病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課件

病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課件病原生物教研室制作病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課件病原生物教研室制作1實(shí)驗(yàn)一1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵?、實(shí)驗(yàn)室規(guī)則3、消毒與滅菌4、介紹常用滅菌器材5、常用儀器的使用6、油浸鏡的原理、使用、保護(hù)7、紫外線殺菌試驗(yàn)8、自然界細(xì)菌的分布9、細(xì)菌的培養(yǎng)10、細(xì)菌的生化反應(yīng)實(shí)驗(yàn)一1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵?實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵笠弧?shí)驗(yàn)?zāi)康?1)掌握病原生物學(xué)的基本實(shí)驗(yàn)方法和操作技術(shù)。(2)通過實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的討論和結(jié)果分析，培養(yǎng)學(xué)生的科學(xué)思維方法，提高其獨(dú)立工作的能力。二、實(shí)驗(yàn)要求(1)每次實(shí)驗(yàn)前，必須做好預(yù)習(xí)，明確實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、原理、方法及操作中的注意事?xiàng)等，避免和減少錯(cuò)誤操作。(2)實(shí)驗(yàn)過程中，必須持嚴(yán)肅認(rèn)真的態(tài)度。(3)對(duì)實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象和結(jié)果必須進(jìn)行仔細(xì)的觀察和認(rèn)真的記錄，然后進(jìn)行科學(xué)分析，得出恰當(dāng)?shù)慕Y(jié)論。(4)實(shí)驗(yàn)報(bào)告要獨(dú)立認(rèn)真地完成，書寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告要字跡清楚、語言簡(jiǎn)練、表格清晰，畫圖應(yīng)力求反映實(shí)際標(biāo)本的原狀。(5)切實(shí)遵守實(shí)驗(yàn)室規(guī)則。實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵笠?、?shí)驗(yàn)?zāi)康?實(shí)驗(yàn)室規(guī)則(1)上實(shí)驗(yàn)課時(shí)，先到更衣室把個(gè)人的書包和衣物放到衣柜內(nèi)，穿好實(shí)驗(yàn)服。隨身只許攜帶必須的教材、筆記本、文具等，但要置于遠(yuǎn)離操作部位的位置。(2)實(shí)驗(yàn)室要保持正常的工作秩序，不得高聲談笑和走動(dòng)。(3)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)禁止飲食和吸煙，不得用嘴舔濕鉛筆或標(biāo)簽等。(4)實(shí)驗(yàn)用過的帶有傳染性物質(zhì)的吸管、玻片等應(yīng)放在指定的消毒筒內(nèi)，待消毒或廢棄的物品必須放在指定地點(diǎn)。(5)如發(fā)現(xiàn)有傳染性的材料污染地面、桌面、書和衣物等時(shí)，應(yīng)立即報(bào)告老師，以便及時(shí)處置。實(shí)驗(yàn)室規(guī)則(1)上實(shí)驗(yàn)課時(shí)，先到更衣室把個(gè)人的書包和衣物放到4(6)如將活菌碰到手上，應(yīng)將手浸入來蘇水中5-10min，然后用自來水沖洗；如將痰液吸人口內(nèi)，應(yīng)立即吐出，再用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0．1％的高錳酸鉀漱口，必要時(shí)服用有關(guān)藥物。(7)注意節(jié)約實(shí)驗(yàn)試劑，愛護(hù)實(shí)驗(yàn)器材。器材損壞時(shí)，應(yīng)立即報(bào)告老師，聽候處理。(8)易燃物品(酒精、二甲苯等)不準(zhǔn)接近火源。一旦起火，應(yīng)立即用沾水的布或沙土覆蓋撲火。(9)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，將實(shí)驗(yàn)臺(tái)整理好，值日同學(xué)打掃室內(nèi)衛(wèi)生，并檢查水、電等開關(guān)是否關(guān)好，防止發(fā)生事故。(10)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，到更衣室脫下實(shí)驗(yàn)服，將實(shí)驗(yàn)服放人衣柜內(nèi)，洗手消毒后離去。(6)如將活菌碰到手上，應(yīng)將手浸入來蘇水中5-10min，然5消毒與滅菌

原理：微生物由蛋白質(zhì)、核酸、脂類等構(gòu)成，極易受外界條件的影響，對(duì)多種物理、化學(xué)因素都敏感。消毒與滅菌就是根據(jù)這一原理抑制或殺死外環(huán)境中的病原微生物。消毒與滅菌原理：微生物由蛋白質(zhì)、核酸、脂類等構(gòu)成，極6消毒(disinfetion)殺死物體上病原微生物的方法，并不一定能殺死含芽胞的細(xì)菌和非病原微生物。用以消毒的藥品稱為消毒劑(disinfectant)。一般消毒劑在常用的濃度下，只對(duì)細(xì)菌的繁殖體有效，對(duì)其芽胞則需要提高消毒劑的濃度和延長(zhǎng)作用的時(shí)間。滅菌(sterilization)殺滅物體上所有微生物的方法。因此，滅菌比消毒要求高，包括殺滅病原微生物和非病原微生物、細(xì)菌的繁殖體和芽胞。消毒(disinfetion)殺死物體上病原微生物的方法7

防腐(antisepsis)防止或抑制細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的方法，細(xì)菌一般不死亡。同一種化學(xué)藥品在高濃度時(shí)為消毒劑，低濃度時(shí)為防腐劑。無菌(asepsis)不含活菌的意思。防止細(xì)菌進(jìn)入人體或其它物品的操作技術(shù)，稱為無菌操作。

