實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)及其常用檢測(cè)項(xiàng)目的臨床意義-課課件

實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)及其常用檢測(cè)項(xiàng)目的臨床意義實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)及其1主要授課內(nèi)容實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)概念與展望血液和尿液的常規(guī)檢驗(yàn)生物化學(xué)常規(guī)檢驗(yàn)臨床免疫學(xué)的常規(guī)檢驗(yàn)臨床微生物學(xué)常規(guī)檢驗(yàn)分子生物學(xué)檢驗(yàn)主要授課內(nèi)容實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)概念與展望2實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)概述一、實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)概述實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)概述一、實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)概述3（一）基本概念實(shí)驗(yàn)診斷（laboratorydiagnosis）臨床實(shí)驗(yàn)室對(duì)采自病人的樣本進(jìn)行檢測(cè)、分析，所得到的信息為臨床預(yù)防、診斷、治療疾病或預(yù)后評(píng)價(jià)提供參考，整個(gè)的醫(yī)學(xué)活動(dòng)即為實(shí)驗(yàn)診斷。（一）基本概念實(shí)驗(yàn)診斷（laboratorydiagnos4實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)相同點(diǎn)：核心都是檢驗(yàn)。異同點(diǎn)：研究和教學(xué)的目的各有側(cè)重。實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)：以檢驗(yàn)結(jié)果的臨床應(yīng)用為目的檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)：以檢驗(yàn)方法的研究和改進(jìn)為目的實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)相同點(diǎn)：核心都是檢驗(yàn)。5（二）分類（內(nèi)容）

根據(jù)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)的內(nèi)容，分為：血液學(xué)檢驗(yàn)體液排泄物檢驗(yàn)生物化學(xué)檢驗(yàn)臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)臨床病原學(xué)檢驗(yàn)分子生物學(xué)檢驗(yàn)（二）分類（內(nèi)容）根據(jù)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)的內(nèi)容，分為：6（三）現(xiàn)狀與發(fā)展趨勢(shì)

實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)現(xiàn)狀：診斷學(xué)的子學(xué)科

獨(dú)立的學(xué)科手工操作

高度自動(dòng)化定性分析定量分析常量分析微量分析（三）現(xiàn)狀與發(fā)展趨勢(shì)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)現(xiàn)狀：7現(xiàn)狀與發(fā)展趨勢(shì)

