淄博市300份市售水產(chǎn)品中弧菌的污染調(diào)查

淄博市300份市售水產(chǎn)品中弧菌的污染調(diào)查

嗜水動(dòng)物是引起食源性疾病的主要病原體之一。它廣泛分布于海洋、淡水或水生生物中。通常，鹽濃度較大的水域或水生動(dòng)物的表面和腸道檢測(cè)率較高。主要致病性弧菌以霍亂弧菌、副溶血性弧菌、河弧菌、創(chuàng)傷弧菌和溶藻弧菌最為常見(jiàn)1材料和方法1.1樣品采集市售水產(chǎn)品采購(gòu)自農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)、集貿(mào)市場(chǎng)、批發(fā)市場(chǎng)、超市。種類(lèi)包括淡水魚(yú)產(chǎn)品、海水魚(yú)產(chǎn)品、甲殼類(lèi)水產(chǎn)品、雙殼貝類(lèi)、螺。1.2細(xì)菌鑒定試劑3%氯化鈉堿性蛋白胨水(北京陸橋技術(shù)股份有限公司)、堿性蛋白胨水(北京陸橋技術(shù)股份有限公司)、TCBS瓊脂(北京陸橋技術(shù)股份有限公司)、科瑪嘉弧菌顯色培養(yǎng)基(科瑪嘉)、3%氯化鈉三糖鐵瓊脂(北京陸橋技術(shù)股份有限公司)、mCPC瓊脂(北京陸橋技術(shù)股份有限公司)、CC瓊脂(北京陸橋技術(shù)股份有限公司)、4號(hào)瓊脂(北京陸橋技術(shù)股份有限公司)、3%氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂(北京陸橋技術(shù)股份有限公司)、API20E細(xì)菌鑒定試劑條(法國(guó)梅里埃)、VITEK2革蘭陰性菌鑒定卡(法國(guó)梅里埃)、副溶血性弧菌診斷血清(日本生科研)、霍亂弧菌診斷血清(寧波天潤(rùn))、副溶血性弧菌三重核酸熒光PCR法檢測(cè)試劑盒(深圳生科原)、霍亂弧菌ctxAB核酸熒光PCR法檢測(cè)試劑盒(深圳生科原)、VITEK2生化鑒定儀(法國(guó)梅里埃)、熒光定量PCR儀(ABI7500)。1.3檢測(cè)方法1.3.1分離和鑒定副溶血性弧菌參照GB4789.7-2013《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)副溶血性弧菌檢驗(yàn)》1.3.2血液清學(xué)副溶血性弧菌參照GB4789.7-2013《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)副溶血性弧菌檢驗(yàn)》1.3.3中毒基因檢測(cè)1.3.3.副溶血性弧菌采用三重實(shí)時(shí)熒光PCR法,在一個(gè)PCR反應(yīng)體系中同時(shí)檢測(cè)副溶血性弧菌tlh、tdh、trh基因。結(jié)果判定以樣本檢測(cè)Ct值≤36為陽(yáng)性、Ct值≥39或無(wú)Ct值為陰性、Ct值在36～39范圍則需對(duì)樣本進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)。檢驗(yàn)結(jié)果解釋詳見(jiàn)表1。1.3.3.ct值的檢測(cè)采用實(shí)時(shí)熒光PCR法,定性檢測(cè)ctxAB基因。結(jié)果判定以樣本檢測(cè)Ct值≤34.5為陽(yáng)性、Ct值≥37.5或無(wú)Ct值為陰性、Ct值在34.5～37.5范圍則需對(duì)樣本進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)。檢驗(yàn)結(jié)果解釋見(jiàn)表2。1.4統(tǒng)計(jì)分析采用Excel對(duì)調(diào)查數(shù)據(jù)進(jìn)行錄入和匯總;采用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述,采用χ2結(jié)果2.1螺類(lèi)的總檢出率此次檢測(cè)共計(jì)300份水產(chǎn)品,有93份樣品檢出致病性弧菌,總檢出率為31.00%,其中螺類(lèi)的總檢出率最高(61.90%,13/21)。海水產(chǎn)品的總檢出率高于淡水產(chǎn)品(分別為33.72%和27.34%),差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2.2溶藻弧菌、霍亂弧菌5類(lèi)水產(chǎn)品中,副溶血性弧菌的檢出率最高,占全部陽(yáng)性菌株的72.38%(76/105),其次為溶藻弧菌(15.24%,16/105)和霍亂弧菌(11.43%,12/105)。