質(zhì)量源于設(shè)計(jì)在去氧膽酸合成中的應(yīng)用

質(zhì)量源于設(shè)計(jì)在去氧膽酸合成中的應(yīng)用

去氧膽酸（da）注射液，其活性成分為去氧膽酸（圖1）。3'，12'二羥基-5'二羥基-5'。這是一種可注射的細(xì)胞溶解藥物。由美國(guó)凱塞拉制藥公司開發(fā)，于2015年4月29日在美國(guó)f和美國(guó)cal雜志上上市。該商品的名稱是dal。本品注入身體組織時(shí)可破壞細(xì)胞膜，導(dǎo)致細(xì)胞溶解，用于改善成人頜下相關(guān)脂肪的中至重度輪廓突出或面部過(guò)度豐滿，尚不建議用于除下頜脂肪細(xì)胞以外的其他任何部位1試劑和儀器9-羥基雄烯二酮（純度≥98%），山東賽托生物科技股份有限公司；對(duì)甲苯磺酸（純度≥99%），上海邦成化工有限公司；三叔丁氧基氫化鋁鋰（純度≥98%），叔丁醇鉀（純度≥99%），薩恩化學(xué)技術(shù)（上海）有限公司；乙基三苯基溴化膦（純度≥99%）、4-二甲氨基吡啶（純度≥99%）、對(duì)甲基苯甲酰氯（純度≥99%），上海麥克林生化科技；甲苯、乙酸乙酯、正庚烷、四氫呋喃、丙酮和10%Pd/C，均為北京化工。所有試劑均為分析純。Agilent1260-6120B質(zhì)譜儀、AeilentLC-MS聯(lián)用儀，美國(guó)安捷倫科技有限公司；BRUCK-ERAVANCE400核磁共振波譜儀，德國(guó)布魯克科技有限公司。2方法和結(jié)果2.1縮酮保護(hù)后合成去氧膽酸目前去氧膽酸合成主要有兩種策略：(1)以膽酸為起始原料半合成的策略，膽酸經(jīng)過(guò)沙瑞特氧化，選擇性氧化7位羥基為羰基，再通過(guò)黃鳴龍還原反應(yīng)脫除17位的取代基，得到目標(biāo)產(chǎn)物去氧膽酸（圖2），文獻(xiàn)合成路線1南京諾瑞特醫(yī)藥有限公司申請(qǐng)的專利在原研的基礎(chǔ)上做出如下改進(jìn)：(1)將17位羰基進(jìn)行縮酮保護(hù)，在3位手性羥基的構(gòu)建時(shí)，避免了17位羰基被還原為羥基的競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)，同時(shí)也避免了低溫反應(yīng)。(2)將5位的不對(duì)稱加氫調(diào)整為將17位羰基縮酮保護(hù)后進(jìn)行，避免了17位羰基加氫的副產(chǎn)物生成，詳細(xì)合成路線綜上所述，選擇以南京諾瑞特專利方法合成去氧膽酸及其中間體，同時(shí)為規(guī)避專利和提高檢測(cè)的靈敏度將保護(hù)基換為對(duì)甲基苯甲酰氯，在此背景下本研究設(shè)計(jì)出合成路線4。在合成的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)多個(gè)反應(yīng)步驟存在反應(yīng)轉(zhuǎn)化不完全、后處理復(fù)雜、收率較低或立體選擇性差等嚴(yán)重問(wèn)題。尤其是作為去氧膽酸合成的關(guān)鍵中間體7，至此步驟共構(gòu)建了2個(gè)關(guān)鍵的手性中心以及在17位引入了具有順式雙鍵構(gòu)型的側(cè)鏈，根據(jù)研究發(fā)現(xiàn)側(cè)鏈的雙鍵Z/E比例可極大程度上影響去氧膽酸17和20位光學(xué)純度，所以中間體7的質(zhì)量情況直接影響去氧膽酸產(chǎn)品質(zhì)量，關(guān)鍵中間體7的工藝研究和質(zhì)量控制在去氧膽酸原料藥的合成中至關(guān)重要，在此專利的基礎(chǔ)上進(jìn)行工藝開發(fā)優(yōu)化。2.2關(guān)鍵工藝參數(shù)優(yōu)化以本研究合成路線為基礎(chǔ)，結(jié)合對(duì)化學(xué)反應(yīng)的機(jī)制分析以及大量的研究性實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，對(duì)每一步單元反應(yīng)的關(guān)鍵工藝參數(shù)進(jìn)行詳細(xì)的優(yōu)化。