VEGF在胃癌患者血清和腫瘤組織中的表達(dá)和其意義專家講座

VEGF在胃癌患者血清及腫瘤組織中表示及其意義VEGF在胃癌患者血清和腫瘤組織中的表達(dá)和其意義專家講座第1頁［摘要］

目標(biāo)

研究血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子（VEGF）在胃癌患者血清及腫瘤組織中表示情況，探討其臨床意義。方法

應(yīng)用ELISA法對60例非腫瘤疾病手術(shù)患者和60例胃癌患者術(shù)前、術(shù)后血清VEGF水平進(jìn)行定量測定，并應(yīng)用免疫組化法測定腫瘤組織VEGF。結(jié)果

胃癌患者術(shù)前血清VEGF高于對照組（P＞0.05）。兩組術(shù)后較術(shù)前升高，腫瘤組術(shù)后較術(shù)前升高（P＜0.05）。腫瘤組術(shù)前血清VEGF水平、腫瘤組織中VEGF與漿膜受累、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床病理分期相關(guān)。腫瘤組術(shù)后隨訪30～36個月中出現(xiàn)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移和死亡患者，術(shù)前VEGF表示較其它患者升高（P＜0.05）。結(jié)論

血清VEGF水平及腫瘤組織中VEGF與胃癌浸潤、轉(zhuǎn)移相關(guān)，檢測血清VEGF及腫瘤組織中VEGF對胃癌浸潤、轉(zhuǎn)移程度和預(yù)后判斷有主要意義。

VEGF在胃癌患者血清和腫瘤組織中的表達(dá)和其意義專家講座第2頁［關(guān)鍵詞］

胃腫瘤；微轉(zhuǎn)移；血管內(nèi)皮生長因子

ExpressionandsignificanceofVEGFinserumandtumortissueingastriccancer

ZHOUHai-yin，LIJian，QIAOShi-ming，etal.DepartmentofGeneralSurgery，TheCentralHospitalofYangpuDistrict，Shanghai90，China

VEGF在胃癌患者血清和腫瘤組織中的表達(dá)和其意義專家講座第3頁［Abstract］

Objective

Toevaluatetheclinicalsignificanceofvascularendothelialgrowthfactor(VEGF)expressioninserumandtumortissueingastriccancerpatients.Methods

Thepre-operationalandpost-operationallevelsofserumVEGFweremeasuredbyELISAkitin60casesofgastriccancerand60casesofnon-carcinomaasthecontrolgroup，theexpressionoftumortissueVEGFwasmeasuredbyimmunohistochemicalassay.Results

Thepre-operationallevelofserumVEGFingastriccancerwashigherthanthatinthecontrolgroup(P＞0.05).VEGF在胃癌患者血清和腫瘤組織中的表達(dá)和其意義專家講座第4頁Thepost-operationallevelofserumVEGFwasincreasedinbothgroups，especiallyinthetumorgroup(P＜0.05).TheexpressionofVEGFinserumandtumortissuewaspositivelycorrelatedwithtumorinvasiondepth，lymph-nodemetastasisandclinicalpathologicalstage.Afollowupof30～36monthsrevealsthepre-operationallevelofserumVEGFoftumorrecurrenceanddeathinpatientswashigherthantheothersinthetumorgroup(P＜0.05).VEGF在胃癌患者血清和腫瘤組織中的表達(dá)和其意義專家講座第5頁Conclusion

TheexpressionofserumVEGFandtumortissueVEGFiscloselycorrelatedwithinvasionandmetastasisofgastriccancer.SerumVEGFandtumortissueVEGFassaymaybeusedtopre-operativelypredictinvasionandmetastasisandusedtoevaluateprognosis.

VEGF在胃癌患者血清和腫瘤組織中的表達(dá)和其意義專家講座第6頁［Keywords］

stomachneoplasm;micrometastasis;vascularendothelialgrowthfactor

腫瘤增殖和轉(zhuǎn)移是血管新生依賴性。在腫瘤血管生成過程中，血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子（vascularendothelialgrowthfactor，VEGF）是當(dāng)前了解功效最強大特異性血管生長調(diào)整因子，各種轉(zhuǎn)化生長因子、表皮生長因子、IL-6、IL-12、野生型P53及一些原癌基因均可上調(diào)VEGF產(chǎn)生促血管活性［1］，故VEGF可能為促血管活性因子最終共同道路［2］。本研究經(jīng)過對胃癌患者手術(shù)前后血清VEGF定量測定及腫瘤標(biāo)本中VEGF表示情況，探討其與臨床病理及腫瘤預(yù)后關(guān)系?，F(xiàn)分析匯報以下。

VEGF在胃癌患者血清和腫瘤組織中的表達(dá)和其意義專家講座第7頁1

資料與方法

1.1

普通資料

選擇我院普外科年11月～年5月期間住院接收手術(shù)治療胃癌患者60例，其中男33例，女27例，年紀(jì)35～85歲，中位年紀(jì)68歲。其中Ⅰ期8例，Ⅱ期15例，Ⅲ期34例，Ⅳ期3例。對照組選擇同期住院手術(shù)非腫瘤患者60例。