8一、物理消毒滅菌法（一）熱力滅菌法干熱滅菌法：火焰灼燒滅菌和熱空氣滅菌。原理加熱使蛋白質(zhì)變性，與水的含量有關(guān)，當(dāng)環(huán)境和細(xì)胞含水量越大，凝固越快。（1）焚燒：被污染的紙張、實(shí)驗(yàn)室有傳染性的動(dòng)物尸體、無經(jīng)濟(jì)價(jià)值的物品可以燒掉。（2）燒灼：火焰灼燒適用于接種環(huán)、接種針和金屬用具如鑷子等，試管口和瓶口，涂布用玻璃棒。一、物理消毒滅菌法9（3）干烤：干烤滅菌法需在干烤箱進(jìn)行，靠熱空氣進(jìn)行滅菌。這種方法適用于玻璃器皿、金屬器械以及不能遇水的油脂、凡士林等滅菌。滅菌時(shí)一般加熱至160～170℃2小時(shí)可達(dá)到滅菌的目的。在裝滿物品的干烤箱內(nèi)，不同部位的溫度差可達(dá)30～40℃，故溫箱內(nèi)最好裝有鼓風(fēng)機(jī)使溫度均勻。箱內(nèi)物品不宜裝得太多，以免影響空氣的流通。（4）紅外線：紅外線烤箱，供小件器械(鑷子、剪刀等)以及玻璃注射器等迅速滅菌用。（3）干烤：干烤滅菌法需在干烤箱進(jìn)行，靠熱空氣進(jìn)行滅菌。這種10注意事項(xiàng)：1）培養(yǎng)基、橡膠制品、塑料制品不能用此法；2）溫度控制在<180°；3）物品不能太擠；4）溫度降至70°時(shí)才開箱門。注意事項(xiàng)：112.濕熱滅菌法:

原理：因?yàn)闈駸嶂芯w吸水，蛋白質(zhì)容易凝固。蛋白質(zhì)凝固時(shí)所需溫度與其含水量成反比關(guān)系，即蛋白質(zhì)含水量增加，所需凝固溫度降低；濕熱的蒸氣有潛熱存在。濕熱的穿透力比干熱大。試驗(yàn)證明將100層的布卷，如用130～140℃干熱，加熱4小時(shí)，布卷第20層的溫度只有86℃，第100層的溫度不到70℃，而用105℃的濕熱，加熱3小時(shí)布卷第20層到100層的溫度都是101℃。所以效果比同溫度下干熱好。2.濕熱滅菌法:12（1）巴氏消毒法(pasteurization)：常用于牛奶和酒類等物品的消毒。具體的消毒方法有兩種：一是以61.1～62.8℃消毒30分鐘；另一方法是以71.7℃，消毒15～30秒鐘。(2)煮沸消毒法：煮沸5分鐘，可殺滅所有的細(xì)菌繁殖體。但殺死芽胞則需一至數(shù)小時(shí)。如在水中加入1%碳酸鈉即可提高沸點(diǎn)，增強(qiáng)殺滅芽胞作用，同時(shí)又可防止金屬器械生銹。如水中加2～5%石炭酸，則10～15分鐘后可破壞芽胞，所以許多醫(yī)療器械如手術(shù)刀、剪、鑷子、膠管、注射器等，常用煮沸消毒。（1）巴氏消毒法(pasteurization)：常用于牛奶13(3)流通蒸氣消毒法：用阿諾氏滅菌器或普通蒸氣籠進(jìn)行。因此在正常大氣壓下，故溫度不會(huì)超過100℃。普通細(xì)菌的繁殖體15～30分鐘可殺死。但芽胞不易消滅。(4)間歇滅菌法：有些物質(zhì)不能加熱至100℃以上，例如含血清的培養(yǎng)基等，為了消滅其中的細(xì)菌芽胞，須用間歇滅菌法。方法是用阿諾滅菌器或用蒸籠加熱100℃維持30分鐘，每天進(jìn)行一次，連續(xù)三天。第一次加熱后，細(xì)菌的繁殖體即被殺滅，而芽胞還能存活，為了使芽胞發(fā)芽成繁殖體，將被滅菌的物品取出放在室溫37℃溫箱內(nèi)過夜，第二天再加熱一次，則可殺死由芽胞生成的繁殖體。為了達(dá)到徹底滅菌，照上法再進(jìn)行第三次加熱，這樣所有的芽胞將被殺滅。應(yīng)用間歇滅菌法，在間歇期必須提供芽胞發(fā)芽所需條件。(3)流通蒸氣消毒法：用阿諾氏滅菌器或普通蒸氣籠進(jìn)行。因此在14(5)高壓蒸氣滅菌法設(shè)備：高壓滅菌鍋時(shí)間長(zhǎng)短根據(jù)滅菌物品的種類和數(shù)量不同有所變化。適用于培養(yǎng)基等的滅菌，在1.05kg/cm2蒸氣壓下，溫度達(dá)121.3℃，維持15～20分鐘，可殺滅包括細(xì)菌芽胞在內(nèi)的所有微生物。高壓蒸氣滅菌器就是根據(jù)這一原理制成的，常用于一般培養(yǎng)基、生理鹽水、手術(shù)敷料、工作服、橡膠物品等耐高溫、耐濕熱等物品的滅菌，也可用于玻璃器皿的滅菌。

(5)高壓蒸氣滅菌法15殺滅幾類主要微生物的濕熱條件微生物營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞孢子或芽孢酵母菌50-60℃，5分鐘70-80℃，5分鐘霉菌62℃，30分鐘80℃，30分鐘細(xì)菌（中溫細(xì)菌）50-70℃，10分鐘2-800分鐘，100℃；或120℃，05-12分病毒60℃，30分鐘殺滅幾類主要微生物的濕熱條件微生物營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞孢子或芽孢酵母菌16(二)電磁波輻射殺菌法1.紫外線：原理：紫外線波長(zhǎng)在200－300nm，具有殺菌作用，以265-266殺菌力強(qiáng)。此段波長(zhǎng)易被細(xì)胞中核酸吸收；這與DNA的吸收光譜范圍一致。紫外線主要作用于DNA，使一條DNA鏈上相鄰的二個(gè)胸腺嘧啶共價(jià)結(jié)合而形成雙聚體，因而改變DNA的分子構(gòu)型，干擾DNA的復(fù)制與轉(zhuǎn)錄，導(dǎo)致細(xì)菌的死亡或變異?？僧a(chǎn)生臭氧和過氧化氫。殺菌效力與強(qiáng)度和時(shí)間的乘積成正比。缺點(diǎn)：穿透力不大。距照射物<1.2m為宜。紫外線釋放的能量較低，故穿透力較弱，普通玻璃、紙張、塵埃、水蒸氣等均能阻擋紫外線。(二)電磁波輻射殺菌法17應(yīng)用：只能用于手術(shù)室、傳染病房、細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室的空氣消毒，或用于不耐熱物品的表面消毒。

