花生殼提取液對亞硝酸鹽清除作用的研究

花生殼提取液對亞硝酸鹽清除作用的研究

花生又名長果，在我國廣泛種植，產量高。每年都會產生大量的次生生物花生殼。此外,生姜、陳皮、薄荷等提取液均有清除亞硝酸鹽和抑制亞硝胺合成的作用1材料和方法1.1材料和試劑花生殼(魯花18);亞硝酸鈉、對氨基苯磺酸、鹽酸萘乙二胺、無水乙醇、鹽酸等其他常規(guī)化學試劑均為分析純。1.2實驗儀器和儀器UV–2000型可見分光光度計:尤尼柯(上海)儀器有限公司;XMTD–8222電熱恒溫鼓風干燥箱:上海精宏實驗儀器有限公司;KS–300EI超聲波清洗器:寧波海曙科生超聲設備有限公司;DFY–250搖擺式高速萬能粉碎機:浙江溫嶺市林大機械有限公司;FA1004B電子分析天平:上海越平科學儀器有限公司;TDL–40B型高速離心機:上海安亭科學儀器廠。1.3測試方法1.3.1超聲波法醇提離心吸光度的測定花生殼預處理→花生殼粉→過100目篩→超聲波法醇提→離心→吸取上清液于25mL具塞試管,加入檢測所需試劑→搖勻,定容,靜置15min→比色法測吸光值1.3.2亞硝酸鈉標準溶液的配制亞硝酸鈉標準溶液配制:稱取0.0050g亞硝酸鈉于錐形瓶中,以少量蒸餾水溶解后移入1000mL容量瓶中定容至1000mL,得到5.0μg/mL的亞硝酸鈉標準溶液。0.4%對氨基苯磺酸溶液:稱取0.4g對氨基苯磺酸溶解于20%的鹽酸中,定容至100mL容量瓶中,混勻,避光保存。0.2%鹽酸萘乙二胺溶液:稱取0.2g鹽酸萘乙二胺溶解于蒸餾水中,定容至100mL容量瓶中,混勻,避光保存。1.3.3計算結果亞硝酸鹽和對氨基苯磺酸發(fā)生重氮反應生成的重氮鹽,可與α–萘胺偶聯生成紅色偶聯化合物準確量取兩份5.0μg/mLNaNO式中:A1.3.4試驗計劃方法1.3.4.乙醇中亞硝酸鹽清除率的測定取5個250mL錐形瓶,均加入2g花生殼粉末,分別加入20%、40%、60%、70%、80%的乙醇各40mL,在超聲波清洗機中于60℃提取10min后,于4000r/min離心10min,按照1.3.3的方法測定亞硝酸鹽的清除率。1.3.4.乙醇對亞硝酸鹽清除率的影響試驗根據1.3.4.1,分別加入60%的乙醇20、40、60、80、100mL后,進行試驗,按照1.3.3的方法測定亞硝酸鹽的清除率。1.3.4.亞硝酸鹽清除率的測定根據1.3.4.1,各加入40mL60%的乙醇,在超聲波清洗機中于25、40、55、70、80℃提取10min后,進行試驗,按照1.3.3的方法測定亞硝酸鹽的清除率。1.3.4.亞硝酸鹽清除率的測定,乙醇超聲波萃取法提取亞硝酸鹽,提高乙醇提取物的質量,乙醇超聲波預根據1.3.4.1,各加入40mL60%的乙醇,在超聲波清洗機中于60℃分別提取5、10、15、20、25min后,進行試驗,按照1.3.3的方法測定亞硝酸鹽的清除率。1.3.4.乙醇的提取取5個250mL錐形瓶,均加入2g花生殼粉末,各加入40mL60%的乙醇,在超聲波清洗機中于60℃提取10min后,于4000r/min離心10min,取5只25mL具塞試管,均加入1mL5.0μg/mLNaNO1.3.4.6-反應時間對亞硝酸鹽濃度的影響根據1.3.4.5,加入2mL花生殼浸提液,分別反應5、10、15、20、25min,進行試驗,然后按照式1–1計算清除率。1.3.4.7正交試驗以花生殼提取液與亞硝酸鹽的反應時間、提取液用量以及提取溫度在單因素試驗中確定的適宜范圍為依據,進行L1.3.4.8試驗利用正交試驗篩選出各因素水平的最佳配比,根據最佳組合做驗證試驗,平行試驗3次,取平均值。2結果與討論2.1吸收最大波長的確定吸取5.0μg/mLNaNO由上圖可知,在550nm處得到最大吸光值,因此最大吸收波長采用550nm。2.2單因素試驗的結果和分析2.2.1乙醇濃度對亞硝酸鹽清除率的影響由圖2分析可知:乙醇濃度在20%~70%時清除率增加;乙醇濃度超過70%時,清除率開始隨著乙醇濃度的增加而降低,可能由于乙醇濃度過高,抑制或降低了花生殼有效成分的活性,從而使其對亞硝酸鹽的清除率降低。因此,乙醇濃度為70%時,清除率最大。2.2.2料液比對亞硝酸鹽清除率的影響由圖3可知料液比為1∶10~1∶20(g/mL)時,清除率隨著料液比的增加而增加,料液比大于1∶20(g/mL)時,清除率開始隨著料液比的增加而減少。當料液比不斷增加時,花生殼有效成分濃度降低,對亞硝酸鹽的作用隨之降低。因此,在料液比為1∶20(g/mL)時清除率最大。2.2.3溫度對有效成分的影響由圖4可知,清除率在25~40℃隨著溫度的增加而增加,在40℃之后,清除率便隨著溫度的增加而下降。在溫度升高過程中,有效成分不斷溶解于液體中,當溫度超過其最大耐受溫度時,其活性會受影響。本次試驗提取溫度為40℃時清除率最大。2.2.4提取時間和時間由圖5可知,在5~10min時,清除率隨著時間的增加而增加,10min之后,清除率隨著時間的增加而下降,且下降趨勢隨著時間的增加而增大,所以提取時間為10min時清除率最大。提取時間過長,可能會造成有效成分的揮發(fā)損失,從而影響清除率。2.2.5提取液用量在8由圖6可知,提取液用量在2~8mL清除率整體為上升趨勢,但是在8~10mL時清除率下降,提取液用量為8mL清除率最大。當底物濃度一定時,提取液用量不斷增加至飽和,從而抑制其作用。2.2.6反應時間和時間由圖7可知,反應時間在5~10min時,清除率隨時間增加而增加,在10~15min時保持平穩(wěn)趨勢,15min之后,清除率隨著時間的增加而下降,所以反應時間為10min時清除率最大。隨著反應時間增長,花生殼提取液濃度不斷降低,其作用效果逐漸變差。2.3正交試驗結果通過對表2的分析統(tǒng)計,得R根據正交試驗結果以各因素水平為橫坐標,k值為縱坐標作極差直觀分析圖,結果見圖8。由圖8知,花生殼提取液清除亞硝酸鹽的最佳組合為A2.4正交試驗結果由表3知,最優(yōu)條件下花生殼提取液對亞硝酸鹽的清除率為78.12%,正交試驗結論可靠。因此,花生殼提取液對亞硝酸鹽清除作用的最佳組合為提取溫度25℃、提取液用量10mL、反應時間10min。3最佳清除亞硝酸鹽的確定花生殼提取液對亞硝酸鹽有較強的清除能力。