腌菜中亞硝酸鹽含量測(cè)定方法的比較

腌菜中亞硝酸鹽含量測(cè)定方法的比較

亞硝酸鹽通常被用作工業(yè)鹽。它是一種白色或黃色的結(jié)晶或顆粒粉末。它沒(méi)有味道，味道有點(diǎn)咸，有點(diǎn)澀，容易潮解，易溶于水和土壤中。它可能會(huì)很難溶于甲醇和其他有機(jī)溶劑。亞硝酸鹽廣泛存在于自然環(huán)境中,特別是存在于食物中,比如蔬菜、糧食、肉類(lèi)、魚(yú)類(lèi)、蛋類(lèi)都含有一定量的亞硝酸鹽長(zhǎng)期以來(lái),由于腌菜能夠長(zhǎng)時(shí)間貯存,并且具有獨(dú)特的風(fēng)味而廣受市民的喜愛(ài),腌菜在市場(chǎng)上隨處可見(jiàn)。研究表明:蔬菜是一種極易富集硝酸鹽的食品,蔬菜在腌制過(guò)程中,由于微生物以及硝酸還原酶的作用,使得硝酸鹽還原成亞硝酸鹽目前測(cè)定亞硝酸鹽含量的方法有很多種,常用的方法是鹽酸萘乙二胺分光光度法本次課題采用的是在弱酸的情況下,亞硝酸鹽與對(duì)氨基苯磺酸發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生重氮化合物,再與α-萘胺耦合,形成紫紅色的偶氮化合物,測(cè)定其吸光度。本次測(cè)定廣西賀州市八步區(qū)部分腌菜的亞硝酸鹽含量,旨在給當(dāng)?shù)厥忻裉峁┯袃r(jià)值的參考依據(jù)。1材料和方法1.1藥品、試劑及儀器大頭菜、榨菜、梅菜、腌蘿卜:購(gòu)于陽(yáng)光市場(chǎng);涼拌菜:購(gòu)于泰興超市。亞硝酸鈉、對(duì)氨基苯磺酸、α-萘胺、四硼酸鈉、亞鐵氰化鉀、乙酸鋅、鹽酸、無(wú)水乙醇、氫氧化鈉:以上藥品均為分析純;實(shí)驗(yàn)用水為超純水。TU-1901雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)北京普析通用儀器有限責(zé)任公司;722可見(jiàn)分光光度計(jì)上海光譜儀器有限公司;FA1004電子天平上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司;SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司;101-1電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠(chǎng);HHS電熱恒溫水浴鍋上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠(chǎng)。1.2分光光度法20%鹽酸溶液:量取54.8mL36.5%鹽酸至100mL燒杯中,加水至100mL刻度線(xiàn)。1mg/mL亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液:準(zhǔn)確稱(chēng)取0.5000g亞硝酸鈉于100mL燒杯中,先加入少量水溶解,轉(zhuǎn)入500mL容量瓶中,加水定容,搖勻,做儲(chǔ)備液。5μg/mL亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)工作溶液:量取5.00mL1mg/mL亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液于1000mL容量瓶中,加水定容,搖勻。4g/L對(duì)氨基苯磺酸溶液:稱(chēng)取2.000g對(duì)氨基苯磺酸固體溶于500mL20%鹽酸中,混勻,置于棕色瓶中,避光保存。2g/Lα-萘胺溶液:準(zhǔn)確稱(chēng)取0.5000gα-萘胺固體,先用少量95%酒精溶解,轉(zhuǎn)入250mL容量瓶中,再用95%酒精定容,搖勻。硼砂飽和溶液:稱(chēng)取25g四硼酸鈉固體溶于500mL溫水中,冷卻至室溫。0.25mol/L亞鐵氰化鉀溶液:準(zhǔn)確稱(chēng)取10.6190g亞鐵氰化鉀固體,溶于水中并轉(zhuǎn)入100mL容量瓶中,加水定容,搖勻。1mol/L乙酸鋅溶液:準(zhǔn)確稱(chēng)取21.9000g乙酸鋅固體,加入3mL冰醋酸,加水溶解,轉(zhuǎn)入100mL容量瓶中,加水定容,搖勻。0.01mol/L氫氧化鈉溶液:稱(chēng)取0.04g氫氧化鈉固體于100mL燒杯中,加水至100mL刻度線(xiàn),攪拌溶解。