臨床科研選題和科研設(shè)計(jì)專家講座

以幾個(gè)案例作例子來闡述Idea（新鮮）（創(chuàng)新點(diǎn)）Design[怎樣(從哪幾方面)來驗(yàn)證，它們邏輯關(guān)系]Methods（邏輯，內(nèi)在聯(lián)絡(luò)）臨床科研選題和科研設(shè)計(jì)專家講座第1頁新發(fā)SLE患者（創(chuàng)新點(diǎn)）調(diào)整性

T細(xì)胞研究(表面標(biāo)志CD25與轉(zhuǎn)錄因子Foxp3表示、細(xì)胞抑制作用、其臨床意義）國外SLE患者絕大多數(shù)有激素或細(xì)胞毒藥品治療經(jīng)歷案例一臨床科研選題和科研設(shè)計(jì)專家講座第2頁

本身免疫應(yīng)答靶抗原“暴露”或形成（隱蔽抗原）微生物感染激活本身反應(yīng)性淋巴細(xì)胞（分子模擬）協(xié)同刺激分子異位表示多克隆淋巴細(xì)胞非特異性活化（超抗原）

免疫調(diào)整紊亂（包含調(diào)整性T細(xì)胞數(shù)量降低或功效減弱）其它本身免疫病發(fā)病免疫學(xué)原因臨床科研選題和科研設(shè)計(jì)專家講座第3頁CD4+CD25+調(diào)整性T細(xì)胞（其抑制功效需Foxp3轉(zhuǎn)錄因子表示）調(diào)整性T細(xì)胞臨床科研選題和科研設(shè)計(jì)專家講座第4頁案例一包括3項(xiàng)研究研究新發(fā)SLE患者周圍血中CD4+T細(xì)胞CD25與FoxP3表示，及Glucocorticosteroid/cyclophosphamide治療對(duì)CD25與FoxP3

在CD4+T細(xì)胞表示影響。研究對(duì)象為24例新發(fā)活動(dòng)期SLE患者、20例新發(fā)非活動(dòng)期SLE患者、21例年紀(jì)性別相合正常志愿者。分離周圍血單個(gè)核細(xì)胞，用流式細(xì)胞儀檢測CD4T細(xì)胞CD25與FoxP3表示。發(fā)覺FoxP3在新發(fā)SLE患者CD4+CD25+T細(xì)胞表示下降，在CD4+CD25-T

細(xì)胞

表示增強(qiáng)。還檢測了Glucocorticosteroid與cyclophosphamide治療對(duì)FoxP3在CD4+CD25+和CD4+CD25-T

細(xì)胞表示影響第1項(xiàng)研究：ReductionofFoxp3levelsinCD4+CD25highTcellsinpatientswithnew-onsetsystemiclupuserythematosus.

ClinExpImmunol.;153(2):182-7.臨床科研選題和科研設(shè)計(jì)專家講座第5頁研究新發(fā)SLE患者周圍血CD4+CD25-Foxp3+

T細(xì)胞臨床意義檢測10例活動(dòng)期、11例非活動(dòng)期新發(fā)SLE患者、及11例健康志愿者。用流式細(xì)胞儀分析Foxp3與CD25在CD4T細(xì)胞表示。分離CD4+CD25+與CD4+CD25-T細(xì)胞，檢測它們對(duì)T細(xì)胞增殖影響。G檢測CD4+CD25-T細(xì)胞與其它臨床指標(biāo)（如抗dsDNA、尿蛋白、血清C3水平、SLEDAI）相關(guān)性這個(gè)故事并不復(fù)雜，內(nèi)容較簡單，文內(nèi)僅2張圖與1個(gè)表格。但創(chuàng)新點(diǎn)顯著，文章發(fā)表于AnnRheumDis.;67(7):1037-40.Impactfector7.188。第2項(xiàng)研究：ClinicalsignificanceofincreasedCD4+CD25-Foxp3+Tcellsinpatientswithnew-onsetsystemiclupuserythematosus

