復(fù)方沙坦酯片含量測定方法的建立

復(fù)方沙坦酯片含量測定方法的建立

氨基葡萄糖醇粉末是一種由苯磺酸氨基丙烯酸酯（aml）和氨基丙烯酸（cnc）組成的治療高血壓的復(fù)合劑。本產(chǎn)品是由各種血管緊張素受體阻滯劑和鈣抗劑組成的藥物。已有國內(nèi)外文獻(xiàn)報道,苯磺酸氨氯地平和坎地沙坦酯(化學(xué)結(jié)構(gòu)見圖1)的組合在降血壓1sz-33自動雙重純水蒸餾器島津高效液相色譜儀(配有SIL-20AC進(jìn)樣器、SPD-20AUV檢測器、LC-20AB泵及LCSolutions工作站,日本Shimadzu公司),BT25S電子天平(北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司),SZ-93自動雙重純水蒸餾器(上海亞榮生化儀器廠)。苯磺酸氨氯地平對照品(中國食品藥品檢定研究院,批號:100374-201204,含量質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.9%),坎地沙坦酯對照品(中國食品藥品檢定研究院,批號:100685-200401,含量質(zhì)量分?jǐn)?shù)100.0%),復(fù)方坎地沙坦酯片(規(guī)格:坎地沙坦酯8mg/片,氨氯地平5mg/片,批號:20150501、20150502、20150503,沈陽藥科大學(xué)研制),乙腈(色譜純,天津市康科德科技有限公司),甲醇(色譜純,天津市康科德科技有限公司),磷酸二氫鉀(分析純,天津市大茂化學(xué)試劑廠),重蒸水(實驗室自制)。2方法和結(jié)果2.1溶液制備2.1.1對照品儲備液的制備取苯磺酸氨氯地平對照品約14mg(以氨氯地平計約為10mg)、坎地沙坦酯對照品約16mg,精密稱定,共同置于100mL量瓶中,用乙腈-水(體積比為3∶2)溶解并稀釋至刻度,搖勻,得混合對照品儲備液;精密量取混合對照品儲備液5mL,置于100mL量瓶中,加乙腈-水(體積比為3∶2)稀釋至刻度,搖勻,得質(zhì)量濃度分別為5.00和8.00mg·L2.1.2供試品溶液的制備取本品10片,精密稱定,研細(xì),精密稱取適量(約相當(dāng)于氨氯地平5mg、坎地沙坦酯8mg),置100mL量瓶中,加乙腈-水(體積比為3∶2)90mL,超聲(頻率:59kHz,功率:250W)處理15min后,冷卻至室溫,用乙腈-水(體積比為3∶2)稀釋至刻度,搖勻,濾過,精密量取續(xù)濾液1mL,置10mL量瓶中稀釋至刻度,搖勻,作為供試品溶液。2.1.3白色輔助溶液的制備按處方比例稱取除苯磺酸氨氯地平、坎地沙坦酯以外的其余輔料,按“2.1.2”條下的方法操作,制成空白輔料溶液。2.2流動相、對照品、供試品溶液的制備色譜柱:ZirchromKromasilODS-1柱(150mm×4.6mm,5μm),流動相:甲醇-乙腈-20mmol·L取“2.1”條下空白輔料溶液、混合對照品溶液及供試品溶液,按“2.2”條色譜條件進(jìn)樣測定,記錄色譜圖,典型色譜圖見圖2。在上述色譜條件下,苯磺酸氨氯地平與坎地沙坦酯的分離度均大于1.5,輔料對二者的含量測定均無干擾,理論塔板數(shù)按坎地沙坦酯計算應(yīng)不低于3000。2.3苯磺酸氨氯地平以氨氯地平計質(zhì)量濃度為5.