胞培養(yǎng)中的污染和預(yù)防細(xì)胞培養(yǎng)中的污染和預(yù)防細(xì)胞培養(yǎng)過程中引起污染的因素

細(xì)胞培養(yǎng)污染是指培養(yǎng)環(huán)境中侵入了對(duì)細(xì)胞生存有害的成分和造成細(xì)胞變異的異物。

體外細(xì)胞培養(yǎng)污染可分為3類：物理性、化學(xué)性及生物性污染。細(xì)胞培養(yǎng)過程中引起污染的因素細(xì)胞培養(yǎng)污染是一、物理性污染

物理性污染通過影響細(xì)胞培養(yǎng)體系中的生化成分，從而影響細(xì)胞的代謝。一、物理性污染物理性污染通過影響細(xì)胞培養(yǎng)1、物理性污染的來源

培養(yǎng)環(huán)境中的物理因素，如溫度、放射線、振動(dòng)、輻射（紫外線或熒光）會(huì)對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生影響。1、物理性污染的來源培養(yǎng)環(huán)境中2、物理性污染的現(xiàn)象

細(xì)胞、培養(yǎng)液或其他培養(yǎng)試劑暴露在放射線、輻射或過冷過熱的溫度中，可以引起細(xì)胞代謝發(fā)生改變，如細(xì)胞同步化、細(xì)胞生長受抑制，甚至細(xì)胞死亡。2、物理性污染的現(xiàn)象細(xì)胞、培養(yǎng)液或其3、物理性污染的預(yù)防1）、實(shí)驗(yàn)室的合理設(shè)計(jì)及建立規(guī)范的操作規(guī)程；2）、培養(yǎng)箱應(yīng)放在恒溫的環(huán)境中；3）、培養(yǎng)液及試劑應(yīng)放在固定位置，而且要注意避光，試劑周圍不能放置同位素；4）、從冰箱中取出的培養(yǎng)液應(yīng)在室溫條件中放置一段時(shí)間后再進(jìn)行使用，以避免過冷的溫度對(duì)細(xì)胞的影響。3、物理性污染的預(yù)防1）、實(shí)驗(yàn)室的合理設(shè)計(jì)及建立規(guī)范的二、化學(xué)性污染

將一些對(duì)細(xì)胞有毒性或?qū)?xì)胞產(chǎn)生刺激性的化學(xué)物質(zhì)稱為化學(xué)性污染二、化學(xué)性污染將一些對(duì)細(xì)胞有毒性或1、化學(xué)性污染的來源

未純化的物質(zhì)、試劑、水、血清、生長輔助因子及儲(chǔ)存試劑的容器都可能成為化學(xué)性污染的來源。

細(xì)胞培養(yǎng)的必需養(yǎng)分（如氨基酸）若濃度超過了合理的范圍，也會(huì)對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性。同樣，不同細(xì)胞系在最佳培養(yǎng)條件下對(duì)血清和緩沖液的要求是不一樣的，在培養(yǎng)中應(yīng)嚴(yán)格控制。1、化學(xué)性污染的來源未純化的物質(zhì)、試劑、水2、化學(xué)性污染的現(xiàn)象化學(xué)性污染同樣會(huì)使細(xì)胞生長受抑制，甚至細(xì)胞死亡。2、化學(xué)性污染的現(xiàn)象化學(xué)性污染同樣3、化學(xué)性污染的預(yù)防1）、使用的所有物質(zhì)都應(yīng)是高純度的,同時(shí)正確配制和儲(chǔ)存培養(yǎng)液及試劑；2）、在配制液體和清洗容器時(shí)必須使用不含雜質(zhì)的超純水。3）、選用同一批次的血清。4）、在選用器皿時(shí)，根據(jù)被培養(yǎng)細(xì)胞的生長特性、培養(yǎng)方式和所用培養(yǎng)液的性質(zhì)來選用適合的器皿來達(dá)到實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和可靠性。3、化學(xué)性污染的預(yù)防1）、使用的所有物質(zhì)都應(yīng)是高純度的三、生物性污染

生物污染包括比較容易發(fā)現(xiàn)的細(xì)菌、霉菌和酵母的污染，和較難發(fā)現(xiàn)的病毒、支原體和其他細(xì)胞的污染。三、生物性污染生物污染包括比較容易1、生物性污染的來源1)取材不慎或處理不當(dāng)2)空氣塵埃3)消毒不嚴(yán)4)操作不當(dāng)5)試劑尤其是血清污染1、生物性污染的來源1)取材不慎或處理不當(dāng)2、生物性污染的現(xiàn)象常見的生物性污染：

1)、細(xì)菌：G+菌較多。

2)、真菌：霉菌較多。

3)、支原體：不易檢測。

4)、病毒：由于病毒有種屬特異性，所以病毒污染的概率比較小。2、生物性污染的現(xiàn)象常見的生物性污染：1）細(xì)菌污染

大多數(shù)細(xì)菌（bacteria）污染可以改變培養(yǎng)液pH，使培養(yǎng)液變渾濁、變色。用相差顯微鏡觀察，可見滿視野都是點(diǎn)狀的細(xì)菌顆粒，原來的清晰培養(yǎng)背景變得模糊，大量的細(xì)菌甚至可以覆蓋細(xì)胞。細(xì)胞發(fā)生病理改變，胞內(nèi)顆粒增多、增粗，最后變圓脫落死亡。1）細(xì)菌污染大多數(shù)細(xì)菌（bacteria細(xì)菌污染細(xì)菌污染2）真菌污染

真菌污染易于發(fā)現(xiàn)，一般在培養(yǎng)液中有肉眼可見的白色或淺黃色的漂浮小點(diǎn)，念珠菌和酵母菌呈卵圓形散在細(xì)胞周邊和細(xì)胞之間，個(gè)體細(xì)小，有增多趨勢，培養(yǎng)液一般不混濁；倒置顯微鏡下可見絲狀、管狀或樹枝狀的菌絲交錯(cuò)在細(xì)胞之間或培養(yǎng)基中，有的呈鏈狀排列。培養(yǎng)細(xì)胞受真菌污染后，細(xì)胞生長變慢，最后由于營養(yǎng)耗盡及毒性作用可使細(xì)胞脫落、死亡。2）真菌污染真菌污染易于發(fā)現(xiàn)，一般在培細(xì)胞培養(yǎng)過程中的污染和預(yù)防ppt課件3）支原體污染支原體是介于細(xì)菌與病毒之間能獨(dú)立生活的最小微生物，直徑0.22μm左右，無細(xì)胞壁，對(duì)理化因素比較敏感。受污染的細(xì)胞在顯微鏡下無特殊的外觀表現(xiàn)，培養(yǎng)液也不渾濁；部分敏感細(xì)胞生長增殖變慢，細(xì)胞變圓，脫落。在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，如在顯微鏡下發(fā)現(xiàn)破碎的細(xì)胞有許多，培養(yǎng)物需要頻繁改善營養(yǎng)環(huán)境才能支持長期傳代培養(yǎng)時(shí)，應(yīng)懷疑培養(yǎng)物可能受支原體污染。3）支原體污染支原體是介于細(xì)菌與病毒之間能獨(dú)立生活的最小微生支原體可通過培養(yǎng)法、DNA熒光染色法、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、免疫學(xué)等方法進(jìn)行檢測。支原體可通過培養(yǎng)法、DNA熒光染色法、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、免疫學(xué)3、生物性污染的預(yù)防1）、建立規(guī)范的無菌操作程序及各種規(guī)章制度，并嚴(yán)格執(zhí)行；2）、控制環(huán)境污染，同時(shí)注意實(shí)驗(yàn)人