發(fā)展趨勢(shì)個(gè)體化診斷：遺傳基因、后天突變、疾病基因、代謝特征、藥物敏感性床邊檢測(cè)（POCT）：血糖尿糖、凝血狀態(tài)、心肌損傷、酸堿平衡狀態(tài)、感染性疾病、藥物水平檢驗(yàn)中心：社區(qū)醫(yī)院、?？圃\所、或特色檢驗(yàn)項(xiàng)目現(xiàn)狀與發(fā)展趨勢(shì)發(fā)展趨勢(shì)8（四）臨床危機(jī)值電解質(zhì)：K、Na、Ca；血糖血常規(guī)：WBC、RBC、PLT血?dú)猓簆O2、pCO2、pH凝血：PT、APTT、INR心肌酶：TNT、CK-MB質(zhì)量血培養(yǎng)：血標(biāo)本細(xì)菌培養(yǎng)（四）臨床危機(jī)值電解質(zhì)：K、Na、Ca；血糖9二、血液檢查二、血液檢查10（一）白細(xì)胞系列參數(shù)WBC：白細(xì)胞數(shù)量，正常人參考為4-10×109/LNE%：中性粒細(xì)胞百分比，正常參考為50%-75%NE#：中性粒細(xì)胞絕對(duì)值LY%：淋巴細(xì)胞百分比，正常參考為20%-40%LY#：淋巴細(xì)胞絕對(duì)值MO%：?jiǎn)魏思?xì)胞百分比，正常參考為3%-10%MO#：?jiǎn)魏思?xì)胞絕對(duì)值EO%：嗜酸細(xì)胞百分比，正常參考為0.5%-5%EO#：嗜酸細(xì)胞絕對(duì)值BA%：嗜堿細(xì)胞百分比，正常參考為0-2%BA#：嗜堿細(xì)胞絕對(duì)值（一）白細(xì)胞系列參數(shù)WBC：白細(xì)胞數(shù)量，正常人參考為4-1011中性粒細(xì)胞變化臨床意義生理性變化：新生兒WBC升高，一般在15×109/L；3～4天降至10×109/L左右；3月后接近成人水平。運(yùn)動(dòng)、疼痛和情緒影響：當(dāng)劇烈運(yùn)動(dòng)、疼痛和激動(dòng)時(shí)，WBC↑↑，以N為主，為循環(huán)池和邊緣池細(xì)胞重新調(diào)配的結(jié)果。日間變化：在安靜和休息時(shí)WBC較低；活動(dòng)和進(jìn)食后較高；下午高于上午；一日之內(nèi)最高值約為最低值的1～2倍。妊娠與分娩：妊娠>5個(gè)月，WBC↑。通常在(12~17)×109/L，分娩時(shí)疼痛和產(chǎn)傷可更高，如無(wú)并發(fā)癥產(chǎn)后2周左右恢復(fù)正常。中性粒細(xì)胞變化臨床意義生理性變化：12中性粒細(xì)胞變化臨床意義病理性增多急性感染：化膿性球菌嚴(yán)重的組織損傷或大量的血細(xì)胞破壞急性大出血急性中毒腫瘤性增多骨髓增殖性疾病中性粒細(xì)胞變化臨床意義病理性增多13中性粒細(xì)胞變化臨床意義病理性減少某些感染：沙門(mén)菌感染，病毒感染某些血液病慢性理化損傷自身免疫性疾病脾功能亢進(jìn)中性粒細(xì)胞變化臨床意義病理性減少14（二）紅細(xì)胞系列參數(shù)RBC：紅細(xì)胞數(shù)量，正常參考男性為4.0-5.5×1012/L女性為3.5-5.0×1012/LHgb：外周血中Hb濃度，正常參考為110-160g/LHct：血細(xì)胞壓積，也可指紅細(xì)胞壓積，正常參考為0.35-0.50MCV：平均紅細(xì)胞體積，正常參考為80-100fLMCH：平均紅細(xì)胞Hb含量，指平均每個(gè)紅細(xì)胞含Hb量正常參考為27-34pgMCHC：平均紅細(xì)胞Hb濃度，指紅細(xì)胞中Hb濃度，正常參考為320-360g/LRDW：紅細(xì)胞分布寬度，正常參考為11.5%-15%（二）紅細(xì)胞系列參數(shù)RBC：紅細(xì)胞數(shù)量，正常參考男性為4.15紅細(xì)胞增多的臨床意義生理性增多：新生兒、高原生活、劇烈運(yùn)動(dòng)、精神因素等。病理性增多相對(duì)性增多：血漿水分丟失，有形成分相對(duì)增加，絕對(duì)值沒(méi)有發(fā)生變絕對(duì)性增多：繼發(fā)性：心、肺疾病、異常血紅蛋白病、某些腫瘤等原發(fā)性：真性紅細(xì)胞增多癥紅細(xì)胞增多的臨床意義生理性增多：新生兒、高原生活、劇烈運(yùn)動(dòng)、16紅細(xì)胞減少的臨床意義生理性減少：兒童、孕婦、老年人。病理性減少：骨髓造血功能低下，如再障。造血原料缺乏，如缺鐵貧、巨幼貧。紅細(xì)胞破壞增加，如溶貧。紅細(xì)胞丟失過(guò)多。紅細(xì)胞減少的臨床意義生理性減少：兒童、孕婦、老年人。17（三）血小板系列參數(shù)PLT：血小板數(shù)量，正常參考為100-300×109/LMPV：平均血小板體積，正常參考為6.5-12.5fLPct：血小板壓積，正常參考為0.108%-0.271%PDW：血小板分布寬度，正常參考為11.5%-18%（三）血小板系列參數(shù)PLT：血小板數(shù)量，18（三、尿液檢查（三、尿液檢查19（一）尿液理學(xué)檢查尿量顏色及透明度比密尿滲量氣味（一）尿液理學(xué)檢查尿量20尿量尿量取決于腎小球的濾過(guò)率和腎小管的重吸收尿量變化與氣候、飲水量和食物等有關(guān)正常成人：1,000-2,000ml/24h新生兒：30-60ml/24h，嬰兒：100-150ml/24h兒童：500-1000ml/24h