VEGF在胃癌患者血清和腫瘤組織中的表達(dá)和其意義專家講座第8頁1.2

方法

1.2.1

血清標(biāo)本采集

在術(shù)前、術(shù)后第7天和術(shù)后6個月每個月1次分別抽取清晨空腹靜脈血3ml，離心分離血清，置于-20℃凍存待測。

VEGF在胃癌患者血清和腫瘤組織中的表達(dá)和其意義專家講座第9頁1.2.2

血清VEGF定量檢測

采取雙抗體夾心ELISA法，樣本中VEGF與酶標(biāo)板上抗人VEGF單抗結(jié)合，再與結(jié)合有生物素抗人VEGF抗體結(jié)合，經(jīng)辣根過氧化物酶標(biāo)識Streptavidin與生物素結(jié)合，與酶底物反應(yīng)染色，在492nm測定與VEGF濃度相對應(yīng)OD值。以標(biāo)準(zhǔn)品OD值畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線，依據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出對應(yīng)VEGF含量。

VEGF在胃癌患者血清和腫瘤組織中的表達(dá)和其意義專家講座第10頁1.2.3

腫瘤組織VEGF檢測

腫瘤組織經(jīng)常規(guī)固定、石蠟包埋、切片后，采取Envision二步法染色。一抗采取鼠抗人VEGF單克隆抗體。腫瘤組織VEGF以腫瘤細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性。VEGF判斷標(biāo)準(zhǔn)：（-）為無瘤細(xì)胞著色，（+）為著色瘤細(xì)胞數(shù)＞10%。

VEGF在胃癌患者血清和腫瘤組織中的表達(dá)和其意義專家講座第11頁

1.2.4

統(tǒng)計學(xué)方法

用SPSS11.0軟件做統(tǒng)計分析，P＜0.05為差異有顯著性。

2

結(jié)果

2.1

圍手術(shù)期血清VEGF水平比較

圍手術(shù)期兩組血清VEGF水平見表1。從表1可見，術(shù)前腫瘤組血清VEGF水平雖高于對照組，但差異無顯著性（P＞0.05）。術(shù)后兩組血清VEGF均較術(shù)前顯著升高（P＜0.05）。腫瘤組術(shù)后血清VEGF較對照組顯著增加，兩組差異有顯著性（P＜0.05）。表1

圍手術(shù)期血清VEGF水平比較

（x±s，μg/L）VEGF在胃癌患者血清和腫瘤組織中的表達(dá)和其意義專家講座第12頁2.2

腫瘤組術(shù)前血清VEGF與腫瘤臨床病理參數(shù)關(guān)系

腫瘤組術(shù)前血清VEGF與腫瘤臨床病理參數(shù)關(guān)系見表2。從表2可見，腫瘤組織細(xì)胞中VEGF表示陽性患者血清VEGF水平雖高于表示陰性者，但差異無顯著性（P＞0.05）；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者血清VEGF水平顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者（P=0.003）；腫瘤侵犯漿膜患者血清VEGF水平顯著高于漿膜未受累者（P=0.037）；臨床分期為Ⅲ和Ⅳ期患者血清VEGF水平顯著高于Ⅰ和Ⅱ期者（P=0.029）。VEGF在胃癌患者血清和腫瘤組織中的表達(dá)和其意義專家講座第13頁表2

腫瘤組術(shù)前血清VEGF與腫瘤臨床病理參數(shù)關(guān)系

（x±s，μg/L）注：*TNM分期依據(jù)新國際T.N.M胃癌分期轉(zhuǎn)換為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期

2.3

隨訪

術(shù)后60例均得到隨訪，5例Ⅰ期和2例Ⅱ期患者術(shù)后未化療而未得到術(shù)后隨訪時外周血（隨訪至今均存活），其余53例患者有術(shù)后6個月共6次隨訪血清檢測結(jié)果。隨訪30～36個月，在53例患者中11例死亡，5例出現(xiàn)轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)，其余37例無瘤存活，死亡及轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)患者術(shù)前血清VEGF水平高于無瘤存活患者（見表3），且差異有顯著性（P＜0.05）。死亡11例中7例術(shù)后VEGF連續(xù)高水平表示，5例表示量逐步升高；5例出現(xiàn)復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移患者，其中3例術(shù)后血清VEGF水平連續(xù)高表示，而且表示量升高；37例無瘤存活者中21例術(shù)后VEGF水平連續(xù)低表示，6例升高后轉(zhuǎn)低，10例術(shù)后VEGF水平出現(xiàn)逐步升高，當(dāng)前正親密隨訪中。VEGF在胃癌患者血清和腫瘤組織中的表達(dá)和其意義專家講座第14頁3