臨床科研選題和科研設(shè)計(jì)專家講座第6頁第3項(xiàng)研究:AreCD4+CD25

Foxp3+cellsinuntreatednew-onsetlupuspatientsregulatoryTcells?ArthritisResTher;11(5):R153研究新發(fā)SLE患者周圍血中CD4+CD25-Foxp3+T細(xì)胞與CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞表面表示分子及分泌細(xì)胞因子有何不一樣，及CD4+CD25-Foxp3+T細(xì)胞有否抑制。檢測22例新發(fā)SLE患者。用流式細(xì)胞儀分析比較CD4+CD25-Foxp3+細(xì)胞與CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞表面標(biāo)志子表示及細(xì)胞因子表示差異。檢測CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞對(duì)T細(xì)胞增殖有否調(diào)整作用。臨床科研選題和科研設(shè)計(jì)專家講座第7頁

新發(fā)SLE患者其它免疫細(xì)胞有什么特點(diǎn)新發(fā)其它本身免疫病免疫細(xì)胞有什么特點(diǎn)新發(fā)其它本身免疫病其它免疫學(xué)指標(biāo)有什么特點(diǎn)從案例一能得到啟發(fā)臨床科研選題和科研設(shè)計(jì)專家講座第8頁案例二新型抗流感藥DAS181研發(fā)臨床科研選題和科研設(shè)計(jì)專家講座第9頁A型流感病毒生活周期臨床科研選題和科研設(shè)計(jì)專家講座第10頁已同意上市抗流感藥品

M2離子通道阻滯劑

鹽酸金剛乙胺（1993年美國FDA同意上市）金剛烷胺（1966FDA年同意為預(yù)防藥，1976年確認(rèn)其為治療藥）

神經(jīng)胺酸酶（NA）抑制劑

達(dá)菲（1999年美國FDA同意上市）扎那米韋（1999年5月首先在澳大利亞獲準(zhǔn)上市）除了毒副作用外，主要問題是流感病毒產(chǎn)生抗藥性，因?yàn)椴《净蛲蛔兣R床科研選題和科研設(shè)計(jì)專家講座第11頁研發(fā)中抗流感藥品臨床科研選題和科研設(shè)計(jì)專家講座第12頁流感病毒NA與HA相互作用感染靶細(xì)胞

Neu5Ac(2,3)-Gal與Neu5Ac(2,6)-Gal分子就是流感病毒受體。人流感病毒主要識(shí)別(2,6)-Gal唾液酸，禽流感病毒與馬流感病毒主要識(shí)別(2,3)-Gal唾液酸。流感病毒HA與細(xì)胞表面含(2,3)-Gal或/和(2,6)-Gal唾液酸糖蛋白相結(jié)合。人呼吸道上皮細(xì)胞唾液酸主要是(2,6)-Gal型，但也有(2,3)-Gal型，所以禽流感病毒也能感染人，盡管感染效率不高。NA作用是破壞HA受體。它酶切呼吸道黏膜上諸如mucin等潛在抑制性分子唾液酸，從而使之滅活，促進(jìn)病毒在呼吸道傳輸;酶切病毒感染細(xì)胞表面唾液酸，促進(jìn)子代病毒釋出，以助于病毒傳輸。HA受體結(jié)合作用和NA受體破壞作用相相互成，維持平衡，于病毒復(fù)制和傳輸十分主要。呼吸道上皮細(xì)胞唾液酸流感病毒HANA臨床科研選題和科研設(shè)計(jì)專家講座第13頁以往有報(bào)道，體外試驗(yàn)中唾液酸酶能有效阻止流感病毒感染細(xì)胞。所以學(xué)者欲研制一個(gè)融合蛋白，由唾液酸酶與能錨定于人呼吸道上皮細(xì)胞蛋白組成。DAS181分子模式臨床科研選題和科研設(shè)計(jì)專家講座第14頁

報(bào)道已從微生物和真核細(xì)胞分離出>15種底物特異性和酶動(dòng)力學(xué)各異唾液酸酶。從中選擇A.viscosus唾液酸酶催化功效域。其理由為：底物特異性廣；催化活性最大；人免疫系統(tǒng)對(duì)其耐受，因?yàn)槿苏？谇缓臀改c道細(xì)菌也產(chǎn)生此唾液酸酶。