無(wú)尿（anurina）

少尿(oliguria)

多尿(polyuria)

正常(normal)l00ml

400ml

1500ml

2500ml

尿量尿量取決于腎小球的濾過(guò)率和腎小管的重吸收21顏色和透明度尿色隨尿量的多少、飲食（酸度）、藥物及病變而改變。正常新鮮尿?yàn)榈S色、清晰透明。新鮮尿液發(fā)生渾濁的原因尿酸鹽沉淀：加熱或加堿后溶解。磷酸鹽或碳酸鹽沉淀：堿性尿中出現(xiàn)，加酸后溶解，碳酸鹽溶解時(shí)有氣泡產(chǎn)生。顏色和透明度尿色隨尿量的多少、飲食（酸度）、藥物及病變而改變22尿液比密(SG)測(cè)定比密被用于度量腎臟在維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定中的濃縮稀釋能力，即腎小管功能重要指標(biāo)。高比密尿：高熱脫水、蛋白尿、糖尿、急性腎小管腎炎、心功能不全；尿有造影劑低比密尿：尿崩癥、高血壓、慢性腎炎、腎盂腎炎；使用利尿藥物注意事項(xiàng)：高糖、高蛋白、高尿素氮，尿比密應(yīng)進(jìn)行校正。X線造影劑、右旋糖酐、甘露醇等使比密升高。連續(xù)測(cè)定尿比密比一次測(cè)定更有價(jià)值。尿液比密(SG)測(cè)定比密被用于度量腎臟在維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定中23尿液氣味尿液氣味是尿中溶解物質(zhì)濃度的指標(biāo)正常尿液：可受食物或藥物影響，尿液氣味發(fā)生改變病理性尿液：新鮮排出的尿液即有氨臭味提示有慢性膀胱炎、慢性尿潴留等；爛蘋(píng)果味則提示有糖尿病酮癥酸中毒；腐臭味提示有泌尿系感染或晚期膀胱癌；大蒜臭味提示有機(jī)磷中毒；“老鼠尿”樣臭味提示有苯丙酮尿癥。尿液氣味尿液氣味是尿中溶解物質(zhì)濃度的指標(biāo)24（二）尿液化學(xué)檢驗(yàn)液酸堿度比重蛋白葡萄糖酮體膽紅素膽原亞硝酸鹽紅細(xì)胞白細(xì)胞（二）尿液化學(xué)檢驗(yàn)液酸堿度25（三）尿沉渣（尿有形成分）細(xì)胞紅細(xì)胞肉眼血尿：每升尿液中含血量超過(guò)1ml，肉眼可見(jiàn)到不同程度混濁紅色的尿液顯微鏡血尿：血液含量在0.1%以下，外觀無(wú)血色，鏡下紅細(xì)胞平均≥３/HPF的尿液白細(xì)胞：正常尿液中可偶然見(jiàn)到1～2個(gè)WBC/HPF，如5個(gè)或5個(gè)以上白細(xì)胞為增多。泌尿系統(tǒng)炎癥泌尿系統(tǒng)附近器官炎癥腎移植術(shù)后排斥反應(yīng)（三）尿沉渣（尿有形成分）細(xì)胞26尿沉渣（尿有形成分）管型臘樣管型透明管型顆粒管型細(xì)胞管型紅細(xì)胞管型白細(xì)胞管型上皮細(xì)胞管型混合型管型尿沉渣（尿有形成分）管型27（四）結(jié)晶生理性結(jié)晶草酸鈣結(jié)晶尿酸結(jié)晶馬尿酸結(jié)晶磷酸鹽類結(jié)晶病理性結(jié)晶膽紅素結(jié)晶胱氨酸/亮氨酸/酪氨酸結(jié)晶膽固醇結(jié)晶含鐵血黃素顆粒藥物結(jié)晶（四）結(jié)晶生理性結(jié)晶28四、生化檢查四、生化檢查29（一）肝臟功能檢查肝實(shí)質(zhì)損傷ALTAST膽汁郁積γ-GTALP5’-NT肝纖維化MAOPH（一）肝臟功能檢查肝實(shí)質(zhì)損傷30（二）腎臟功能檢查腎小球?yàn)V過(guò)功能內(nèi)生肌酐清除率試驗(yàn)血清尿素肌酐尿酸測(cè)定、血β2-MGCysC尿Alb/Ig（二）腎臟功能檢查腎小球?yàn)V過(guò)功能31腎臟功能檢查近端腎小管功能排泌功能：酚紅排泄試驗(yàn)重吸收功能：尿氨基酸、葡萄糖重吸收TmG/β2-MG/α1-MG腎臟功能檢查近端腎小管功能32腎臟功能檢查遠(yuǎn)端腎小管重吸收功能濃縮稀釋試驗(yàn)?zāi)驖B量、血漿滲量滲透清除率自由水清除率腎臟功能檢查遠(yuǎn)端腎小管重吸收功能33（三）脂代謝檢查膽固醇（THOL）甘油三脂（TG）脂蛋白高密度脂蛋白（HDL）低密度脂蛋白（LDL）載脂蛋白載脂蛋白A（Apo-A）載脂蛋白B（Apo-B）載脂蛋白a（LP(a)）（三）脂代謝檢查膽固醇（THOL）34五、免疫學(xué)檢查五、免疫學(xué)檢查35IgG—單體Ig，占總Ig的70-80%。病毒、細(xì)菌、寄生蟲(chóng)抗體。生高：各種慢性感染、淋巴瘤、SLE等降低：體液免疫缺陷病、聯(lián)合免疫缺陷病、重鏈病、輕鏈病等。IgA：分為血清型和分泌型，血清型占總Ig的10-15%，后者存在于分泌物中。升高：SLE、類風(fēng)關(guān)、肝硬化、腎?。唤档停悍磸?fù)呼吸道感染、重鏈病、輕鏈病、免疫缺陷病、自身免疫性疾病和代謝病。（一）免疫功能檢測(cè)IgG—單體Ig，占總Ig的70-80%。病毒、細(xì)菌、寄生蟲(chóng)36免疫功能檢測(cè)IgM：初次免疫應(yīng)答反應(yīng)中的Ig，最早出現(xiàn)，分子量最大。占總Ig的5-10%。升高：病毒感染早期、肝硬化、SLE、類風(fēng)關(guān)、肝硬化、腎病；降低：先天性免疫缺陷病、代謝病。免疫功能檢測(cè)IgM：初次免疫應(yīng)答反應(yīng)中的Ig，最早出現(xiàn)，分子37免疫功能檢測(cè)細(xì)胞功能檢測(cè)——流式細(xì)胞（儀）技術(shù)。T細(xì)胞花結(jié)形成試驗(yàn)（E玫瑰花結(jié)形成試驗(yàn)）T細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)T細(xì)胞分化抗原測(cè)定*：白細(xì)胞分化抗CD）CD3+總T細(xì)胞CD3+/CD4+T輔助細(xì)胞CD3+CD8+T抑制細(xì)胞免疫功能檢測(cè)細(xì)胞功能檢測(cè)——流式細(xì)胞（儀）技術(shù)。38（二）腫瘤免疫檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物（tumormarker,TM）由腫瘤細(xì)胞直接產(chǎn)生或非腫瘤細(xì)胞經(jīng)腫瘤細(xì)胞誘導(dǎo)后合成的一類物質(zhì)，包括蛋白質(zhì)、激素、酶或多胺等，存在于人體組織、細(xì)胞、血液或體液中，可以通過(guò)是其否存在或含量的高低反映腫瘤的存在和/或生長(zhǎng)情況。特定的TM可以提示或確定某一部位腫瘤。定期檢查各種TM，有可能早期發(fā)現(xiàn)腫瘤。腫瘤若治療（手術(shù)切除、放療或化療等）有效，相應(yīng)的TM會(huì)明顯減少。有復(fù)法或轉(zhuǎn)移后，相應(yīng)的TM可能再次增加。（二）腫瘤免疫檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物（tumormarker,TM39腫瘤免疫檢測(cè)-AFP定義——甲胎蛋白（AFP）是胎兒發(fā)育早期，由肝臟和卵黃囊合成的一種血清糖蛋白，胎兒出生后不久即逐漸消失。參考值——血清