準(zhǔn)確稱(chēng)取2.5000g經(jīng)粉碎均勻的腌菜樣品,置于250mL燒杯中,加入12.5mL硼砂飽和溶液,攪拌均勻,加入約100mL70℃左右的水,并在沸水浴中加熱15min,取出冷卻到室溫,轉(zhuǎn)入250mL容量瓶中,再加入5mL亞鐵氰化鉀溶液和5mL乙酸鋅溶液以沉淀蛋白質(zhì),加水定容,加入1g活性炭1.4實(shí)驗(yàn)方法1.4.1標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制樣品經(jīng)蛋白質(zhì)沉淀、除去脂肪后,在弱酸的情況下,亞硝酸鹽與對(duì)氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng)生成重氮鹽,重氮鹽再與α-萘胺試劑發(fā)生耦合反應(yīng),生成紫紅色偶氮化合物,亞硝酸鹽特效試劑α-萘胺溶液作顯色劑,能夠成功地避免實(shí)驗(yàn)中其他陰陽(yáng)離子的影響反應(yīng)1:反應(yīng)2:分別吸取一定量的5μg/mL亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液,置于50mL容量瓶中,分別加入一定量的4g/L對(duì)氨基苯磺酸溶液,在一定的溫度下,調(diào)節(jié)溶液的pH為5,搖勻,靜置,再加入一定量的2g/Lα-萘胺溶液,加水至刻度,搖勻,靜置,于1cm比色皿中,在最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度,以亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度C為橫坐標(biāo),吸光度A為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。1.4.3測(cè)定波長(zhǎng)的確定吸取40mL濾液置于50mL容量瓶中,加入一定量的4g/L對(duì)氨基苯磺酸溶液,在一定的溫度下,調(diào)節(jié)溶液的pH,搖勻,靜置,再加入一定量的2g/Lα-萘胺溶液,加水至刻度,搖勻,靜置,于1cm比色皿中,在最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。2結(jié)果與討論2.1檢測(cè)波長(zhǎng)的測(cè)定反應(yīng)1:吸取5.00mL5μg/mL亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液,置于50mL容量瓶中,加入2.00mL4g/L對(duì)氨基苯磺酸溶液,搖勻,靜置3~5min,加水至刻度,搖勻,于1cm比色皿中,做光譜掃描,結(jié)果見(jiàn)圖1。反應(yīng)2:吸取5.00mL5μg/mL亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液,置于50mL容量瓶中,加入2.00mL4g/L對(duì)氨基苯磺酸溶液,搖勻,靜置3~5min,再加入2.00mL2g/Lα-萘胺溶液,加水至刻度,搖勻,靜置15min,于1cm比色皿中,做光譜掃描,結(jié)果見(jiàn)圖1。由圖1可知,反應(yīng)1在紫外區(qū)267nm處吸光度達(dá)到最大,而在可見(jiàn)區(qū)無(wú)吸收。反應(yīng)2在可見(jiàn)區(qū)520nm處吸光度達(dá)到最大,故選擇267nm和520nm分別為反應(yīng)1和反應(yīng)2的最適宜測(cè)定波長(zhǎng),為了更好考察反應(yīng)條件對(duì)反應(yīng)體系的影響。2.2反應(yīng)的溫度對(duì)吸光度的影響吸取5.00mL5μg/mL亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液,置于50mL容量瓶中,加入2.00mL4g/L對(duì)氨基苯磺酸溶液,搖勻,靜置時(shí)間分別是1,2,3,4,5,6min,加水至刻度線(xiàn),混勻,于1cm比色皿中,在267nm處測(cè)量吸光度。以反應(yīng)時(shí)間t為橫坐標(biāo),吸光度A為縱坐標(biāo)繪制曲線(xiàn),見(jiàn)圖2。由圖2可知,隨著反應(yīng)時(shí)間的延長(zhǎng),體系的吸光度逐漸增大,當(dāng)反應(yīng)時(shí)間為4min時(shí),吸光度急劇增大;當(dāng)反應(yīng)到5min時(shí),吸光度達(dá)到最大值;當(dāng)反應(yīng)時(shí)間大于5min后,吸光度急劇下降。表明在5min時(shí),反應(yīng)已充分完成。因此,選擇5min為反應(yīng)1的最佳反應(yīng)時(shí)間。吸取5.00mL5μg/mL亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液,置于50mL容量瓶中,加入2.00mL4g/L對(duì)氨基苯磺酸溶液,搖勻,溫度分別控制在10,15,20,25,30,35℃,靜置5min,加水至刻度線(xiàn),混勻,于1cm比色皿中,在267nm處測(cè)量吸光度。