從而得到質(zhì)量穩(wěn)定、可控的關(guān)鍵中間體和適合工業(yè)化生產(chǎn)的工藝路線。2.2.1乙酸乙酯的精制2是通過(guò)化合物1在硫酸催化反應(yīng)進(jìn)行羥基消除脫水獲得，從1的化學(xué)結(jié)構(gòu)和反應(yīng)機(jī)制可見，此反應(yīng)步驟存在由于羥基消除方向不同而產(chǎn)生的異構(gòu)體2a（圖6），但通過(guò)實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明反應(yīng)體系中異構(gòu)體雜質(zhì)2a含量<0.5%，而且通過(guò)多次粗品的精制實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，經(jīng)乙酸乙酯打漿純化可將此雜質(zhì)穩(wěn)定控制<0.05%，所以通過(guò)對(duì)后處理工藝的優(yōu)化，雜質(zhì)2a對(duì)關(guān)鍵中間體7和去氧膽酸產(chǎn)品質(zhì)量不造成影響。而且反應(yīng)收率可穩(wěn)定于88%～92%。由表1可知，乙酸乙酯和乙腈均能將雜質(zhì)2a精制到<0.05%，從收率角度出發(fā)，乙酸乙酯的收率更高，可進(jìn)一步對(duì)于乙酸乙酯精制溶劑的體積進(jìn)行篩選。由表2可知，乙酸乙酯2倍體積（2v）體系較為黏稠，不進(jìn)行后處理。隨著乙酸乙酯的量增加，除雜能力基本無(wú)太大變化，收率反而降低。因此考慮打漿體系松散、易于過(guò)濾等工藝可操作的前提下，選擇乙酸乙酯（3v）為最優(yōu)條件。2.2.2反應(yīng)時(shí)間及投料量?jī)?yōu)化化合物2的17位羰基在酸催化的條件下與乙二醇反應(yīng)生成縮酮獲得3。2的3位酮羰基可發(fā)生同樣反應(yīng)，生成潛在的工藝雜質(zhì)3a和3b（圖7)TLC、HPLC檢測(cè)中均發(fā)現(xiàn)明顯含量的雜質(zhì)3a和3b，所以有必要對(duì)反應(yīng)條件和化合物3的精制工藝進(jìn)行優(yōu)化。經(jīng)過(guò)催化劑種類、乙二醇投料當(dāng)量和反應(yīng)時(shí)間3個(gè)方面的工藝參數(shù)篩選，最終將工藝雜質(zhì)3a和3b控制在合理范圍內(nèi)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果以TLC、HPLC相結(jié)合進(jìn)行檢測(cè)，數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)見表3。由表3可知，三氯化鋁、五氧化二磷或乙酸催化時(shí)反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)，化合物2轉(zhuǎn)化率較低。原甲酸三乙酯或三甲基氯硅烷催化反應(yīng)時(shí)，化合物3與3a及3b的比例接近于1∶1∶1，選擇性較差。而對(duì)甲苯磺酸催化反應(yīng)則可將化合物2反應(yīng)基本完全，且選擇性相對(duì)較好。所以選用對(duì)甲苯磺酸作為反應(yīng)的催化劑，并進(jìn)一步對(duì)反應(yīng)時(shí)間和物料配比進(jìn)行優(yōu)化。由表4實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，隨著反應(yīng)時(shí)間增加，化合物2轉(zhuǎn)化率提高，但相應(yīng)雜質(zhì)3a和3b的含量同時(shí)增加。通過(guò)數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)，反應(yīng)在進(jìn)行約至3h時(shí)，反應(yīng)原料化合物2轉(zhuǎn)化率趨于相對(duì)恒定，但雜質(zhì)3a和3b含量增加趨勢(shì)開始加強(qiáng)。