檢出的副溶血性弧菌中,海水產(chǎn)品的檢出率高于淡水產(chǎn)品(分別為26.74%和23.44%),差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2.3血清學(xué)分類(lèi)2.3.1抗溶性弧菌的血清學(xué)檢出的76株副溶血性弧菌共鑒定出15種血清型,型別比較分散,以O(shè)2∶K-為主(21.05%),結(jié)果見(jiàn)表5。2.3.2霍永弧菌的血清學(xué)對(duì)檢出的12株霍亂弧菌進(jìn)行了O1群和O139群血清分型鑒定,結(jié)果均為非O1/O139型霍亂弧菌。2.4中毒基因的傳輸2.4.1三氟菌tlh、tdh、trh毒力基因的傳輸經(jīng)三重實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè),檢出的76株副溶血性弧菌全部攜帶tlh基因,只有2株攜帶tdh基因,攜帶情況與檢測(cè)情況見(jiàn)表6。2.4.2霍亂弧菌ctxag毒力基因的運(yùn)輸經(jīng)實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè),檢出的12株霍亂弧菌均未攜帶ctxAB基因。3市售水產(chǎn)品致病性弧菌污染原因分析本次檢測(cè)的300份樣品中,致病性弧菌的總體檢出率為31.00%(93/300),其中有2份樣品同時(shí)檢出3種致病性弧菌,占全部陽(yáng)性樣品的2.15%(2/93);有8份樣品同時(shí)檢出2種致病性弧菌,占全部陽(yáng)性樣品的8.60%(8/93)。淡水魚(yú)類(lèi)的總體檢出率低于海水魚(yú)類(lèi),二者之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,提示海水魚(yú)類(lèi)攜帶致病性弧菌而導(dǎo)致食源性疾病的風(fēng)險(xiǎn)仍然不容小視。螺類(lèi)的檢出率最高(61.90%),而且該產(chǎn)品檢出的副溶血性弧菌、霍亂弧菌、溶藻弧菌的檢出率均比其他水產(chǎn)品高,這可能與螺類(lèi)的生長(zhǎng)習(xí)性有關(guān)。螺類(lèi)生活區(qū)域很廣,溫度要求不嚴(yán)格,非常適合在水族箱或者水缸中養(yǎng)殖,可以與海水類(lèi)或者淡水類(lèi)產(chǎn)品混養(yǎng),這就增加了銷(xiāo)售環(huán)節(jié)中該類(lèi)產(chǎn)品的交叉污染概率。本次監(jiān)測(cè)還發(fā)現(xiàn),副溶血性弧菌的檢出率最高,不僅海水產(chǎn)品中檢出率高(26.74%),在淡水產(chǎn)品中也有較高的檢出率(23.44%),二者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這可能與在銷(xiāo)售環(huán)節(jié)中,海水產(chǎn)品與淡水產(chǎn)品混賣(mài),產(chǎn)品之間堆放緊密雜亂,造成交叉污染有關(guān)。海水魚(yú)類(lèi)檢出率明顯高于淡水魚(yú)類(lèi),二者存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,這也符合副溶血性弧菌的嗜鹽特性。雖然副溶血性弧菌是嗜鹽菌,在沿海地區(qū)多有檢出和導(dǎo)致食源性疾病的報(bào)道,但隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和產(chǎn)品快速流通,嗜鹽菌已逐步向內(nèi)陸地區(qū)蔓延,成為導(dǎo)致內(nèi)陸地區(qū)食品安全風(fēng)險(xiǎn)的重要因素之一大多數(shù)副溶血性弧菌感染的暴發(fā)都是由其不同血清型的菌株引起的,而引起大流行的優(yōu)勢(shì)血清型為O3∶K6無(wú)論是從臨床分離的副溶血性弧菌還是環(huán)境分離的菌株都含有tlh基因,而tdh具有腸毒素活性、細(xì)胞毒性和心臟毒性,被公認(rèn)為是副溶血性弧菌的主要毒力因子,神奈川現(xiàn)象主要是由tdh導(dǎo)致霍亂弧菌最主要的毒力基因是霍亂毒素基因(ctxAB基因),它主要存在于ctxΦ噬菌體基因組中。在外界因素的影響下,例如絲裂霉素C、陽(yáng)光、紫外線等,霍亂弧菌可以通過(guò)ctxΦ噬菌體的轉(zhuǎn)移,由無(wú)毒株轉(zhuǎn)變?yōu)橛卸局昃C合以上分析,我