以反應(yīng)溫度T為橫坐標(biāo),吸光度A為縱坐標(biāo)繪制曲線(xiàn),見(jiàn)圖3。由圖3可知,體系的吸光度隨著溫度的升高而增大,當(dāng)溫度升到25℃時(shí),體系的吸光度達(dá)到最大,隨后再升高溫度,吸光度反而緩慢下降,而20~35℃之間的吸光度相差不大,較穩(wěn)定。故選擇25℃為反應(yīng)1的最佳溫度。吸取5.00mL5μg/mL亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液,置于50mL容量瓶中,加入2.00mL4g/L對(duì)氨基苯磺酸溶液,調(diào)節(jié)pH為1,2,3,4,5,6,7,搖勻,溫度控制在25℃,靜置5min,加水至刻度線(xiàn),混勻,于1cm比色皿中,在267nm處測(cè)量吸光度。以溶液pH為橫坐標(biāo),吸光度A為縱坐標(biāo)繪制曲線(xiàn),見(jiàn)圖4。由圖4可知,隨著pH的增大,吸光度逐漸增大,當(dāng)pH達(dá)到4時(shí),吸光度急劇增大;當(dāng)pH為5時(shí),吸光度達(dá)到最大值;當(dāng)反應(yīng)pH>5時(shí),吸光度急劇下降。表明pH為5時(shí),反應(yīng)已充分完成。因此,選擇pH5為反應(yīng)1的最佳反應(yīng)pH值。2.2.1.吸光度測(cè)定吸取5.00mL5μg/mL亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液,置于50mL容量瓶中,加入2mL4g/L對(duì)氨基苯磺酸溶液的量分別為0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0mL,調(diào)節(jié)pH為5,溫度控制在25℃,搖勻,靜置時(shí)間為5min,加水至刻度線(xiàn),混勻,于1cm比色皿中,在267nm處測(cè)量吸光度。以顯色劑用量V為橫坐標(biāo),吸光度A為縱坐標(biāo)繪制曲線(xiàn),見(jiàn)圖5。由圖5可知,隨著顯色劑用量的增加,吸光度逐漸增大,當(dāng)顯色劑用量為2.0mL時(shí),吸光度達(dá)到最大值,反應(yīng)能夠充分完成;當(dāng)顯色劑用量大于2.0mL后,吸光度沒(méi)有上升反而下降。因此,選擇顯色劑用量2.0mL為反應(yīng)1的最佳顯色劑用量。2.2.2反應(yīng)2的反應(yīng)體系吸取5.00mL5μg/mL亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液,置于50mL容量瓶中,加入2.00mL4g/L對(duì)氨基苯磺酸溶液,調(diào)節(jié)pH為5,搖勻,溫度控制在25℃,靜置時(shí)間為5min,再加入2.00mL2g/Lα-萘胺溶液,加水至刻度,搖勻,靜置時(shí)間分別為5,10,15,20,25,30min,于1cm比色皿中,在520nm處測(cè)量吸光度。以反應(yīng)時(shí)間t為橫坐標(biāo),吸光度A為縱坐標(biāo)繪制曲線(xiàn),見(jiàn)圖6。由圖6可知,隨著反應(yīng)時(shí)間的延長(zhǎng),吸光度緩慢增大,當(dāng)反應(yīng)時(shí)間為30min時(shí),吸光度達(dá)到最大值,反應(yīng)能夠充分完成;當(dāng)反應(yīng)時(shí)間繼續(xù)延長(zhǎng)時(shí),吸光度沒(méi)有上升反而下降。因此,選擇30min為反應(yīng)2的最佳反應(yīng)時(shí)間。吸取5.00mL5μg/mL亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液,置于50mL容量瓶中,加入2.00mL4g/L對(duì)氨基苯磺酸溶液,調(diào)節(jié)pH為5,搖勻,溫度控制在25℃,靜置5min,加水至刻度,混勻,再加入2.00mL2g/Lα-萘胺溶液,加水至刻度,溫度控制在10,15,20,25,30,35,40℃,搖勻,靜置30min,于1cm比色皿中,在520nm處測(cè)量吸光度。以溫度T為橫坐標(biāo),吸光度A為縱坐標(biāo)繪制曲線(xiàn),見(jiàn)圖7。由圖7可知,吸光度隨著溫度的上升而增大,當(dāng)溫度達(dá)到20℃時(shí),吸光度達(dá)到最大值,再升高溫度,體系的吸光度反而下降,且25℃后的吸光度趨于穩(wěn)定。故選擇20℃為反應(yīng)2的最佳溫度。