注意事項(xiàng)：殺菌波長(zhǎng)的紫外線對(duì)人體皮膚、眼睛有損傷作用，使用時(shí)應(yīng)注意防護(hù)。2.電離輻射：包括高速電子、X射線和γ射線等。在足夠劑量時(shí)，對(duì)各種細(xì)菌均有致死作用。其機(jī)制在于產(chǎn)生游離基，破壞DNA。電離輻射常用于大量一次性醫(yī)用塑料制品的消毒，亦可用于食品的消毒，而不破壞其營(yíng)養(yǎng)成分。應(yīng)用：只能用于手術(shù)室、傳染病房、細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室的空氣消毒，或用于18

(三)濾過除菌法：是用物理阻留的方法將液體或空氣中的細(xì)菌除去。所用的器具是濾菌器(filter)。濾菌器含有微細(xì)小孔，只允許液體或氣體通過，而大于其孔經(jīng)的細(xì)菌等顆粒不能通過。濾過除菌主要用于一些不耐高溫滅菌的血清、毒素、抗生素，以及空氣等的除菌。目前過濾除菌采用兩類器具，一類叫深層濾器，例如用燒結(jié)玻璃、不上釉的陶瓷顆?；蚴迚撼傻臑V板等：另一類是濾膜。深層濾器已經(jīng)使用了100年以上，現(xiàn)在有逐漸被濾膜取代的趨勢(shì)，但因?yàn)榇罅砍恋砦锶菀锥氯麨V膜，所以一般先用深層濾器除去大的顆粒。濾膜一般由醋酸纖維素、硝酸纖維素、多聚碳酸酯、聚偏氟乙烯等合成纖維材料制成。濾膜的孔徑一般為0.2微米，它可以濾除絕大多數(shù)微生物的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞。過濾法的最大缺點(diǎn)是不能濾除病毒。

(三)濾過除菌法：是用物理阻留的方法將液體或空氣中的細(xì)菌除19注意事項(xiàng)：1、壓力適當(dāng)；2、無菌條件下進(jìn)行；3、防止?jié)B透現(xiàn)象。

我們來看一下濾膜滅菌是如何工作的。如左圖所示，在一個(gè)漏斗形容器上部放置數(shù)片濾膜。右圖是整個(gè)過濾系統(tǒng)。待除菌的液體裝在三角瓶中（1），用蠕動(dòng)泵（2）將液體抽到過濾器（3）內(nèi)，濾過的液體進(jìn)入事先滅菌的瓶子中。病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)ppt課件20病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)ppt課件21如果是滅菌少量液體，可以采用一種簡(jiǎn)單的的濾器。過濾法用途廣泛，除在飲料、藥物生產(chǎn)中使用外，空氣也常常用過濾法除菌。我們通常做微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)時(shí)滅過菌的容器一般用棉花塞堵在出口處，實(shí)際上就是過濾除去空氣中的微生物，使進(jìn)入容器的空氣中沒有微生物污染。微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室使用的超凈臺(tái)也是用過濾法除菌。如果是滅菌少量液體，可以采用一種簡(jiǎn)單的的濾器。22(四)超聲波殺菌(五)干燥與低溫：干燥能引起細(xì)菌蛋白質(zhì)的變性和鹽類的濃縮，妨礙細(xì)菌的生長(zhǎng)或?qū)е滤劳?。?xì)菌的種類對(duì)干燥的抵抗力差異很大。濃縮的鹽溶液或糖溶液可使細(xì)菌脫水而停止生命活動(dòng)，根據(jù)這些原理，干燥方法可保存食品。低溫可以殺死細(xì)菌，特別是反復(fù)凍融時(shí)更易破壞細(xì)菌細(xì)胞的生命。這是由于冰凍過程中細(xì)菌胞內(nèi)水分被胞外冰凍結(jié)晶吸收造成電解質(zhì)濃縮和菌體蛋白變性，胞壁受損使胞內(nèi)有機(jī)物(包括核酸、肽類等)隨之漏出，致使細(xì)菌死亡。實(shí)際工作中低溫（4～8℃）應(yīng)用于保存菌種或標(biāo)本。目前保存菌種較好的方法是真空冷凍干燥法。將細(xì)菌迅速冷凍干燥可維持生命數(shù)年之久，而不致改變其毒力及抗原性。此方法可保存菌種、毒種和生物制品。(四)超聲波殺菌23原理：應(yīng)用化學(xué)制劑破壞細(xì)菌代謝機(jī)能。殺菌劑如重金屬離子；抑菌劑如磺胺類及多數(shù)抗生素。注意：與藥品的濃度高低，時(shí)間長(zhǎng)短，微生物種類以及微生物所處的環(huán)境有關(guān)。常用化學(xué)殺菌劑有：乙醇、醋酸、石碳酸、福爾馬林、升汞、高錳酸鉀、新潔爾滅等二、化學(xué)消毒滅菌法

原理：應(yīng)用化學(xué)制劑破壞細(xì)菌代謝機(jī)能。殺菌劑二、化學(xué)消毒滅菌法24常用消毒劑種類

類別作用機(jī)制常用種類酚類蛋白變性，細(xì)胞膜損傷石炭酸醇類蛋白變性乙醇氧化劑氧化、蛋白沉淀高錳酸甲重金屬鹽氧化、蛋白酶變性紅汞、硫柳汞氧化劑氧化、蛋白沉淀過氧乙酸、碘酒表面活性劑蛋白變性，細(xì)胞膜損傷新潔而滅染料干擾氧化、抑制繁殖龍膽紫常用消毒劑種類

類別作用機(jī)制常用種類酚類蛋白變性，細(xì)胞膜損傷251.酚類（1）石炭酸：2%～5%，用于器械、排泄物消毒。（2）來蘇兒3%～5%，用于器械、排泄物、家俱、地面消毒；1%～2%用于手、皮膚消毒。（3）洗必泰：0.01%～0.05%，用于術(shù)前洗手，陰道沖洗等。2.醇類酒精：70%～75%，用于皮膚、體溫計(jì)消毒，不適用于傷口、粘膜。3.氧化劑（1）高錳酸鉀：0.1%，用于皮膚粘膜、水果、蔬菜、餐具等消毒。（2）過氧化氫：3%，用于皮膚創(chuàng)傷、化膿性炎癥、厭氧菌感染消毒。（3）過氧乙酸：0.2%～0.5%，用于塑料、玻璃、人造纖維消毒，皮膚消毒(洗手)。各種消毒劑的應(yīng)用1.酚類各種消毒劑的應(yīng)用26（4）碘伏：2%～5%，用于皮膚消毒。（5）氯：0.2～0.5ppm，用于飲水和游泳池水的消毒。（6）漂白粉：10%～20%，用于排泄物、地面、廁所消毒，飲水消毒。4.重金屬鹽類（1）硝酸銀：1%，用于新生兒滴眼，預(yù)防淋球菌感染。（2）紅汞：2%，用于皮膚、粘膜和小創(chuàng)傷消毒5.表面活性劑（1）新潔爾滅：0.1%，用于手術(shù)器械消毒、外科手術(shù)洗手；0.01%～0.05%用于粘膜及深部傷口感染消毒。（2）消毒凈：0.1%，用于手術(shù)器械消毒、外科手術(shù)洗手。6.烷化劑甲醛：10%，用于浸泡、物品表面消毒、蒸氣消毒。7.染料及酸堿類。（4）碘伏：2%～5%，用于皮膚消毒。27影響消毒作用的因素1.消毒劑的濃度和作用時(shí)間2.環(huán)境有機(jī)物的存在3.細(xì)菌的種類4.溫度5.pH值影響消毒作用的因素28介紹常用滅菌器材1、手提式高壓蒸汽滅菌器