25

g/L臨床意義原發(fā)性肝細(xì)胞癌，77.1%患者明顯升高（

300

g/L）。但也有18%患者可無(wú)AFP升高生殖腺胚胎性腫瘤，如睪丸、奇胎瘤和卵巢腫瘤等，血清AFP升高。病毒性肝炎、肝硬化，可有不同程度的升高，但其水平

300

g/L。腫瘤免疫檢測(cè)-AFP定義——甲胎蛋白（AFP）是胎兒發(fā)育早期40腫瘤免疫檢測(cè)-CEA定義——癌胚抗原（CEA）是一種結(jié)構(gòu)復(fù)雜的可溶性糖蛋白，胚胎期主要存在于胎兒的胃腸道、胰腺和肝臟，出生后組織內(nèi)含量很低。參考值——血清

5

g/L臨床意義胃腸道腫瘤，尤其是結(jié)腸癌、直腸癌（術(shù)后復(fù)發(fā)）、胃癌、胰腺癌等其他部位腫瘤：乳腺癌、肺癌胃腸道腫瘤術(shù)后或化療的療效觀察腫瘤免疫檢測(cè)-CEA定義——癌胚抗原（CEA）是一種結(jié)構(gòu)復(fù)雜41腫瘤免疫檢測(cè)-CA19-9定義——糖鏈抗原19-9（CA19-9），又稱胃腸癌相關(guān)抗原，是一種與胰腺癌、膽囊癌、結(jié)腸癌和胃癌相關(guān)的腫瘤標(biāo)志物。正常人體組織中含量很低。參考值——血清

37000U/L臨床意義胰腺癌、膽囊癌和膽管壺腹癌，明顯升高，尤其胰腺癌，敏感性70%-95%，特異性72-90%。其他消化道腫瘤：胃癌陽(yáng)性率50%，結(jié)腸癌陽(yáng)性率60%，肝癌51%。消化道炎癥，如急性胰腺炎、膽囊炎、肝硬化和肝炎等，也有不同程度升高。腫瘤免疫檢測(cè)-CA19-9定義——糖鏈抗原19-9（CA1942腫瘤免疫檢測(cè)-CA125定義——癌抗原125（CA125）是很重要的卵巢癌相關(guān)抗原，是一種大分子多聚糖蛋白，存在于上皮性卵巢癌組織和患者血清中。參考值——血清

35000U/L臨床意義卵巢癌明顯升高，手術(shù)或化療有效者很快下降；復(fù)發(fā)時(shí)再度明顯升高。其他腫瘤：卵巢癌40%，其他婦科腫瘤43%，胰腺癌50%，胃癌47%，肺癌41.4%。非惡性腫瘤，如子宮內(nèi)膜異位癥、盆腔炎、卵巢囊腫等，也可不同程度升高。腫瘤免疫檢測(cè)-CA125定義——癌抗原125（CA125）43腫瘤免疫檢測(cè)-CA15-3定義——癌抗原15-3（CA15-3）是一種乳腺癌相關(guān)抗原，為大分子糖蛋白。參考值——血清

25000U/L。臨床意義乳腺癌患者升高。是原發(fā)性乳腺癌的輔助診斷指標(biāo)，也是手術(shù)后隨訪和監(jiān)控腫瘤復(fù)法、轉(zhuǎn)移的指標(biāo)。其他惡性腫瘤：肺癌、腎癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、卵巢癌和原發(fā)性肝癌，也有不同程度的陽(yáng)性率。肝臟、胃腸道、肺、乳腺、卵巢等非惡性腫瘤疾病，陽(yáng)性率低于10%。腫瘤免疫檢測(cè)-CA15-3定義——癌抗原15-3（CA15-44腫瘤免疫檢測(cè)-PSA定義——前列腺特異性抗原（PSA）是一種由前列腺上皮細(xì)胞分泌的蛋白酶。目前臨床可以檢測(cè)血清總PSA（T-PSA）和游離PSA（F-PSA）。參考值——T-PSA

4.0

g/L，F(xiàn)-PSA

0.8

g/L，F(xiàn)-PSA/T-PSA

0.25臨床意義前列腺癌患者血清PSA升高，其濃度和陽(yáng)性率隨病程的進(jìn)展而增高。前列腺肥大、前列腺炎、腎臟和泌尿生殖系統(tǒng)疾病，也可輕度升高。F-PSA/T-PSA比值臨床意義更大。比值