DAS181抗流感病毒作用研究（細(xì)胞、小鼠與雪貂模型）臨床科研選題和科研設(shè)計(jì)專家講座第15頁DAS181創(chuàng)新點(diǎn)靶點(diǎn)在宿主細(xì)胞上，能防止產(chǎn)生病毒耐藥廣譜抗流感病毒藥品（A,B型流感、流感病毒耐藥株、副流感病毒）能酶切SA

2,3Gal和SA

2,6Gal，也能酶切SA

2,8Gal。所以，對(duì)現(xiàn)有流感毒株、未來毒株、及重組變異毒株都有效吸入給藥，生物利用度高藥品作用連續(xù)時(shí)間較長：最少2天（MDCK),最少7天（HAE)，用于預(yù)防和治療均可臨床科研選題和科研設(shè)計(jì)專家講座第16頁案例三：與IgA腎病發(fā)病機(jī)制相關(guān)臨床科研選題和科研設(shè)計(jì)專家講座第17頁聚糖（glycan)臨床科研選題和科研設(shè)計(jì)專家講座第18頁核酸、蛋白質(zhì)、聚糖和脂是全部細(xì)胞4種基本大分子核酸鏈基本上由4種核苷酸組成肽鏈基本上由23種氨基酸組成糖鏈?zhǔn)謴?fù)雜脂質(zhì)按生物學(xué)功效可分為三類：儲(chǔ)存脂質(zhì)（包含甘油三脂和蠟）結(jié)構(gòu)脂質(zhì)（組成生物膜脂雙層磷脂）活性脂質(zhì)（類固醇和萜）臨床科研選題和科研設(shè)計(jì)專家講座第19頁案例四：幾個(gè)病案分析及其它XXX等（301醫(yī)院）：不明原因發(fā)燒病因分布及臨床特征年1月至年1月在301醫(yī)院內(nèi)科住院且符合不明原因發(fā)燒患者816例，病因分布，臨床特征，老年患者與非老年患者之間比較。XXX等（北京協(xié)和醫(yī)院）：結(jié)石性急性膽管炎治療1998.1-.12急診急性膽管炎患者426例，伴隨介入技術(shù)（急性行經(jīng)皮經(jīng)肝膽道穿刺引流術(shù)）和內(nèi)鏡技術(shù)（急性行經(jīng)內(nèi)鏡逆行胰膽管造影）進(jìn)展，急性膽管炎患者由急診手術(shù)經(jīng)保守治療或介入治療轉(zhuǎn)為擇期手術(shù)，能夠大大降低手術(shù)并發(fā)癥發(fā)生率，降低手術(shù)死亡率。XXX等（北京協(xié)和醫(yī)院）：胰腺實(shí)性假乳頭狀瘤CT診療及判別診療對(duì)14例病理確診胰腺實(shí)性假乳頭狀瘤患者CT資料作CT診療及判別診療(無功效性胰島細(xì)胞瘤、胰腺囊腺瘤、胰腺癌、胰腺假性囊腫）分析XXX等（北京協(xié)和醫(yī)院）：細(xì)針穿刺技術(shù)在乳腺癌手術(shù)治療中應(yīng)用價(jià)值.1-.1北京協(xié)和醫(yī)院初診考慮乳腺癌可能性大530例女性患者作細(xì)針穿刺細(xì)胞學(xué)（FNAC）檢驗(yàn)。FNAC檢驗(yàn)陽性325例，直接行乳腺癌根治術(shù)，術(shù)后組織病理學(xué)檢驗(yàn)均為乳腺癌。FNAC檢驗(yàn)陰性205例，開放活檢術(shù)，術(shù)后組織病理學(xué)檢驗(yàn)137例乳腺癌，68例非乳腺癌。表明FNAC有利于對(duì)懷疑乳腺癌者選擇適當(dāng)術(shù)式。以中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào)年第1期上幾篇論文為例臨床科研選題和科研設(shè)計(jì)專家講座第20頁病案分析加檢驗(yàn)科檢測指標(biāo)也能發(fā)SCI文章臨床科研選題和科研設(shè)計(jì)專家講座第21頁確定“點(diǎn)”，要有新意要有正常對(duì)照和其它對(duì)照（如陽性對(duì)照）分析指標(biāo)不能單一，分析要有層次正確統(tǒng)計(jì)處理最好能結(jié)合一點(diǎn)試驗(yàn)室檢測病案分析中需注意幾點(diǎn)臨床科研選題和科研設(shè)計(jì)專家講座第22頁藥劑科人員普通做藥代動(dòng)力學(xué)和生物效性等試驗(yàn)較多臨床科研選題和科研設(shè)計(jì)專家講座第23頁對(duì)藥劑師科研工作提議與臨床大夫親密合作參加新藥研制有效制劑開發(fā)（如協(xié)和醫(yī)院健腦合劑等）做一點(diǎn)藥品作用機(jī)理研究臨床科研選題和科研設(shè)計(jì)專家講座第24頁科研工作中尚需注意幾點(diǎn)每一步都要走得踏實(shí)，要核實(shí)試劑和儀器是否OK（以本人做PCR檢測及研制PSA試劑盒失敗為例說明）表位可分成兩類：線性表位（linear，指肽鏈上由一段序列相連續(xù)氨基酸殘基所形成抗原表位）和構(gòu)象表位（conformation，指多肽或多糖鏈上由空間位置相鄰，而序列上不相連續(xù)氨基酸殘基或多糖殘基所形成抗原表位）臨床科研選題和科研設(shè)計(jì)專家講座第25頁嚴(yán)格試驗(yàn)操作，做好試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)（包含病案統(tǒng)計(jì)）隨時(shí)分析試驗(yàn)結(jié)果，適時(shí)對(duì)研究目標(biāo)和技術(shù)路線作調(diào)整臨床科研選題和科研設(shè)計(jì)專家講座第26頁愛因斯坦相關(guān)怎樣做科學(xué)研究名言O(shè)nepercentinspirationandninetyninepercentperspiration靈感來自哪里?臨床實(shí)踐與文件。要找到和明確什么是你研究“點(diǎn)”（創(chuàng)新最關(guān)鍵）。Idea