凡耐高溫的普通培養(yǎng)基、藥品、手術(shù)器械、外科敷料等，均可用此法滅菌。為保證滅菌效果和安全，器內(nèi)要加入足量的水，裝入的物品不要過擠，冷空氣必須排盡，注意壓力表的工作情況，防止壓力表失靈而造成事故介紹常用滅菌器材1、手提式高壓蒸汽滅菌器凡耐高溫的普通培養(yǎng)29使用方法：(1)先將筒內(nèi)注水，然后把要滅菌的物品裝入內(nèi)筒，再把蓋擰緊，打開排氣閥門，開始加熱。(2)水沸騰后，排氣閥門開始排出氣體，待筒內(nèi)氣體全部排出后，關(guān)閉排氣閥門。(3)筒內(nèi)壓力達(dá)到要求時(shí)，調(diào)節(jié)熱源，維持103．4kPa、121℃，20-30min，即可達(dá)到滅菌的目的。(4)關(guān)閉熱源，自然放涼，待壓力表指針下降到零時(shí)，方可開蓋取物。使用方法：30注意事項(xiàng)：1）冷空氣徹底排除；）加水；3）壓力降為“0”時(shí)方可打開。在使用高壓蒸氣滅菌鍋滅菌時(shí)，滅菌鍋內(nèi)冷空氣的排除是否完全極為重要，因?yàn)榭諝獾呐蛎泬捍笥谒魵獾呐蛎泬?，所以，?dāng)水蒸氣中含有空氣時(shí)，在同一壓力下，含空氣蒸氣的溫度低于飽和蒸氣的溫度。滅菌鍋內(nèi)留有不同分量空氣時(shí)，壓力與溫度的關(guān)系見表注意事項(xiàng)：31干熱濕熱穿透力及滅菌效果比較透過布層的溫度/℃20層10層100層干熱130－1404867270.5不完全濕熱105.33101101101完全干熱濕熱穿透力及滅菌效果比較透過布層的溫度/℃20層10層1322、干烤箱干烤箱是用兩層金屬板制成的方形箱，中間充滿石棉，箱底有熱源(電爐)，并附有溫度計(jì)和自動(dòng)溫度調(diào)節(jié)器。滅菌時(shí)，打開通氣口，加熱到80℃時(shí)，關(guān)閉通氣口，待溫度上升到160-170℃時(shí)，保持2h。最高溫度不得超過180℃，超過180℃棉塞和包裝紙會(huì)被烤焦。滅菌后，待溫度下降40℃以下，再開箱取物。否則，冷空氣突然進(jìn)入，玻璃器材會(huì)炸裂。2、干烤箱干烤箱是用兩層金屬板制成的方形箱，中間充滿石棉，33耐高溫的玻璃器材、瓷器等常用此法滅菌，如培養(yǎng)細(xì)菌用的試管、平皿、吸管等。經(jīng)清洗和晾干后，燒瓶和試管口要塞上棉塞，平皿和吸管要放入特制的筒內(nèi)或用紙包好后再行滅菌，以使滅菌后的器材保持無菌狀態(tài)。耐高溫的玻璃器材、瓷器等常用此法滅菌，如培養(yǎng)細(xì)菌用的試34油浸鏡的原理、使用、保護(hù)顯微鏡的使用方法顯微鏡是醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中常用的儀器，尤其對(duì)作為形態(tài)學(xué)科的病原生物學(xué)來說，顯微鏡更是必不可少的儀器之一。所以要求醫(yī)學(xué)類專業(yè)的學(xué)生必須熟練掌握顯微鏡的使用方法，特別是油浸鏡的使用方法。油浸鏡的原理、使用、保護(hù)顯微鏡的使用方法35一、普通光鏡的基本結(jié)構(gòu)無論其外觀形狀如何，它都由兩部分構(gòu)成，即機(jī)械部分和光學(xué)部分。機(jī)械部分包括鏡座、鏡臂、載物臺(tái)及臺(tái)上的標(biāo)本推進(jìn)器、鏡筒、物鏡轉(zhuǎn)換盤以及升降調(diào)節(jié)器等，其主要作用是支撐、固定鏡頭，調(diào)節(jié)物像焦距，擱置和移動(dòng)標(biāo)本。光學(xué)系統(tǒng)包括反光鏡、聚光器，物鏡和目鏡。它的作用是收集光源并聚集于標(biāo)本上，然后通過透鏡放大成像映于眼簾，使肉眼本不能分辨的物體得以清楚觀察。

一、普通光鏡的基本結(jié)構(gòu)36

光學(xué)系統(tǒng)是光學(xué)顯微鏡的核心部分，而物鏡有又是其中最重要的部件。一般的光鏡配有3～4個(gè)物鏡（4倍、10倍、40倍、和100倍），標(biāo)本的放大主要靠物鏡。為了使用方便，常用紅、黃、藍(lán)、白的色圈分別標(biāo)記物鏡倍數(shù)。另外，在鏡頭上還刻有一些符號(hào)和數(shù)值來表示放大倍數(shù)、鏡口率、鏡筒長(zhǎng)度、蓋玻片厚度等。光學(xué)系統(tǒng)是光學(xué)顯微鏡的核心部分，而物鏡有又37病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)ppt課件38二、普通光鏡的使用方法