因此選擇反應(yīng)時(shí)間為3h。進(jìn)一步對(duì)乙二醇的投料量進(jìn)行優(yōu)化。由表5實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，隨著乙二醇的投料量的增加，反應(yīng)原料轉(zhuǎn)化率提高，但相應(yīng)的雜質(zhì)3a和3b的含量同時(shí)增加。通過(guò)數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)，乙二醇投料摩爾比提高至2.5時(shí)，反應(yīng)原料化合物2含量降低速率變緩，但雜質(zhì)3a和3b的含量增長(zhǎng)速度開始加快。所以乙二醇投料量選擇2.5倍量較為合理。最后將反應(yīng)工藝參數(shù)確定為選用對(duì)甲基苯磺酸為催化劑、乙二醇投料摩爾比為2.5、反應(yīng)時(shí)間為3h作為最優(yōu)反應(yīng)工藝條件，并進(jìn)一步通過(guò)了后處理打漿純化將雜質(zhì)3a和3b的含量穩(wěn)定地控制<0.1%，不對(duì)產(chǎn)品的質(zhì)量造成影響，且收率穩(wěn)定于65%～75%。多批次工藝確認(rèn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果也驗(yàn)證了參數(shù)選擇的合理性。2.2.3反應(yīng)時(shí)間對(duì)化合物3活性的影響化合物4是由化合物3經(jīng)過(guò)底物誘導(dǎo)的Pd/C不對(duì)稱催化加氫還原得到的單一立體構(gòu)型產(chǎn)物，但從反應(yīng)機(jī)制可知，反應(yīng)可能會(huì)產(chǎn)生5位差向異構(gòu)體雜質(zhì)4a，同時(shí)還會(huì)產(chǎn)生3位羰基被還原為羥基的工藝雜質(zhì)4b（圖8）。經(jīng)過(guò)系統(tǒng)的分析方法開發(fā)，確實(shí)檢測(cè)到雜質(zhì)4b。針對(duì)這些問(wèn)題，我們從反應(yīng)的催化體系、反應(yīng)時(shí)間和加氫壓力進(jìn)行優(yōu)化篩選，以期提高反應(yīng)收率和化合物4的質(zhì)量。由于化合物3溶解性較差，根據(jù)專利路線選擇N-甲基吡咯烷酮作為反應(yīng)溶劑。由表6可知，隨著反應(yīng)時(shí)間延長(zhǎng)工藝雜質(zhì)4b的含量會(huì)明顯增加，而雜質(zhì)4a并無(wú)明顯的變化趨勢(shì)，在保證化合物3轉(zhuǎn)化完全和控制雜質(zhì)含量的前提下，將反應(yīng)時(shí)間控制在4h，控制單一變量對(duì)反應(yīng)壓力進(jìn)行研究。由表7實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，氫氣壓力的增加會(huì)促進(jìn)工藝雜質(zhì)4b的含量增加，雜質(zhì)4a并無(wú)明顯的變化趨勢(shì)。優(yōu)選反應(yīng)氫氣壓力為0.2～0.4MPa。根據(jù)以上結(jié)論，通過(guò)對(duì)反應(yīng)壓力和反應(yīng)時(shí)間的優(yōu)化可實(shí)現(xiàn)對(duì)雜質(zhì)4b的控制，但對(duì)雜質(zhì)4a無(wú)明顯影響，含量始終為10%～12%，這可能是由反應(yīng)底物的特殊立體結(jié)構(gòu)所決定的，所以進(jìn)一步考察了不同的催化體系對(duì)反應(yīng)立體選擇性的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表8。