0.1提示前列腺癌，

0.25提示可能是前列腺增生。腫瘤免疫檢測(cè)-PSA定義——前列腺特異性抗原（PSA）是一種45（三）感染免疫檢測(cè)-細(xì)菌血清抗鏈球菌溶血素“O”試驗(yàn)溶血素“O”是A群溶血性鏈球菌產(chǎn)生的具有溶血活性的代謝產(chǎn)物，相應(yīng)的抗體稱作抗鏈球菌溶血素“O”。參考值：乳膠凝集法（LAT）陰性臨床意義：陽(yáng)性-近期A群溶血性鏈球菌感染（活動(dòng)性風(fēng)濕熱、風(fēng)濕性心肌炎、急性腎小球腎炎、急性上呼吸道感染、皮膚軟組織感染等。（三）感染免疫檢測(cè)-細(xì)菌血清抗鏈球菌溶血素“O”試驗(yàn)46感染免疫檢測(cè)-細(xì)菌傷寒和副傷寒沙門(mén)菌免疫測(cè)定傷寒沙門(mén)菌感染后菌體“O”和鞭毛“H”抗原可刺激機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)抗體。甲、乙、丙型副傷寒沙門(mén)菌也可產(chǎn)生相應(yīng)的“O”“H”抗體。肥達(dá)反應(yīng)（Widalreaction,WR）。參考值：傷寒H1∶160,O1∶80；副傷寒1∶80臨床意義：?jiǎn)畏菅錙1∶80，H∶160；或動(dòng)態(tài)觀察升高4倍以上。①O、H均升高，傷寒；②O不高、H升高，預(yù)防接種；③O升高、H不高，感染早期。感染免疫檢測(cè)-細(xì)菌傷寒和副傷寒沙門(mén)菌免疫測(cè)定47感染免疫檢測(cè)-病毒乙型肝炎病毒抗原抗體表面抗原（HBsAg）及其抗體（抗-HBs）,e抗原（HBeAg）及其抗體（抗-HBe），核心抗原（HBcAg）及其抗體（抗HBc）。HBsAg：急慢性乙肝或攜帶者抗-HBs：保護(hù)性抗體，病毒已清除，或疫苗接種后HBeAg：HBV復(fù)制狀態(tài)及血清有傳染性指標(biāo)抗-HBe：非保護(hù)性抗體，提示預(yù)后良好。抗HBc：IgM型抗體。急性感染指標(biāo)。感染免疫檢測(cè)-病毒乙型肝炎病毒抗原抗體48感染免疫檢測(cè)-病毒甲型肝炎病毒抗原抗體抗原檢測(cè)（ELISA）：微量板包被抗-HAV，加入待檢樣本，再加入酶標(biāo)記的抗-HAV，顯色，測(cè)定OD值。待檢樣本OD值-空白OD值/陰性對(duì)照OD值0.21為陽(yáng)性?？贵w檢測(cè)：檢測(cè)抗-HAVIgM和總抗-HAV。ELISA法或化學(xué)發(fā)光法。感染免疫檢測(cè)-病毒甲型肝炎病毒抗原抗體49（四）自身免疫檢測(cè)機(jī)體的免疫系統(tǒng)對(duì)自身組織成分產(chǎn)生免疫應(yīng)答，產(chǎn)生相應(yīng)的自身抗體，并引起組織損傷，形成自身免疫性疾病。類風(fēng)濕因子抗核抗體抗組織細(xì)胞抗體其他自身抗體（四）自身免疫檢測(cè)機(jī)體的免疫系統(tǒng)對(duì)自身組織成分產(chǎn)生免疫應(yīng)50六、微生物檢查六、微生物檢查51及時(shí)采集無(wú)菌操作立即送檢定量或半定量培養(yǎng)藥敏試驗(yàn)分級(jí)報(bào)告和限時(shí)報(bào)告（一）標(biāo)本采集與處理原則及時(shí)采集（一）標(biāo)本采集與處理原則522.標(biāo)本采集方法血液標(biāo)本上呼吸道標(biāo)本尿標(biāo)本糞便標(biāo)本2.標(biāo)本采集方法血液標(biāo)本上呼吸道標(biāo)本尿標(biāo)本糞便標(biāo)本531

血液標(biāo)本1）送檢指征①癥狀指征發(fā)熱：高熱（39C以上），伴有明顯的毒血癥狀，以間歇遲張熱多見(jiàn)。皮疹：革蘭陰性菌—瘀點(diǎn)傷寒—玫瑰疹斑疹傷寒—暗紅色斑丘疹肝脾腫大：革蘭陰性菌敗血癥關(guān)節(jié)疼痛：革蘭陽(yáng)性菌神志昏迷或休克：革蘭陰性菌毒血癥狀1血液標(biāo)本1）送檢指征54②疾病指征化膿性病灶或損傷粘膜損傷性疾病肝臟疾病糖尿病血液疾病及惡性腫瘤呼吸道感染或呼吸衰竭：吸入或血源長(zhǎng)期輸液或?qū)Ч芙槿爰膊⊙和肝龌颊哐簶?biāo)本②疾病指征血液標(biāo)本55血液標(biāo)本①采血時(shí)間與次數(shù)

抗菌藥物治療前

發(fā)熱初期或高峰期；

連續(xù)2～3次。②采血部位：肘靜脈采集方法：注射器抽取采血量：成人5～10ml，兒童1～5ml2）標(biāo)本采集血液標(biāo)本①采血時(shí)間與次數(shù)2）標(biāo)本采集56血液標(biāo)本3）標(biāo)本運(yùn)送與處理

床邊接種血培養(yǎng)瓶。立即送檢。不能及時(shí)送檢者，置室溫（22C左右）保存。血液標(biāo)本3）標(biāo)本運(yùn)送與處理572

上呼吸道標(biāo)本1）送檢指征①癥狀指征咳嗽：痙攣性、持續(xù)性—日咳咳痰：鐵銹色痰—大葉性肺炎黃粘痰—細(xì)菌感染咯血：痰中帶血或泡沫血痰呼吸困難：肺源性，常拌胸痛發(fā)熱：稽留熱—大葉性肺炎長(zhǎng)期低熱—肺結(jié)核