使用方法：①雙手托持顯微鏡，輕拿輕放。②檢查顯微鏡有無問題，如發(fā)現(xiàn)問題，立即向任課教師報(bào)告。③調(diào)光。檢查未染色標(biāo)本時(shí)，以弱光線為宜，此時(shí)可將集光撂下降或縮小光柵。檢查染色標(biāo)本時(shí)，以強(qiáng)光線為宜，此時(shí)應(yīng)適當(dāng)升高集光器或?qū)⒐鈻糯蜷_。自然光源用平面反光鏡，人工光源用囚面反光鏡。

二、普通光鏡的使用方法39④標(biāo)本觀察。將標(biāo)本置于載物臺(tái)上，先用低倍鏡觀察。用粗調(diào)節(jié)器調(diào)出物像后，再用細(xì)調(diào)節(jié)器調(diào)出清晰物像。在換高倍鏡觀察時(shí)，由于高倍鏡視野范圍比低倍鏡小，故須先將觀察內(nèi)容移至視野中央后再換之。有時(shí)顯微鏡存在偏心現(xiàn)象，此時(shí)要記住其偏心的方向和距離。寄生蟲標(biāo)本絕大多數(shù)為封片標(biāo)本，有一定厚度，因此在觀察時(shí)應(yīng)不斷調(diào)節(jié)細(xì)調(diào)節(jié)器。④標(biāo)本觀察。將標(biāo)本置于載物臺(tái)上，先用低倍鏡觀察。用粗調(diào)40三、油浸鏡的原理、使用、保護(hù)

原理：顯微鏡的放大倍數(shù)與玻璃透鏡的大小有關(guān)。油鏡的透鏡小，鏡孔也小，觀察時(shí)由于聚光器聚集的光源要通過載玻片、空氣，才能進(jìn)入物鏡中。玻璃與空氣的折光率不同，會(huì)產(chǎn)生折射，使一部分光線失掉，進(jìn)入物鏡的光線減少，致使觀察視野暗淡，物像不清。如果使用折射率與玻璃相近的油介質(zhì)，即可減少折射，增加視野亮度，提高分辨率。物鏡干燥系(A)與油浸系(B)的光線能通路如圖0．2所示。三、油浸鏡的原理、使用、保護(hù)41油鏡頭使用原理油鏡頭使用原理42使用：

油浸鏡觀察。應(yīng)先將集光器升至最高，光柵增至最大。轉(zhuǎn)開物鏡鏡頭，在玻片上加一滴鏡油，再轉(zhuǎn)換油鏡頭。眼從側(cè)方看，調(diào)節(jié)粗調(diào)節(jié)器，使鏡頭浸入鏡油中，以輕輕接觸玻片為止(注意勿壓碎玻片)。眼看目鏡，調(diào)節(jié)粗調(diào)節(jié)器緩慢下降載物臺(tái)，看到物像，立即停止，改用細(xì)調(diào)節(jié)器調(diào)出清晰物像。觀察結(jié)束后，應(yīng)用擦鏡紙蘸少許二甲苯擦拭油鏡頭，再用于擦鏡紙擦去殘存二甲苯。下降集光器，豎起反光鏡，將物鏡鏡頭擺成“人”字型，對(duì)號(hào)送入鏡盒內(nèi)。使用：43

保護(hù)：

細(xì)調(diào)節(jié)器是顯微鏡最精細(xì)、最脆弱的機(jī)械部分，只能做有限的旋轉(zhuǎn)。當(dāng)旋轉(zhuǎn)中遇到阻力，表明已達(dá)到極限，應(yīng)立即返回。病原學(xué)標(biāo)本及血涂片標(biāo)本必須按一定順序，逐個(gè)檢查，以免遺漏。保護(hù)：44紫外線殺菌試驗(yàn)（示教）波長(zhǎng)200～300nm的紫外線具有殺菌作用，其中以265～266nm最強(qiáng)，這與DNA的吸收光譜范圍一致。紫外線主要作用于DNA，使一條DNA鏈上相鄰的二個(gè)胸腺嘧啶共價(jià)結(jié)合而形成雙聚體，因而改變DNA的分子構(gòu)型，干擾DNA的復(fù)制與轉(zhuǎn)錄，導(dǎo)致細(xì)菌的死亡或變異。紫外線釋放的能量較低，故穿透力較弱，普通玻璃、紙張、塵埃、水蒸氣等均能阻擋紫外線，故只能用于手術(shù)室、傳染病房、細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室的空氣消毒，或用于不耐熱物品的表面消毒。殺菌波長(zhǎng)的紫外線對(duì)人體皮膚、眼睛有損傷作用，使用時(shí)應(yīng)注意防護(hù)。紫外線殺菌試驗(yàn)（示教）波長(zhǎng)200～300nm的紫外線具有殺菌45病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)ppt課件46實(shí)驗(yàn)材料：（1）菌種：葡萄球菌、大腸桿菌斜面培養(yǎng)物。（2）培養(yǎng)基:普通瓊脂平板培養(yǎng)基。（3）紫外線燈，接種環(huán),酒精燈等。實(shí)驗(yàn)方法(1)按無菌操作法用接種環(huán)分別從葡萄球菌、大腸桿菌斜面培養(yǎng)物上沾取細(xì)菌，反復(fù)交叉密涂于平板培養(yǎng)基上(注意不要?jiǎng)澠婆囵B(yǎng)基)。注明標(biāo)記。(2)打開平皿蓋，將小鑷子用酒精燈滅菌后，夾取無菌三角形黑紙片，貼瓊脂平板中央，并輕輕壓緊。放在紫外線燈管下30cm處，直接照射10min。(3)取下黑紙片，投入消毒缸內(nèi)，隨即蓋上平皿蓋，置于37℃培養(yǎng)18～24h觀察結(jié)果。實(shí)驗(yàn)材料：47實(shí)驗(yàn)方法(1)按無菌操作法用接種環(huán)分別從葡萄球菌、大腸桿菌斜面培養(yǎng)物上沾取細(xì)菌，反復(fù)交叉密涂于平板培養(yǎng)基上(注意不要?jiǎng)澠婆囵B(yǎng)基)。注明標(biāo)記。(2)打開平皿蓋，將小鑷子用酒精燈滅菌后，夾取無菌三角形黑紙片，貼瓊脂平板中央，并輕輕壓緊。放在紫外線燈管下30cm處，直接照射10min。(3)取下黑紙片，投入消毒缸內(nèi)，隨即蓋上平皿蓋，置于37℃培養(yǎng)18～24h觀察結(jié)果。實(shí)驗(yàn)方法48自然界細(xì)菌的分布目的：了解細(xì)菌在自然界及正常人體的分布，樹立嚴(yán)格的無菌操作觀念。