分別精密量取“2.1”條下混合對照品儲備液各4.0、4.5、5.0、5.5、6.0mL,分置于100mL棕色量瓶中,加乙腈-水(體積比為3∶2)溶液稀釋至刻度,搖勻,配制成苯磺酸氨氯地平(以氨氯地平計)質(zhì)量濃度分別為4.00、4.50、5.00、5.50、6.00mg·L2.4峰面積lm精密量取“2.1”條下混合對照品溶液,進(jìn)樣20μL,重復(fù)進(jìn)樣6次,記錄峰面積。6次重復(fù)進(jìn)樣苯磺酸氨氯地平和坎地沙坦酯峰面積RSD分別為0.4%和0.6%,表明色譜系統(tǒng)精密度良好。2.5重復(fù)性評價試驗取同一批號樣品(20150501),按“2.1.2”條下操作,平行制備供試品溶液6份,以“2.2”條下色譜條件測定,計算苯磺酸氨氯地平及坎地沙坦酯含量,進(jìn)行重復(fù)性評價。6份供試品溶液中苯磺酸氨氯地平和坎地沙坦酯含量的RSD分別為0.8%和0.7%,結(jié)果表明方法的重復(fù)性良好。2.6空白輔料用量試驗分別取苯磺酸氨氯地平和坎地沙坦酯對照品適量,按處方比例加入空白輔料,配制成供試品處方量中主藥成分含量質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為80%、100%和120%的供試溶液,每個質(zhì)量濃度配制3份,在“2.2”色譜條件下進(jìn)樣分析。結(jié)果均符合測定要求,見表1。2.7進(jìn)樣峰面積測定取“2.1”條下供試品溶液,按“2.2”條下色譜條件,分別于0、2、4、6、8、10h進(jìn)樣,記錄各峰面積。苯磺酸氨氯地平及坎地沙坦酯在10h內(nèi)峰面積RSD分別為0.5%和0.4%。表明供試品溶液在10h內(nèi)基本穩(wěn)定。2.8苯磺酸氨氯地平及坎地沙坦酯百分標(biāo)記量的測定取三批樣品,按“2.1.2”條方法操作,制備供試品溶液,另取混合對照品溶液,按“2.2”條下色譜條件分別進(jìn)樣測定,按外標(biāo)法以峰面積計算苯磺酸氨氯地平及坎地沙坦酯百分標(biāo)示量,結(jié)果見表2。結(jié)果表明,復(fù)方坎地沙坦酯片中苯磺酸氨氯地平和坎地沙坦酯標(biāo)示量的百分含量符合要求。3討論3.1對照品溶液的測定本品為復(fù)方制劑,故檢測波長的選擇需要兼顧二者的吸收情況。采用紫外分光光度儀,以流動相為溶劑對苯磺酸氨氯地平、坎地沙坦酯的對照品溶液分別進(jìn)行掃描,結(jié)果表明苯磺酸氨氯地平在238nm處有最大吸收,坎地沙坦酯在254nm處有最大吸收。根據(jù)兩主藥在各波長下的響應(yīng),由于坎地沙坦酯在238nm處吸光強度與在254nm處吸光強度相當(dāng)且制劑中的輔料在此波長處均無吸收,因此選擇238nm作為測定波長。3.2加入醋酸鹽對藥物保留時間的影響參照已有文獻(xiàn)[13-14]與《中華人民共和國藥典》標(biāo)準(zhǔn)及歐美藥典中的條件,最初嘗試了甲醇-水,乙腈-水系統(tǒng),發(fā)現(xiàn)苯磺酸氨氯地平不出峰。繼續(xù)對乙腈-緩沖鹽(醋酸鹽,磷酸鹽)體系考察,發(fā)現(xiàn)加入醋酸鹽時苯磺酸氨氯地平的峰形較差,不能滿足測定要求,而磷酸鹽可以提高藥物保留時間穩(wěn)定性,且峰形好。pH考察發(fā)現(xiàn)流動相pH對氨氯地平保留時間影響大,pH升高,保留時間延長,可能由于苯磺酸氨氯地平在不同pH條件下的電離平衡移動所致?？驳厣程辊榉菢O性物質(zhì),在弱酸條件下峰形好且保