2.2.2.,5,6,7-四氫-3-硫基苯磺酸鈉sdps-2,3,4,5,6,5,6,7--4-5,5,6,7-7--4-5,5,6-7-----3-5,5,6-7---4,5,5,6-5,5,7-4-5,5,6-7--4-10-甲基苯磺酸酯ld-b對(duì)原溶液ph的影響吸取5.00mL5μg/mL亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液,置于50mL容量瓶中,加入2.00mL4g/L對(duì)氨基苯磺酸溶液,調(diào)節(jié)pH為5,搖勻,溫度控制在25℃,靜置5min,再加入2.00mL2g/Lα-萘胺溶液,加水至刻度,控制pH為1,2,3,4,5,6,7,溫度控制在20℃,靜置30min,于1cm比色皿中,在520nm處測(cè)量吸光度。以反應(yīng)pH為橫坐標(biāo),吸光度A為縱坐標(biāo)繪制曲線(xiàn),見(jiàn)圖8。由圖8可知,溶液的吸光度隨pH的變化影響不大,且原溶液的pH值為4。因此,選擇pH4為反應(yīng)2的最佳反應(yīng)pH值。2.2.2.-n-l-4-甲基--胺分光光度法吸取5.00mL5μg/mL亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液,置于50mL容量瓶中,加入2mL4g/L對(duì)氨基苯磺酸溶液,調(diào)節(jié)pH為5,溫度控制在25℃,搖勻,靜置時(shí)間為5min,再加入2g/Lα-萘胺溶液,用量分別為0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0mL,加水至刻度,控制pH為4,溫度控制在20℃,搖勻,靜置30min,于1cm比色皿中,在520nm處測(cè)量吸光度。以顯色劑用量V為橫坐標(biāo),吸光度A為縱坐標(biāo)繪制曲線(xiàn),見(jiàn)圖9。由圖9可知,隨著顯色劑用量的增大,吸光度緩慢增大,顯色劑用量為2.0mL時(shí),吸光度達(dá)到最大值,反應(yīng)能夠充分完成;當(dāng)顯色劑用量大于2.0mL后,吸光度沒(méi)有上升而是緩慢下降。因此,選擇顯色劑用量2.0mL為反應(yīng)2的最佳顯色劑用量。2.3對(duì)氨基苯磺酸溶液4g/l分別吸取0,0.50,1.00,1.50,2.00,2.50,3.00mL5μg/mL亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液,置于50mL容量瓶中,分別加入2.0mL4g/L對(duì)氨基苯磺酸溶液,調(diào)節(jié)pH為5,溫度控制在25℃,搖勻,靜置時(shí)間為5min,再加入2.0mL2g/Lα-萘胺溶液,加水至刻度,溫度控制在20℃,搖勻,靜置30min,于1cm比色皿中,在520nm處測(cè)定吸光度。以亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度C為橫坐標(biāo),吸光度A為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),見(jiàn)圖10。由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)可知回歸方程為A=1.4307C+0.0037,相關(guān)系數(shù)2.4亞硝酸鹽含量的測(cè)定吸取40mL濾液置于50mL容量瓶中,加入2.0mL4g/L對(duì)氨基苯磺酸溶液,調(diào)節(jié)pH為5,溫度控制在25℃,搖勻,靜置時(shí)間為5min,再加入2.0mL2g/Lα-萘胺溶液,加水至刻度,控制pH為4,溫度控制在20℃,搖勻,靜置30min,于1cm比色皿中,在520nm處測(cè)定吸光度,平行5次。不同類(lèi)型腌菜樣品中亞硝酸鹽含量測(cè)定的結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可知,不同的腌菜中亞硝酸鹽的含量存在著較大的差異。在所測(cè)的5種腌菜中,亞硝酸鹽含量最高的大頭菜為4.9529mg/kg,其次的榨菜、涼拌菜分別為4.4295,4.3082mg/kg,含量最低的梅菜為0.6378mg/kg。其中亞硝酸鹽含量最低的梅菜和含量最高的大頭菜,其含量相差8倍。腌制食品中的亞硝酸鹽含量的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)為20mg/kg2.5檢測(cè)限制的確定用水代替樣品濾液在相同條件下測(cè)定吸光度,平行20次。以20次測(cè)定的試劑空白標(biāo)準(zhǔn)差的3倍表示該方法的檢測(cè)限,為1.5μg/L。2.6精密度的測(cè)定吸取5.0mL5μg/mL亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液,置于50mL容量瓶中,分別加入2.0mL4g/L對(duì)氨基苯磺酸溶液,調(diào)節(jié)pH為5,溫度控制在25℃,搖勻,靜置時(shí)間為5min,再加入2.0mL2g/Lα