1、水中細(xì)菌的檢查2、空氣中細(xì)菌的檢查3、手指細(xì)菌的檢查4、口腔中細(xì)菌的檢查自然界細(xì)菌的分布目的：了解細(xì)菌在自然界及正常人體的分布，樹立49水中細(xì)菌的檢查[材料]高層瓊脂培養(yǎng)基、滅菌平皿、1mL自來水[方法]采用傾注平板法：1、取1mL自來水置于滅菌平皿中。2、取1支溶化且已經(jīng)冷至45℃左右的高層瓊脂培養(yǎng)基傾入平皿中，與自來水混勻后靜置待凝。3、待瓊脂冷凝后在平皿底面玻璃上寫上標(biāo)記。4、置于37℃溫箱孵育24h觀察細(xì)菌生長(zhǎng)情況及數(shù)量。水中細(xì)菌的檢查[材料]高層瓊脂培養(yǎng)基、滅菌平皿、1mL自來50空氣中細(xì)菌的檢查[材料]普通瓊脂平板[方法]把普通瓊脂平板蓋打開，在空氣中暴露15min，再蓋上平皿蓋，置于37℃溫箱培養(yǎng)24h，觀察平板上菌落數(shù)及菌落特點(diǎn)?？諝庵屑?xì)菌的檢查[材料]普通瓊脂平板51手指細(xì)菌的檢查[材料]普通瓊脂平板[方法]1、用玻璃筆在平皿底部中央畫一直線，分為1、2兩區(qū)。2、打開平皿蓋，用手指直接涂抹于1區(qū)。3、酒精棉球消毒手指后，用手指涂抹于2區(qū)。4、37℃溫箱培養(yǎng)24h，觀察結(jié)果。手指細(xì)菌的檢查[材料]普通瓊脂平板52口腔中細(xì)菌的檢查[材料]血瓊脂平板[方法]打開平皿蓋，向血瓊脂表面用力咳嗽數(shù)次，蓋上平皿蓋。37℃溫箱培養(yǎng)24h，觀察結(jié)果?？谇恢屑?xì)菌的檢查[材料]血瓊脂平板53細(xì)菌的培養(yǎng)培養(yǎng)基的制作培養(yǎng)基的介紹（物理性狀、用途）細(xì)菌的培養(yǎng)方法和生長(zhǎng)觀察細(xì)菌生化反應(yīng)檢查法細(xì)菌的培養(yǎng)培養(yǎng)基的制作54常用培養(yǎng)基制備一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1)掌握基礎(chǔ)培養(yǎng)基的制備方法。(2)了解細(xì)菌生長(zhǎng)的基本營(yíng)養(yǎng)條件。二、實(shí)驗(yàn)原理培養(yǎng)基是用人工方法將多種物質(zhì)按各類微生物生長(zhǎng)需要而制成的一種混合營(yíng)養(yǎng)物制品。培養(yǎng)基基本成分包括水、氮源、碳源、無機(jī)鹽等。另外，還需調(diào)整適宜微生物生長(zhǎng)的酸堿度，并做到無菌。常用培養(yǎng)基制備一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?5培養(yǎng)基按物理性狀分為固體、半固體和液體培養(yǎng)基三種。按用途分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基及選擇培養(yǎng)基?；A(chǔ)培養(yǎng)基中所含的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)能滿足一般細(xì)菌生長(zhǎng)所需，在基礎(chǔ)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加一些特殊成分(如糖類、血液、抑制劑等)，則可制成營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基及選擇培養(yǎng)基等。培養(yǎng)基按物理性狀分為固體、半固體和液體培養(yǎng)基56(一)肉湯培養(yǎng)基肉湯培養(yǎng)基是常用的液體培養(yǎng)基，也是制備細(xì)菌分離培養(yǎng)基和某些其他培養(yǎng)基的基礎(chǔ)。1．實(shí)驗(yàn)材料鮮牛肉500g(去脂肪和肌腱)，蛋白胨10g，氯化鈉5g，pH試紙，碳酸氫鈉(質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10％)，醋酸(質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10％)，試管、三角燒瓶、蒸餾水等。(一)肉湯培養(yǎng)基57

2．實(shí)驗(yàn)方法(1)將鮮牛肉500g切碎或絞碎，加水1000mL，放4℃冰箱過夜。(2)取出浸泡物倒人容器內(nèi)煮沸30min，放涼，使殘余的脂肪凝固，再用紗布或?yàn)V紙過濾，將濾液補(bǔ)足為原量。此溶液稱為肉浸液。(3)1000mL肉浸液中加入蛋白胨10g,氯化鈉5g，加熱溶解，放涼。

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(4)用精密pH試紙測(cè)酸堿度，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10％的碳酸氫鈉校正pH為7．2左右。(5)分裝于試管或三角燒瓶中，置高壓蒸氣(103．4kPa，121℃)滅菌器內(nèi)，20-30min。

59如用市售的牛肉膏代替鮮牛肉水時(shí)，可將牛肉膏溶成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.3％～0.5％的水溶液，再如上法制成培養(yǎng)基。另外，也可用合成干燥粉末制劑。其方法為：量取18g肉湯干燥粉末，加人1000ml,蒸餾水，加熱溶解后分裝，置高壓蒸氣(103．4kPa，121℃)滅菌器內(nèi)，20～30min后備用。如用市售的牛肉膏代替鮮牛肉水時(shí)，可將牛肉膏溶60

(二)普通瓊脂培養(yǎng)基普通瓊脂培養(yǎng)基是常用的固體培養(yǎng)基，包括普通瓊脂平板和普通瓊脂斜面兩種，前者用于分離純種細(xì)菌，后者用于增菌或保存菌種。瓊脂是從海藻中提取的一種多糖物質(zhì)，它對(duì)細(xì)菌無營(yíng)養(yǎng)作用，因其特性是100℃溶化，40℃以下凝固，所以將其加入肉湯中溶化后分裝，待其凝固后可制成斜面、高層、平板等各種類型的固體培養(yǎng)基。(二)普通瓊脂培養(yǎng)基61