2上呼吸道標(biāo)本1）送檢指征58肺炎支氣管炎氣管炎肺膿腫肺結(jié)核白喉百日咳上呼吸道標(biāo)本②疾病指征肺炎上呼吸道標(biāo)本②疾病指征59①采集時(shí)間痰：晨痰支擴(kuò)或有空洞者作體位引流

抗生素治療前咽拭子：晨起后、進(jìn)食前抗生素治療前上呼吸道標(biāo)本2）標(biāo)本采集①采集時(shí)間上呼吸道標(biāo)本2）標(biāo)本采集60痰液標(biāo)本自然咳痰法—晨起后清水反復(fù)漱口后無(wú)痰或痰少者可霧化吸入支氣管鏡采集法—?dú)夤艽┐袒蛑苯臃未┐獭獏捬蹙囵B(yǎng)咽拭子晨起后清水漱口，無(wú)菌棉拭子涂抹咽后壁上呼吸道標(biāo)本②采集方法痰液標(biāo)本上呼吸道標(biāo)本②采集方法61上呼吸道標(biāo)本3）標(biāo)本運(yùn)送與處理標(biāo)本采集后置無(wú)菌容器內(nèi)及時(shí)送檢。不能及時(shí)送檢者，置冰箱（4C左右）保存。上呼吸道標(biāo)本3）標(biāo)本運(yùn)送與處理621）送檢指征①癥狀指征尿路刺激癥狀：尿頻、尿急、尿痛腎區(qū)疼痛、扣擊痛②疾病指征腎盂腎炎膀胱炎3

尿標(biāo)本1）送檢指征3尿標(biāo)本63尿標(biāo)本2）標(biāo)本采集中段尿：尿道口清洗、消毒后，取中段尿標(biāo)本。兩側(cè)腎盂尿：?jiǎn)蝹?cè)腎臟感染膀胱穿刺：厭氧菌培養(yǎng)尿標(biāo)本2）標(biāo)本采集64尿標(biāo)本3）標(biāo)本運(yùn)送與處理標(biāo)本采集后置無(wú)菌容器內(nèi)及時(shí)送檢。不能及時(shí)送檢者，置冰箱（4C左右）保存。尿標(biāo)本3）標(biāo)本運(yùn)送與處理654

腦脊液標(biāo)本1）送檢指征①癥狀指征全身癥狀：發(fā)熱，往往為高熱顱壓增高：頭痛、嘔吐（噴射性）、頸項(xiàng)強(qiáng)直、反射增強(qiáng)。②疾病指征化膿性腦膜炎結(jié)核性腦膜炎4腦脊液標(biāo)本1）送檢指征66腦脊液標(biāo)本2）標(biāo)本采集及時(shí)采集（抗生素用藥前），腰穿，取腦脊液ml3）標(biāo)本運(yùn)送與處理標(biāo)本采集后置無(wú)菌容器內(nèi)及時(shí)送檢。不能及時(shí)送檢者，置室溫（22C左

右）保存。腦脊液標(biāo)本2）標(biāo)本采集67自然排便：采集膿、血或粘凍成分松檢。直腸試子：排便困難或嬰兒5

糞便標(biāo)本自然排便：采集膿、血或5糞便標(biāo)本681）不染色標(biāo)本直接鏡檢不染色標(biāo)本的直接鏡檢主要用于觀察細(xì)菌的動(dòng)力及運(yùn)動(dòng)狀況。有鞭毛的細(xì)菌在顯微鏡下運(yùn)動(dòng)活潑，如霍亂弧菌的米泔樣糞便標(biāo)本的直接鏡檢。濕片法或懸滴法。（二）病原學(xué)檢查—鏡檢1）不染色標(biāo)本直接鏡檢（二）病原學(xué)檢查—鏡檢69

鏡檢2）革蘭染色鏡檢方法：結(jié)晶紫初染碘液媒染乙醇脫色石碳酸復(fù)紅復(fù)染。結(jié)果：革蘭陽(yáng)性－紫色；革蘭陰性－紅色意義：①有無(wú)細(xì)菌及大致的量；②染色性（G+、G-），經(jīng)驗(yàn)用藥；③形態(tài)（球菌、桿菌），鑒定；④特殊診斷（尿道分泌物——淋病奈瑟菌，腦脊液——腦膜炎奈瑟菌）。鏡檢2）革蘭染色鏡檢70鏡檢3）抗酸染色鏡檢

方法：石碳酸復(fù)紅初染鹽酸乙醇脫色呂氏美蘭復(fù)染。

結(jié)果：抗酸菌－紅色；其他細(xì)菌、細(xì)胞－紅色

意義：檢查抗酸菌（主要分枝桿菌）。

鏡檢3）抗酸染色鏡檢71鏡檢4）其它特殊染色鏡檢莢膜染色；鞭毛染色；異染顆粒染色鏡檢4）其它特殊染色鏡檢72檢驗(yàn)方法—分離培養(yǎng)1）細(xì)菌體外培養(yǎng)的條件營(yíng)養(yǎng)—蛋白質(zhì)、糖類、無(wú)機(jī)鹽、水溫度—病原菌35C，腐生菌22C氣體—O2，CO2，N2，H2滲透壓—其它—生長(zhǎng)因子（V、X因子等）檢驗(yàn)方法—分離培養(yǎng)1）細(xì)菌體外培養(yǎng)的條件73分離培養(yǎng)2）培養(yǎng)基選擇增菌培養(yǎng)基：肉湯、堿性蛋白胨水基礎(chǔ)培養(yǎng)基：營(yíng)養(yǎng)瓊脂、M-H瓊脂選擇培養(yǎng)基：麥康凱瓊脂、SS瓊脂鑒別培養(yǎng)基：膽汁七葉苷瓊脂厭氧培養(yǎng)基：厭氧血平板分離培養(yǎng)2）培養(yǎng)基選擇743）接種方法肉湯增菌：血液、腦脊液等蛋白胨水增菌：糞便（弧菌）平板劃線接種：其他標(biāo)本（四區(qū)劃線法）分離培養(yǎng)3）接種方法分離培養(yǎng)75分離培養(yǎng)3）初代培養(yǎng)初代培養(yǎng)最好含5～10％CO2