嘗試通過(guò)引入含有孤對(duì)電子堿的配位效應(yīng)來(lái)抑制催化劑鈀碳的活性，從而提高反應(yīng)的立體選擇性。但實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，即使在催化量的弱堿性條件下，也會(huì)導(dǎo)致化合物3的縮酮分解并產(chǎn)生新的雜質(zhì)。另外還選擇考察了一些低活性催化劑如鈀/硫酸鋇和鈀/碳酸鈣等，但仍不能提高反應(yīng)的立體選擇性。對(duì)催化體系的篩選和研究目前還在進(jìn)行中，以得到相映的實(shí)驗(yàn)結(jié)論。在目前的實(shí)驗(yàn)批次中我們依舊采用鈀碳的催化體系，化合物4通過(guò)重結(jié)晶精制可穩(wěn)定控制雜質(zhì)4a和4b的含量均<0.3%，收率也可穩(wěn)定于70%～80%。所以目前工藝完全可滿足產(chǎn)品質(zhì)量控制和商業(yè)化生產(chǎn)的需求。2.2.4反應(yīng)條件的確定化合物4的3位羰基進(jìn)行還原反應(yīng)針對(duì)反應(yīng)的立體選擇性，將從反應(yīng)的關(guān)鍵工藝參數(shù)：還原劑種類、還原劑的投料當(dāng)量以及反應(yīng)溫度進(jìn)行考察篩選，從而對(duì)雜質(zhì)5a的含量進(jìn)行控制。由表9實(shí)驗(yàn)結(jié)果可見，在相同反應(yīng)溫度條件下，L-selectride對(duì)于3位還原反應(yīng)無(wú)任何立體選擇性，化合物5與5a比例接近于1∶1。K-selectride具有與我們預(yù)期相反的立體選擇性，生成產(chǎn)物80%為異構(gòu)體雜質(zhì)5a，而三叔丁氧基氫化鋁鋰具有符合預(yù)期的立體選擇性，生成產(chǎn)物90%為化合物5。所以選擇三叔丁氧基氫化鋁鋰作為反應(yīng)的還原劑。由表10的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可見，在三叔丁氧基氫化鋁鋰的投料摩爾比為1.2時(shí)化合物4不能完全轉(zhuǎn)化，投料比1.5可反應(yīng)完全，而且從投料比1.8的實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，適度過(guò)量投料不會(huì)對(duì)反應(yīng)有明顯影響，所以從工藝穩(wěn)定性和工業(yè)化成本考慮，確定工藝參數(shù)三叔丁氧基氫化鋁鋰的投料比為1.5。由表11的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可見，隨著反應(yīng)溫度降低，反應(yīng)的立體選擇性提高，3位差向異構(gòu)體雜質(zhì)5a含量有明顯降低趨勢(shì)，所以盡可能在符合工業(yè)化生產(chǎn)的基礎(chǔ)上選擇低溫反應(yīng)，有利于提高反應(yīng)收率和產(chǎn)品質(zhì)量?？紤]反應(yīng)釜的常規(guī)控溫介質(zhì)的降溫范圍，選擇的工藝反應(yīng)溫度為-15～-5℃。根據(jù)上述確定的主要工藝參數(shù)進(jìn)行了多批次得確認(rèn)實(shí)驗(yàn)，反應(yīng)體系中異構(gòu)體5a的含量可穩(wěn)定控制<10%，并經(jīng)過(guò)進(jìn)一步精制，雜質(zhì)5a可穩(wěn)定控制在<0.3%，收率為80%～85%。2.2.5反應(yīng)溫度的確定6是由5的17位羰基發(fā)生魏悌錫反應(yīng)通過(guò)對(duì)反應(yīng)溫度、磷葉立德試劑投料當(dāng)量、反應(yīng)溫度等方面優(yōu)化來(lái)控制雜質(zhì)6a的含量，同時(shí)對(duì)化合物6粗產(chǎn)物的精制工藝進(jìn)行了研究以進(jìn)一步控制雜質(zhì)6a的含量。