1.實(shí)驗(yàn)材料肉水200ml蛋白胨2g氯化鈉1g瓊脂5g其他：無菌平皿、滅菌試管、三角燒瓶等

622.實(shí)驗(yàn)方法(1)按上述數(shù)量把肉水、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂放到三角燒瓶中，加熱溶化。(2)趁熱用pH試紙測(cè)酸堿度，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10％的碳酸氫鈉校正pH為7．2左右。(3)(103．4kPa，121℃)高壓蒸氣滅菌20~30min。2.實(shí)驗(yàn)方法63(4)趁熱將溶化的培養(yǎng)基倒人滅菌平皿內(nèi)，每個(gè)平皿倒入約15mL,，凝固后即成普通瓊脂平板培養(yǎng)基；如趁熱將培養(yǎng)基倒人滅菌試管內(nèi)，然后將試管斜放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，則凝固后即成普通瓊脂斜面培養(yǎng)基。普通瓊脂培養(yǎng)基也可用市售的營(yíng)養(yǎng)瓊脂粉(含有普通瓊脂平板培養(yǎng)基的各種成分并已調(diào)好pH值)制備，用法見說明書。(4)趁熱將溶化的培養(yǎng)基倒人滅菌平皿內(nèi)，每個(gè)64新鮮平皿培養(yǎng)基擱置斜面新鮮平皿培養(yǎng)基擱置斜面65病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)ppt課件66(三)肉湯半固體培養(yǎng)基(1)在上述制備的肉湯培養(yǎng)基中，加人質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0．5％的瓊脂，加熱溶化，用脫脂棉過濾，補(bǔ)足水分。(2)用0．1mol／LNaOH調(diào)pH至7．6。(3)分裝小試管中(每管約3支)，管口用金屬試管帽、棉塞或耐高溫的膠塞塞好，置高壓蒸氣滅菌器內(nèi)，經(jīng)103．4kPa，121℃，20～30min滅菌即成。此培養(yǎng)基主要用于觀察細(xì)菌動(dòng)力和保存菌種。(三)肉湯半固體培養(yǎng)基67

(四)血液瓊脂培養(yǎng)基有些細(xì)菌其營(yíng)養(yǎng)要求較高，在普通瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)不良，可用血液瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。1．實(shí)驗(yàn)材料普通瓊脂培養(yǎng)基200ml脫纖維的新鮮羊血或兔血10 22ml(四)血液瓊脂培養(yǎng)基682.實(shí)驗(yàn)方法(1)加熱熔化普通瓊脂培養(yǎng)基.(2)待冷至50度左右時(shí),加入無菌的脫纖維血液,混勻(注意勿使產(chǎn)生泡沫).(3)分注于滅菌試管或平皿中，制成血斜面或血平板培養(yǎng)基。2.實(shí)驗(yàn)方法69細(xì)菌的培養(yǎng)方法和生長(zhǎng)觀察細(xì)菌的培養(yǎng)方法是將待檢臨床標(biāo)本接種于適宜的培養(yǎng)基上進(jìn)行孵育,獲得純種細(xì)菌的方法.它是進(jìn)一步鑒定細(xì)菌,研究細(xì)菌的生物學(xué)特性、致病性及藥物的敏感性,進(jìn)而指導(dǎo)臨床診斷和治療疾病的基礎(chǔ)。細(xì)菌的培養(yǎng)方法和生長(zhǎng)觀察細(xì)菌的培養(yǎng)方法是將待檢臨床標(biāo)70

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1)掌握細(xì)菌常用的培養(yǎng)方法和無菌操作技術(shù)。(2)學(xué)會(huì)正確觀察細(xì)菌的生長(zhǎng)情況。

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二、實(shí)驗(yàn)材料(1)菌種包括:葡萄球菌、大腸桿菌、枯草桿菌及乙型溶血性鏈球菌的斜面培養(yǎng)物。(2)培養(yǎng)基有:普通瓊脂平板培養(yǎng)基,普通瓊脂斜面培養(yǎng)基,血液瓊脂平板培養(yǎng)基,肉湯培養(yǎng)基,半固體培養(yǎng)基。(3)接種環(huán),接種針,酒精燈等。

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三、實(shí)驗(yàn)方法 (一)平板分離培養(yǎng)法

具有較大的表面積,可用于從混雜的檢查材料中分離出純種細(xì)菌,其要點(diǎn)是如何獲得較多的孤立菌落.常用劃線法有連續(xù)法和分段劃線法.

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1.連續(xù)劃線法檢查材料中含菌量較少時(shí),可用本法.先將接種環(huán)用火焰滅菌,待冷卻后,挑取檢查材料涂于平板的上端,隨即向下連續(xù)平行劃線至平板中部,然后將平板旋轉(zhuǎn)180°,由平板的另一端連續(xù)平行劃線至平板的中部。劃線要密而不重復(fù)，充分利用平板的表面。1.連續(xù)劃線法742．分段劃線法

檢查材料中含菌量較多時(shí)，可用本法以求獲得孤立菌落。先將接種環(huán)用火焰滅菌，待冷卻后，挑取檢查材料涂于平板的上端，隨即向下連續(xù)平行劃線于1區(qū)。再將接種環(huán)用火焰滅菌，待冷卻后劃線于2區(qū)。同法再劃線于3區(qū)?？筛鶕?jù)菌量的不同，決定分段的數(shù)目。病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)ppt課件75

劃線完畢，先蓋好平板，再將接種環(huán)上殘留的細(xì)菌用火焰滅菌。在平板底面，用記號(hào)筆做好記錄，送37℃恒溫箱中培養(yǎng)，經(jīng)18-24h，可觀察有無孤立菌落生長(zhǎng)，每一孤立菌落即為一種純種細(xì)菌。一般病原菌的菌落數(shù)少于雜菌，故在分離培養(yǎng)時(shí)，應(yīng)力求出現(xiàn)較多的孤立菌落，以提高病原菌檢出率。

76注意以下幾點(diǎn)：a．培養(yǎng)皿蓋盡量緊貼培養(yǎng)皿，以減少空氣污染。b．讓接種環(huán)在培養(yǎng)基表面滑動(dòng)。手持接種柄的平衡點(diǎn)（接近中心）處，輕輕拉動(dòng)。劃線時(shí)接種環(huán)與平板表面所呈的角度要小于(30-40°)，以免劃傷瓊脂表面。c．動(dòng)作要迅速謹(jǐn)慎。不要對(duì)著打開的瓊脂表面呼吸；盡快蓋好培養(yǎng)皿。注意以下幾點(diǎn)：77劃線分離法劃線分離法78平板劃線法平板劃線法79