（尤其是嗜血該菌、奈瑟菌等）35～37

C，培養(yǎng)18～24h（分枝桿菌2～4w）分離培養(yǎng)3）初代培養(yǎng)76分離培養(yǎng)4）分離純化初代培養(yǎng)分不出單個(gè)菌落時(shí)應(yīng)重新分區(qū)劃線接種。分離培養(yǎng)4）分離純化771）生化鑒定不同種屬的細(xì)菌因代謝酶的不同，在生長(zhǎng)過(guò)程中需要的生化底物不同，產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物也不同。糖的利用：?jiǎn)翁牵ㄆ?、乳、麥、甘）、多糖蛋白質(zhì)利用和分解：賴、鳥(niǎo)、精氨酸鹽類利用與分解：NaCl、枸櫞酸鹽等氣體產(chǎn)生：N2，NO，CO2、CO等。檢驗(yàn)方法—鑒定1）生化鑒定檢驗(yàn)方法—鑒定78鑒定2）血清學(xué)反應(yīng)觀察待檢菌株與已知抗體的凝集反應(yīng)，鑒定各種細(xì)菌，并分型。（如沙門(mén)菌、志賀菌、致病大腸埃希菌、霍亂弧菌等抗血清。）鑒定2）血清學(xué)反應(yīng)79鑒定3）分子生物學(xué)鑒定根據(jù)病原菌、病毒或其它病原微生物核酸的特異性基因片斷，合成并標(biāo)記引物，直接用基因探針或經(jīng)PCR或RT-PCR擴(kuò)增后檢測(cè)、分析。鑒定3）分子生物學(xué)鑒定80鑒定4）自動(dòng)或半自動(dòng)微生物分析儀（采用細(xì)菌的生化特征或免疫學(xué)特征）VITEK-AMSMicroScanPhonex鑒定4）自動(dòng)或半自動(dòng)微生物分析儀81（三）體外藥敏試驗(yàn)定義：體外藥敏試驗(yàn)（antimicrobialsusceptibilitytestinginvitro），即用體外試驗(yàn)的方法，檢測(cè)待檢菌對(duì)某種抗菌藥物的敏感程度，指導(dǎo)臨床合理選用敏感的抗菌藥物，迅速控制和治療該細(xì)菌引起感染。方法：抑菌試驗(yàn)殺菌試驗(yàn)聯(lián)合藥敏試驗(yàn)?zāi)退幟笝z測(cè)（三）體外藥敏試驗(yàn)定義：體外藥敏試驗(yàn)（antimicrobi82目的與指征臨床分離菌株必須進(jìn)行常規(guī)藥敏試驗(yàn)以提供臨床選擇藥物時(shí)參考。臨床因治療的反應(yīng)差而考慮更換抗菌藥物時(shí)，應(yīng)對(duì)擬選藥物進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。了解所在醫(yī)院或地區(qū)常見(jiàn)病原菌耐藥性的變遷情況。評(píng)價(jià)新抗菌藥物的抗菌譜和抗菌活性等藥效學(xué)特性。對(duì)細(xì)菌耐藥譜進(jìn)行分析和分型有助于某些菌種的鑒定，并作為醫(yī)院感染流行病學(xué)調(diào)查的手段之一。目的與指征臨床分離菌株必須進(jìn)行常規(guī)藥敏試驗(yàn)以提供臨床選擇藥物83藥敏試驗(yàn)的意義指導(dǎo)臨床合理選擇敏感的抗菌藥物，及時(shí)控制細(xì)菌感染。減少不必要的抗菌藥物的使用，降低治療費(fèi)用，也降低對(duì)病人機(jī)體的損害。減少耐藥菌株的產(chǎn)生。輔助鑒定細(xì)菌。藥敏試驗(yàn)的意義指導(dǎo)臨床合理選擇敏感的抗菌藥物，84定義：用于測(cè)定抗菌藥物體外抑制細(xì)菌生長(zhǎng)大效力的試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)方法：主要有進(jìn)行定性測(cè)定的紙片擴(kuò)散法（diskdiffusiontest），定量測(cè)定的稀釋法（dilutiontest）和E試驗(yàn)法（Etest）。

抑菌試驗(yàn)定義：用于測(cè)定抗菌藥物體外抑制細(xì)菌生長(zhǎng)大效力的試驗(yàn)。抑菌試驗(yàn)85

1.紙片擴(kuò)散法

臨床常用的是紙片瓊脂擴(kuò)散法（discagardiffusionmethod），即Kirby-Bauer（K-B）紙片瓊脂擴(kuò)散法。1.紙片擴(kuò)散法臨床常用的是紙片瓊脂擴(kuò)散法（di86

將含有定量抗菌藥物的紙片貼在已接種待檢菌的瓊脂平板上，紙片中所含的藥物吸收瓊脂中的水分溶解后不斷向紙片周?chē)鷧^(qū)域擴(kuò)散形成遞減的梯度濃度，在紙片周?chē)志鷿舛确秶鷥?nèi)待檢菌的生長(zhǎng)被抑制，形成透明的抑菌圈，抑菌圈大小與該藥對(duì)待檢菌的最低抑菌濃度（MIC）呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。