表12的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，磷葉立德試劑投料比為3.5時(shí)仍有0.82%反應(yīng)原料未發(fā)生轉(zhuǎn)化，增加至4.0時(shí)反應(yīng)原料5剩余為0.15%，同時(shí)對(duì)雜質(zhì)6a的含量無(wú)明顯影響，所以綜合考慮工藝的穩(wěn)定性和生產(chǎn)經(jīng)濟(jì)性選擇投料比為4.0。從表13的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可知，反應(yīng)溫度對(duì)立體選擇性有明顯的影響，降低反應(yīng)溫度雖會(huì)相應(yīng)降低反應(yīng)速率，但明顯有利于對(duì)雜質(zhì)6a含量的控制。所以綜合反應(yīng)的選擇性和生產(chǎn)的經(jīng)濟(jì)性，選擇0～10℃作為最優(yōu)反應(yīng)溫度，不對(duì)更低反應(yīng)溫度進(jìn)行研究。由表14可知，篩選的3種精制溶劑對(duì)于雜質(zhì)6a有顯著的清除效果，產(chǎn)品化合物6的性狀均為類白色固體。其中乙醇的精制效果最為明顯，而且價(jià)格低廉，依此工藝條件可穩(wěn)定地將雜質(zhì)6a控制在<0.5%，反應(yīng)總收率不<80%。2.2.6反應(yīng)物溫度和時(shí)間對(duì)反應(yīng)的影響7為6的羥基保護(hù)產(chǎn)物，反應(yīng)機(jī)制簡(jiǎn)單無(wú)過(guò)多的工藝雜質(zhì)產(chǎn)生，而且7化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，性狀良好，同時(shí)在紫外區(qū)有較強(qiáng)的光譜吸收，有利于質(zhì)控方法建立，所以確定為去氧膽酸合成的關(guān)鍵中間體。此步驟主要從反應(yīng)溫度和物料配比進(jìn)行簡(jiǎn)要的工藝優(yōu)化，并考察化合物7的精制工藝，以控制關(guān)鍵的光學(xué)異構(gòu)體雜質(zhì)4a、5a和6a的在此步驟的衍生產(chǎn)物7c、7b和7a的含量（圖11），確保設(shè)計(jì)得到質(zhì)量合格的去氧膽酸原料藥。反應(yīng)溶劑選擇二氯甲烷，由表15可知，最佳反應(yīng)溫度是溶劑二氯甲烷的回流溫度40～45℃，而在15～20℃條件下反應(yīng)時(shí)間相對(duì)過(guò)長(zhǎng)。在控制二氯甲烷回流溫度條件下，酰氯投料量為2.5當(dāng)量可使反應(yīng)速率更高，同時(shí)轉(zhuǎn)化率也相應(yīng)提高。由此確定了化合物7的制備工藝參數(shù)為：對(duì)甲基苯甲酰氯投料當(dāng)量為2.5，反應(yīng)溫度為40℃～45℃。進(jìn)一步對(duì)此工藝下生產(chǎn)的關(guān)鍵中間體化合物7進(jìn)行精制工藝研究，并嚴(yán)格控制關(guān)鍵雜質(zhì)7c、7b和7a的含量，并訂入化合物7的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)表17的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，使用丙酮在回流的條件下進(jìn)行打漿，對(duì)化合物7粗品精制效果最為明顯，可將雜質(zhì)7b徹底清除，將雜質(zhì)7c控制在0.09%，對(duì)雜質(zhì)7a同樣有明顯清除效果。但考慮到雜質(zhì)7a在后續(xù)工藝中還會(huì)繼續(xù)轉(zhuǎn)化為去氧膽酸中間體化合物9及其工藝雜質(zhì)20位差向異構(gòu)體，所以在7中可將雜質(zhì)7a控制在適當(dāng)范圍內(nèi)即可，在化合物9中進(jìn)一步對(duì)其衍生物進(jìn)行控制。