(二)斜面培養(yǎng)基接種法

斜面培養(yǎng)基不易污染，常用于培養(yǎng)純種細(xì)菌。斜面培養(yǎng)基通常也采用劃線接種法。實(shí)驗(yàn)方法接種時(shí)，右手持接種環(huán)，先將接種環(huán)滅菌，待冷卻后挑取細(xì)菌。用手取斜面培養(yǎng)基，用右手小指和小魚際拇指拔去試管棉塞，將管口通過火焰略微加熱滅菌，再將接種環(huán)插入試管(勿接觸管口）由斜面底部向上劃一直線，然后再從斜面底部向上連續(xù)平行。劃線完畢，再將試管口通過火焰，棉塞滅菌后，塞好棉塞，最后將接種環(huán)滅菌。將接種好的斜面培養(yǎng)基做好標(biāo)記：放入37℃恒溫箱中培養(yǎng)18～24h。(二)斜面培養(yǎng)基接種法80

(三)液體培養(yǎng)基接種法

液體培養(yǎng)基接種法可用于增菌，也可通過觀察細(xì)菌生長(zhǎng)情況來鑒別細(xì)菌。 實(shí)驗(yàn)方法可采用“雙管移植法”。將瓊脂斜面上生長(zhǎng)的細(xì)菌移種于肉湯培養(yǎng)基中，即左手持細(xì)菌斜面培養(yǎng)物和肉湯培養(yǎng)基兩支試管，右手持接種環(huán)，按無菌操作法取少量細(xì)菌，在肉湯表面稍上的管壁上輕輕研磨，使細(xì)菌混入培養(yǎng)基內(nèi)。無菌操作，塞好棉塞，放入37℃恒溫箱中培養(yǎng)18～24h。(三)液體培養(yǎng)基接種法81

(四)半固體(高層)培養(yǎng)基接種法

半固體(高層)培養(yǎng)基接種法主要用于測(cè)定細(xì)菌有無動(dòng)力或保存菌種。某些生化反應(yīng)檢查也可用此方法。實(shí)驗(yàn)方法采用穿刺培養(yǎng)法。將接種針火焰滅菌后，挑取菌落或斜面培養(yǎng)基上的純種細(xì)菌，穿刺于培養(yǎng)基的中心，但不可刺至管底，一般刺入2／3即可。無菌操作，塞好棉塞，放入37℃恒溫箱中培養(yǎng)18～24h。(四)半固體(高層)培養(yǎng)基接種法82

四、附錄細(xì)菌的其他培養(yǎng)方法

(一)二氧化碳培養(yǎng)法二氧化碳培養(yǎng)法是將某些細(xì)菌(如腦膜炎圖2．4奈氏菌、布氏桿菌等)在增加C02的環(huán)境中培養(yǎng)的方法。產(chǎn)生C02的方法很多，常用的方法有燭缸法和化學(xué)法。

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1．燭缸法

將已經(jīng)接種好的細(xì)菌或標(biāo)本的血瓊月抨板置容量約2000mL的磨口標(biāo)本缸或干燥器內(nèi)，缸蓋及缸口周圍涂以凡士林，將點(diǎn)燃的蠟燭直立于缸內(nèi)(勿靠近缸壁，以免炸缸)，蓋好缸蓋。缸內(nèi)燃燭約經(jīng)0．5-1rain因氧減少而自行熄滅。此時(shí)容器內(nèi)C02的體積分?jǐn)?shù)約為5％-10％，最后連同容器一并置于37~C恒溫箱中培養(yǎng)。1．燭缸法842．化學(xué)法(重碳酸鈉鹽酸法)

按每升容積加入重碳酸鈉0．4g與濃鹽酸0．35mL的比例，分別將兩者置于容器(平皿)內(nèi)，連同容器置于標(biāo)本缸或干燥器內(nèi)，蓋緊缸蓋后傾斜容器，使鹽酸與重碳酸鈉接觸生成C02，以利于細(xì)菌生長(zhǎng)。病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)ppt課件85(二)厭氧培養(yǎng)法(Anaerobicculture)

1．厭氧罐法

抽氣—換氣法?？捎脦ч_關(guān)的真空干燥缸來做，先用真空泵抽去缸中氧氣，使氣壓降到133．3h(10mmHg)，缸中放有催化劑粒，以催化殘余的0》和H2化合成水，造成厭氧環(huán)境。缸中還放有美藍(lán)指示劑，如呈厭氧狀態(tài)，美藍(lán)還原成五色美藍(lán)。檢查厭氧程度還可用生物學(xué)指標(biāo)，培養(yǎng)基上接種厭氧菌(如溶血酸菌或壞死梭菌)、需氧菌(如枯草桿菌)，培養(yǎng)后厭氧菌生長(zhǎng)而需氧菌不長(zhǎng)者為合格。(二)厭氧培養(yǎng)法(Anaerobicculture)86

(2)氣袋法

氣袋法是用化學(xué)方法在塑料袋中造成厭氧環(huán)境以培養(yǎng)厭氧菌的方法。氣袋是用無毒、透明但不透氣的復(fù)合塑料薄膜制成，內(nèi)有化學(xué)藥品等，以產(chǎn)生一定比例的H2和C02；有鈀催化劑管，以催化袋中的02和H2化合成水而去氧；有美藍(lán)指示管，確定袋中是否呈無氧狀態(tài)。使用時(shí)將已接種好的平板裝人袋中，用彈簧夾夾緊袋口，使其呈封閉狀態(tài)。然后將袋內(nèi)化學(xué)藥品鈀催化劑管折斷，(2)氣袋法87

待其化學(xué)作用完畢后，再將袋內(nèi)已還原的美藍(lán)指示管折斷，如美藍(lán)不變色即表示袋內(nèi)已處于無氧狀態(tài)，即可放人37~C恒溫箱中培養(yǎng)。厭氧袋質(zhì)量輕，攜帶方便，不但實(shí)驗(yàn)室可用，而且可外出采樣和進(jìn)行床邊接種。

882．焦性沒食子酸法

取大試管1支，配以大小合適的橡皮塞。將已接種好細(xì)菌的試管放人大試管中，并在大試管底部的紗布或脫脂棉上，放焦