討論

VEGF是一個特異作用于內(nèi)皮細(xì)胞多功效因子，作為一個主要促血管生成因子，在原位誘導(dǎo)血管生成作用十分強大［3］。VEGF作為內(nèi)皮細(xì)胞特異有絲分裂原刺激內(nèi)皮細(xì)胞增生、促使血管滲漏、刺激細(xì)胞遷移，造成纖維蛋白原外滲進(jìn)入腫瘤間質(zhì)而促成腫瘤浸潤組織血管生成，從而形成腫瘤內(nèi)部高密度微血管網(wǎng)。VEGF還能刺激淋巴內(nèi)皮細(xì)胞增生，增加腫瘤高血源性和高淋巴源擴散風(fēng)險［4］。VEGF還可經(jīng)過誘導(dǎo)Bcl-2表示、激活有絲分裂原活化蛋白激酶（mitogen-activatedproteinkinase，MAPK）和抑制c-JNK(c-jun-NH3-kinase）而抗腫瘤細(xì)胞凋亡。

VEGF在胃癌患者血清和腫瘤組織中的表達(dá)和其意義專家講座第15頁本研究結(jié)果顯示，腫瘤侵犯漿膜、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期較晚患者血清VEGF水平顯著升高，提醒血清VEGF水平在一定程度上反應(yīng)腫瘤進(jìn)展程度。Lissoni等研究指出，晚期惡性腫瘤伴有VEGF內(nèi)源性分泌增加，提醒血清VEGF水平升高，則預(yù)后較差。Hyodo研究發(fā)覺，在胃腸腫瘤中，有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者血清VEGF較無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者顯著增高，且轉(zhuǎn)移患者化療前VEGF水平低者化療效果及生存期較升高者好。Kumar等研究發(fā)覺，結(jié)直腸癌淋巴結(jié)陽性患者血清VEGF比陰性者顯著升高。Fujisaki發(fā)覺血清VEGF水平與Duke’s分期顯著相關(guān)。Celen等報道診療結(jié)直腸腫瘤VEGF敏感性高于CEA等腫瘤標(biāo)志物［5］。

VEGF在胃癌患者血清和腫瘤組織中的表達(dá)和其意義專家講座第16頁術(shù)前腫瘤組血清VEGF水平雖高于對照組，但無統(tǒng)計學(xué)意義，術(shù)后兩組血清VEGF均較術(shù)前升高，但腫瘤組較非腫瘤組更為顯著，這可能與手術(shù)創(chuàng)傷、術(shù)后傷口生長及創(chuàng)面修復(fù)相關(guān)。在隨訪血清VEGF水平改變中，我們發(fā)覺出現(xiàn)復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移及死亡組術(shù)前血清VEGF較無瘤存活組顯著升高，能夠反應(yīng)腫瘤病變嚴(yán)重程度。復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移及死亡組圍手術(shù)期血清VEGF水平有升高，但差異無顯著性，這可能為術(shù)前除原發(fā)腫瘤以外，微轉(zhuǎn)移灶分泌入循環(huán)血中VEGF占較大百分比，手術(shù)去除了原發(fā)灶，但對于微轉(zhuǎn)移灶無效，手術(shù)創(chuàng)傷及術(shù)后修復(fù)使VEGF水平升高，又促進(jìn)了微轉(zhuǎn)移灶深入發(fā)展，所以我們認(rèn)為血清VEGF是特異性較高微轉(zhuǎn)移檢測指標(biāo)。

VEGF在胃癌患者血清和腫瘤組織中的表達(dá)和其意義專家講座第17頁腫瘤組織中VEGF陽性表示率亦隨腫瘤侵犯漿膜、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期進(jìn)展而增加。本研究顯示，血清VEGF水平和腫瘤組織中VEGF陽性表示率二者之間無顯著相關(guān)，這可能與血清VEGF反應(yīng)全身組織VEGF水平，而腫瘤組織中VEGF陽性表示率僅反應(yīng)局部腫瘤組織中VEGF相關(guān)。盡管如此，不論是術(shù)前血清VEGF水平或腫瘤組織中VEGF陽性表示都與腫瘤轉(zhuǎn)移、分期及預(yù)后親密相關(guān)。故檢測血清VEGF是判斷腫瘤分期和預(yù)報胃癌術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)及生存獨立指標(biāo)之一［6］，定時檢測血清VEGF水平改變還能夠?qū)δ[瘤治療效果及腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移提供依據(jù)。

VEGF在胃癌患者血清和腫瘤組織中的表達(dá)和其意義專家講座第18頁伴隨對VEGF研究深入，能夠構(gòu)想經(jīng)過VEGF和VEGF受體抗體功效阻斷，阻止腫瘤血管生成，可能成為抑制腫瘤生長和預(yù)防腫瘤轉(zhuǎn)移生物靶點之一。［參考文件］

1

HeerK，KumarH，S