根據(jù)多批次的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，確定在化合物7中控制雜質(zhì)7a含量≤0.3%，而其他雜質(zhì)包括7b和7c含量≤0.1%，可得到符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的去氧膽酸原料藥。2.2.7精制溶劑的篩選化合物2經(jīng)過(guò)后處理精制研究嚴(yán)格控制了異構(gòu)體含量，從而得到純度較高的產(chǎn)物。3通過(guò)對(duì)于對(duì)于催化劑選擇、乙二醇當(dāng)量的篩選，很好地控制了雜質(zhì)3-a、3-b的生成，從而提高了主產(chǎn)物的選擇性。4在合成過(guò)程中很難控制異構(gòu)體的生成，通過(guò)對(duì)精制溶劑的篩選，用乙醇將異構(gòu)體的含量控制在可接受的最低范圍內(nèi)，也得到性狀較好的類白色固體顆粒。5主要對(duì)堿的優(yōu)化，選擇出三叔丁氧基氫化鋁鋰生成與預(yù)期相同的立體選擇性構(gòu)型，從而減少了異構(gòu)體的生成，為得到純度較高的5奠定基礎(chǔ)。6通過(guò)對(duì)于反應(yīng)時(shí)間、試劑當(dāng)量的優(yōu)化，從而體現(xiàn)了工藝的經(jīng)濟(jì)性和實(shí)用性。7對(duì)于精制溶劑的篩選，同時(shí)結(jié)合4～6每步的精制，通過(guò)逐級(jí)控制的策略很好地將3個(gè)異構(gòu)體雜質(zhì)及衍生雜質(zhì)控制在合理的范圍內(nèi)。綜上所述，在每步反應(yīng)關(guān)鍵工藝參數(shù)優(yōu)化的基礎(chǔ)上以及結(jié)合后處理精制條件篩選，提高了每步反應(yīng)主產(chǎn)物的選擇性，嚴(yán)格控制了手性異構(gòu)體的含量，增強(qiáng)了雜質(zhì)清除效果，為合成高純度的去氧膽酸提供了保證。2.3制備化合物的方法2.3.1氯甲烷乙酸乙酯的合成1L三口瓶中加50.0g(0.17mol）化合物1和400ml二氯甲烷，攪拌溶解。向反應(yīng)體系中滴加濃硫酸24.5g(0.25mol），滴加過(guò)程中升溫不明顯，加熱至回流反應(yīng)，反應(yīng)5hTLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)（展開劑為二氯甲烷∶乙酸乙酯=2∶1）?；衔?消失后，向反應(yīng)體系中加200ml純化水，攪拌20min，滴加碳酸鈉溶液調(diào)劑pH值至7～8。靜止分層，水相用二氯甲烷50ml萃取2次，合并有機(jī)相。有機(jī)相用純化水100ml、10%氯化鈉100ml洗滌并用無(wú)水硫酸鈉干燥。過(guò)濾得有機(jī)相，將有機(jī)相進(jìn)行濃縮，濃縮除去有機(jī)相，向殘余物中加150ml乙酸乙酯打漿5h。過(guò)濾、抽干，40℃真空干燥得42g2，收率89.3%。2.3.2化合物25%的合成1L的三口瓶中加50.0g(0.18mol)2、1.0g(5.4mmol）對(duì)甲苯磺酸一水合物、500ml甲苯，安裝分水器和回流裝置，攪拌加熱至回流，回流30min。勻速滴加27.3g(044mol）乙二醇，滴加完畢后保溫反應(yīng)3hTLC檢測(cè)反應(yīng)（展開劑為乙酸乙酯∶正庚烷=1∶2），用半定量檢測(cè)化合物2<5%，停止反應(yīng)。反應(yīng)體系降溫至室溫，加碳酸氫鈉溶液100ml洗滌2次，靜止分液，收集有機(jī)相。有機(jī)相用氯化鈉100ml洗滌2次，靜止分層，收集有機(jī)相，有機(jī)相減壓濃縮至冷凝器基本不滴，加600ml正庚烷打漿2h，過(guò)濾得粗品。粗品用乙酸乙酯：正庚烷2∶1混合溶劑300ml熱打漿4h，過(guò)濾、抽干，40℃真空干燥得39.3g3，收率68.3%。2.3.3催化硫醚氧化tlc將50g(0.15mol）化合物3、5.0g10%Pd/C、500mlN-甲基吡咯烷酮加至氫化反應(yīng)釜中，攪拌均勻。