（1）原理

將含有定量抗菌藥物的紙片貼在已接種待檢菌的瓊脂平871）抗菌藥物紙片

直徑6.35mm，吸水量為20

l。2）培養(yǎng)基水解酪蛋白（M-H）瓊脂。3）操作方法轉(zhuǎn)種肉湯，制備菌液（0.5麥?zhǔn)蠁挝唬?；接種平板，貼藥敏紙片；孵育（35℃，18～24h）。（2）方法

1）抗菌藥物紙片（2）方法88敏感（susceptible）

表示待檢菌能被測(cè)定藥物常規(guī)劑量給藥后在體內(nèi)達(dá)到的血藥濃度所抑制或殺滅。中度敏感（intermediate）

指待檢菌可被測(cè)定藥物大劑量給藥后在體內(nèi)能達(dá)到的濃度所抑制，或在測(cè)定藥物濃集部位的體液中，如尿中被抑制。耐藥（resistant）

表示待檢菌不能被體內(nèi)感染部位可能達(dá)到的抗菌藥物濃度所抑制。（3）結(jié)果判讀敏感（susceptible）表示待檢菌能被測(cè)定藥物常規(guī)89實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)及其常用檢測(cè)項(xiàng)目的臨床意義--課課件90

稀釋法是定量測(cè)定抗菌藥物抑制細(xì)菌生長(zhǎng)作用大體外方法，分為肉湯稀釋法和瓊脂稀釋法。稀釋法所測(cè)得的某種抗菌藥物能抑制待檢菌肉眼可見(jiàn)生長(zhǎng)的最低濃度稱為最低（最?。┮志鷿舛龋╩inimalinhibitoryconcentration，MIC）。稀釋法—肉湯稀釋法稀釋法是定量測(cè)定抗菌藥物抑制細(xì)菌生長(zhǎng)作用大體外方91肉湯稀釋法抗菌藥物的配制與稀釋用蒸餾水或0.1mol/L磷酸鹽緩沖液（pH6）稀釋抗菌藥物。待檢菌和質(zhì)控菌的準(zhǔn)備同K-B法。接種、孵育最終接種濃度為5105CFU/ml。

結(jié)果判讀肉眼可見(jiàn)生長(zhǎng)的最低藥物濃度為MIC。質(zhì)控控制肉湯稀釋法抗菌藥物的配制與稀釋92用無(wú)菌96孔聚苯乙烯U型微量板代替試管，其他方法同肉湯稀釋法。微量肉湯稀釋法用無(wú)菌96孔聚苯乙烯U型微量板代替試管，其他方法同93瓊脂稀釋法本法的優(yōu)點(diǎn)是可以同時(shí)做多株菌株的MIC測(cè)定，結(jié)果重復(fù)性優(yōu)于肉湯稀釋法，且易于發(fā)現(xiàn)污染或耐藥突變菌株。瓊脂稀釋法本法的優(yōu)點(diǎn)是可以同時(shí)做多株菌株的MIC測(cè)定94瓊脂稀釋法含藥瓊脂的制備取稀釋后的抗菌藥物2ml，分別加入18ml消毒后、冷卻至50℃左右的瓊脂中。接種定點(diǎn)接種1～2

l菌液。孵育35℃18～24h。結(jié)果判讀菌落生長(zhǎng)完全被抑制的最低藥物濃度為該藥對(duì)待檢菌的MIC。瓊脂稀釋法含藥瓊脂的制備95

3.E試驗(yàn)-原理

E試驗(yàn)結(jié)合了稀釋法和擴(kuò)散法的原理和特點(diǎn)，操作簡(jiǎn)便同擴(kuò)散法，但可以同稀釋法一樣直接定量檢測(cè)藥物對(duì)待檢菌的MIC。同紙片擴(kuò)散法的主要區(qū)別在于E試驗(yàn)所用的是一條寬5mm、長(zhǎng)50mm，內(nèi)含干化、穩(wěn)定、濃度由高至低呈指數(shù)梯度分布的一種抗菌藥物的商品化塑料試條。3.E試驗(yàn)-原理E試驗(yàn)結(jié)合了稀釋法和擴(kuò)散法的原96操作過(guò)程培養(yǎng)基、菌液準(zhǔn)備和接種均同K-B法，貼E試驗(yàn)試條（90mm平皿可貼1～2根，140mm平皿可貼6根）。結(jié)果判讀孵育后圍繞試條可形成一個(gè)橢圓形的抑菌圈，抑菌圈與試條的橫向相交處的讀數(shù)即為抗菌藥物對(duì)待檢菌的MIC。E試驗(yàn)-方法操作過(guò)程E試驗(yàn)-方法97（六）特殊藥敏試驗(yàn)（六）特殊藥敏試驗(yàn)981.-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)目的：

-內(nèi)酰胺酶（-lactamase）能滅活-內(nèi)酰胺類抗生素，導(dǎo)致細(xì)菌對(duì)該類抗生素耐藥。臨床意義：流感嗜血桿菌、淋病奈瑟菌和卡他莫拉汗菌對(duì)青霉素、氨芐西林耐藥；葡萄球菌和腸球菌對(duì)青霉素等耐藥。注意事項(xiàng)：革蘭陰性菌不檢測(cè)-內(nèi)酰胺酶。1.-內(nèi)酰胺酶