Design(切實(shí)可行技術(shù)路線,從哪幾方面說明這個(gè)“點(diǎn)”，它們邏輯次序怎樣）

Methods

。需要多一點(diǎn)分子生物學(xué)、免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)等知識(shí)，需多讀文件。臨床科研選題和科研設(shè)計(jì)專家講座第27頁怎樣寫科研論文

明確什么是這篇論文“點(diǎn)”。確定論文題目。畫制圖表（論文關(guān)鍵）材料與方法查閱文件引言（包含問題提出（背景、假設(shè)），回答了什么問題，創(chuàng)新點(diǎn)）討論（簡單小結(jié)本研究發(fā)覺，與其它學(xué)者研究比較，本創(chuàng)新發(fā)覺意義，其它，等等）摘要臨床科研選題和科研設(shè)計(jì)專家講座第28頁ClinicalsignificanceofincreasedCD4+CD25-Foxp3+Tcellsinpatientswithnew-onsetsystemiclupuserythematosus題目以前述案例一（2）為例臨床科研選題和科研設(shè)計(jì)專家講座第29頁試驗(yàn)結(jié)果（圖表制作）Fig1.CD4+CD25+Foxp3+andCD4+CD25-Foxp3+TcellsinSLEpatientsandnormalcontrolsFig2.TheexpressionofCD127byCD4+Tcellsubpopulation臨床科研選題和科研設(shè)計(jì)專家講座第30頁材料與方法（能夠參考他人文章）臨床科研選題和科研設(shè)計(jì)專家講座第31頁序言CD4+CD25+調(diào)整性T細(xì)胞在SLE發(fā)病中作用報(bào)道不甚一致，且尚無在新發(fā)SLE患者研究報(bào)道