進(jìn)行3次氮?dú)庵脫Q，3次氫氣置換，每次氫氣壓力在0.2～0.4MPa之間。控制反應(yīng)溫度25℃，保證反應(yīng)壓力在0.2～0.4MPa之間，反應(yīng)4h。TLC檢測(cè)反應(yīng)（展開劑為乙酸乙酯∶正庚烷=1∶2),3消失，反應(yīng)完全。將反應(yīng)體系進(jìn)行過(guò)濾，濾液中緩慢勻速滴加300ml純化水，析晶3h，過(guò)濾，50℃鼓風(fēng)干燥得粗品。粗品用150ml無(wú)水乙醇重結(jié)晶，得38.1g4，收率75.1%。2.3.4tlc檢測(cè)反應(yīng)2L的三口瓶中加入50.0g(0.15mol)4和500ml四氫呋喃，攪拌溶解。體系進(jìn)行3次氮?dú)庵脫Q，降溫至-10℃，緩慢勻速滴加230ml三叔丁氧基氫化鋁鋰的四氫呋喃溶液（0.23mol,1mol/L），滴加過(guò)程中控制溫度不超過(guò)-5℃，滴畢保溫反應(yīng)30min。TLC檢測(cè)反應(yīng)（展開劑為乙酸乙酯∶正庚烷=1∶2)4全部轉(zhuǎn)化為中間態(tài)，滴加6mol/L鹽酸溶液500ml，滴加過(guò)程中控制溫度至25℃，滴畢保溫反應(yīng)1h。TLC檢測(cè)反應(yīng)（展開劑為乙酸乙酯∶正庚烷=1∶2），中間態(tài)基本消失，反應(yīng)結(jié)束。反應(yīng)體系用乙酸乙酯250ml萃取2次，收集有機(jī)相。有機(jī)相用碳酸氫鈉溶液100ml10%氯化鈉溶液100ml各洗滌2次，靜止分層，收集有機(jī)相。有機(jī)相濃縮至冷凝器基本不滴，加入丙酮∶正庚烷1∶8混合溶劑200ml于30℃打漿4h，過(guò)濾、抽干，得37.5g5，收率85.8%。2.3.5mol的反應(yīng)2L的三口瓶中加乙基三苯基溴化磷257.6g(0.70mol）和四氫呋喃500ml，攪拌均勻。進(jìn)行3次氮?dú)庵脫Q，體系降溫至-5℃，在氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下緩慢加叔丁醇鉀78.5g(0.70mol），反應(yīng)液呈現(xiàn)橘紅色，控制溫度-5℃反應(yīng)1h。體系降溫至-15～-10℃，將50.0g(0.17mol）化合物5用300ml四氫呋喃溶解澄清，緩慢勻速滴加到反應(yīng)體系中，滴加過(guò)程中控制溫度低于-5℃。滴加完畢控制溫度-5～5℃反應(yīng)8h。TLC檢測(cè)反應(yīng)（展開劑為乙酸乙酯∶正庚烷=1∶2），化合物5基本消失，反應(yīng)完畢。體系降溫至-10℃，緩慢滴加10%氯化鈉溶液250ml，反應(yīng)放熱劇烈，體系由橘紅色逐漸變?yōu)榘咨珳啙?。向體系中加500ml甲基叔丁基醚萃取2次，收集有機(jī)相，有機(jī)相減壓濃縮至干，得粗品。粗品用乙醇150ml重結(jié)晶，得50.6g6，收率88.3%。2.3.6合成對(duì)甲基苯甲酰氯1L三口瓶中加500ml二氯甲烷，1.85g(15mmol)4-二甲氨基吡啶、46.0g(0.45mol）三乙胺，50.0g(0.17mol）化合物6，在20～30℃條件下攪拌溶解澄清?？刂茰囟?lt;30℃，勻速滴加58.4g(0.38mol）對(duì)甲基苯甲酰氯，滴加完畢，反應(yīng)體系升溫至回流。反應(yīng)4h,TLC檢測(cè)反應(yīng)（展開劑為乙酸乙酯∶正庚烷=1∶5),6消失反應(yīng)基本完全。體系降溫，加500ml純化水洗滌1次，收集有機(jī)相。有機(jī)相用2mol/L鹽酸溶液、10%氯化鈉溶液500ml各洗滌1次，靜止分層、收集有機(jī)相，有機(jī)相濃縮至干得粗品。粗品用丙酮200ml回流熱打漿，得54.1g7，收率85.1%。2.4制備雜質(zhì)的方法2.4.1化合物3b的合成將5.0g(17.5mmol）化合物2、0.17g(0.88mmol）對(duì)甲苯磺酸一水合物加到100ml三口瓶中，加10ml甲苯攪拌均勻。安裝分水裝置，體系升溫至120℃拌回流1h，稱取10.9g(175mmol）乙二醇勻速滴加到體系中，滴畢保溫120℃反應(yīng)6h。TLC檢測(cè)反應(yīng)（展開劑為正庚烷∶乙酸乙酯=2∶1）原料基本反應(yīng)完全，體系降溫至40℃，用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌2次，10%氯化鈉溶液洗滌1次，收集有機(jī)相。有機(jī)相減壓濃縮，柱色譜純化，得到類白色固體2.6g的3a和1.5g的3b，收率分別為39.8%和26.0%。3a:3b:2.4.2化合物三環(huán)合成鹽tlc的合成稱取1.50g(5.2mmol)5b、50mg(0.2mmol）對(duì)甲苯磺酸一水合物加至100ml三口瓶中，加甲苯15ml攪拌均勻。安裝分水裝置，體系升溫至120℃回流攪拌1h，稱取乙二醇3.23g(52mmol）勻速滴加到反應(yīng)體系中，滴畢反應(yīng)5h。TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)（展開劑為正庚烷∶乙酸乙酯=2∶1）原料反應(yīng)完全，體系降溫至40℃，加飽和碳酸氫鈉溶液洗滌兩次，收集有機(jī)相。有機(jī)相減壓濃縮，柱色譜純化，得類白色固體1.0g。將上述固體加至50ml三口瓶中，加乙酸乙酯15ml攪拌固體溶清，稱取1.46g(6.76mmol）氯鉻酸吡啶鹽分批加入體系中，體系呈棕紅色。反應(yīng)控制在25℃反應(yīng)15h,TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)（展開劑為正庚烷∶乙酸乙酯=2∶1）原料基本反應(yīng)完全。將反應(yīng)體系進(jìn)行過(guò)濾，濾餅用乙酸乙酯淋洗，濾液用硫代硫酸鈉20ml、10%氯化鈉20ml進(jìn)行洗滌3次，有機(jī)有機(jī)相。有機(jī)相減壓濃縮至干，加5ml乙醇室溫打漿1h，過(guò)濾，得到類白色固體0.52g，收率30.4%。4a:2.4.3叔丁氧基氫化鋁鋰的合成向100ml三口瓶中加2.0g(6.05mmol）化合物4、20ml四氫呋喃，攪拌至固體溶清。體系在氮?dú)獗Ｗo(hù)下降溫至0℃，量取三叔丁氧基氫化鋁鋰（1mol/L）溶液9.1ml勻速滴加，滴加過(guò)程中控制溫度<5℃，滴畢保溫反應(yīng)1h。TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)（展開劑為正庚烷∶乙酸乙酯=2∶1）原料反應(yīng)完全，反應(yīng)體系加20ml純化水淬滅反應(yīng)，體系用乙酸乙酯萃取兩次，收集有機(jī)相。有機(jī)相用10%氯化鈉洗滌兩次，有機(jī)相減壓濃縮至干，柱色譜純化，得類白色固體1.48g，收率73.6%。4b:2.4.4混合有機(jī)化合物5a2.4.5化合物4-二甲基吡啶的合成稱取2.0g(6.7mmol)6b，量取二氯甲烷20ml加至100ml三口瓶中，攪拌溶解澄清。稱取40mg(0.34mmol)4-二甲氨基吡啶、2.70g(26.8mmol）三乙胺加至反應(yīng)體系中，稱取對(duì)甲基苯甲酰氯3.10g(20.1mmol）勻速滴加至體系中，滴畢反應(yīng)升溫至回流6h。TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)（展開劑為正庚烷∶乙酸乙酯=5∶1）原料反應(yīng)完全，加純化水將反應(yīng)淬滅，收集有機(jī)相。有機(jī)相減壓濃縮，柱色譜純化，得類白色固體1.33g，收率49.0%。7b:2.4.5化合物4-二甲基吡啶的合成稱取1.7g(5.7mmol)6c，量取二氯甲烷17ml加至100ml三口瓶中，攪拌溶解澄清。稱取40mg(0.34mmol)4-二甲氨基吡啶、1.73g(17.1mmol）三乙胺加至反應(yīng)體系中，稱取對(duì)甲基苯甲酰氯2.21g(14.3mmol）勻速滴加至體系