香草沒(méi)藥對(duì)p450活性的影響

香草沒(méi)藥對(duì)p450活性的影響

乳房和止痛藥都具有活血止痛的功效。這兩種藥物通常用作復(fù)合劑，臨床應(yīng)用廣泛。含有30ml片劑和未經(jīng)處理的中藥。近年研究發(fā)現(xiàn)乳香沒(méi)藥可引起動(dòng)物肝損害1材料表面1.1試驗(yàn)藥物1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和動(dòng)物Wistar大鼠和昆明種小鼠,SPF級(jí),合格證號(hào)SCXK(津)2009-0001,購(gòu)自天津市山川紅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技有限公司。飼養(yǎng)于天津中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,所用飼料為大鼠全價(jià)顆粒飼料為天津市華榮實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技有限公司生產(chǎn)。1.3高效液相色譜法戊巴比妥鈉(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司進(jìn)口分裝);甲硝唑(中國(guó)藥品生物制品檢定所);非那西丁,氯唑沙宗(AlfaAesar);氨苯砜(Fluka);NADPH(Roche);TRIS(ANGUS);甲醇,乙腈(色譜純,天津康科德科技有限公司);KCI,CaClAX205型分析天平(METTLERTOLEDO),JJ2000型精密電子天平(常熟雙杰測(cè)試儀器廠),L8-80M型高速離心機(jī)(Beckman),N-EVAP111型氮吹儀(Organomation),Waters600E型高效液相(Waters2487紫外檢測(cè)器)。2方法2.1苯巴比妥鈉對(duì)大鼠睡眠的影響2.1.1連續(xù)使用苯巴比妥鈉藥物對(duì)大鼠睡眠的影響56只小鼠,雌雄各半,分為對(duì)照組和乳香+沒(méi)藥3.15,2.10,1.05g·kg2.1.2單次使用對(duì)戊二醇鈉誘導(dǎo)小鼠睡眠的影響48只小鼠,雌雄各半,分為對(duì)照組和乳香、沒(méi)藥、乳香+沒(méi)藥(1∶1)混合物組,劑量均為3.15g·kg2.2影響大鼠cyp1a2、cyp2e1和cyp3a4的因素大鼠40只,雌雄各半,分為對(duì)照組、乳香組、沒(méi)藥組、乳香+沒(méi)藥(1∶1)混合組,給藥組均以3.00g·kg2.2.1體外肝微粒體體系肝微粒體懸液、NADPH及混合底物工作液的磷酸緩沖液組成體外肝微粒體體系。取肝微粒體懸液60μL和含非那西丁、氯唑沙宗、氨苯砜均為4mg·L2.2.2回收率和精密度試驗(yàn)在失活肝微粒體中加入不同濃度底物混合物,按樣品處理方法處理,檢測(cè)底物的最低檢測(cè)線。在線性范圍內(nèi)取高、中、低3個(gè)濃度底物混合后進(jìn)行回收率、日內(nèi)精密度,每個(gè)濃度5個(gè)樣,每一濃度連續(xù)測(cè)定3d為日間精密度。色譜條件為AgilentTC-C18(5μm,4.6mm×150mm)色譜柱,流動(dòng)相為乙腈-水(24∶76)流速1.0mL·min3結(jié)果3.1小鼠睡眠的影響因素乳香沒(méi)藥混合物連續(xù)使用,在不同劑量均可使戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的小鼠睡眠只數(shù)減少,作用強(qiáng)度與用藥劑量呈負(fù)相關(guān)(表1)。單次給藥的結(jié)果表明,乳香和沒(méi)藥均可使小鼠入睡數(shù)增加,與對(duì)照組無(wú)顯著性差異(表2)。3.2影響大鼠cyp1a2、cyp2e1和cyp3a4的因素3.2.1探針?biāo)幍臉?biāo)準(zhǔn)曲線方程及相關(guān)指標(biāo)非那西丁、氯唑沙宗、氨苯砜和內(nèi)標(biāo)甲硝唑分離良好,出峰時(shí)間依次為甲硝唑3.168min,氨苯砜8.374min,非那西丁10.722min,氯唑沙宗19.454min,未受干擾。3個(gè)探針?biāo)幍臉?biāo)準(zhǔn)曲線方程及相關(guān)指標(biāo)見(jiàn)表3。非那西丁回收率在95.22%~105.64%,氯唑沙宗在94.43%~106.58%,氨苯砜在98.49%~106.28%。非那西丁日內(nèi)及日間RSD在2.97%~8.37%,氯唑沙宗在1.51%~10.84%,氨苯砜在2.59%~9.23%。3.2.2非那西丁和氯唑沙宗反應(yīng)完畢后,乳香組、沒(méi)藥組、乳香+沒(méi)藥混合組肝微粒體體系中非那西丁和氯唑沙宗的濃度顯著低于對(duì)照組,而氨苯砜則無(wú)顯著差異。結(jié)果表明,無(wú)論是乳香、沒(méi)藥還是其混合物均可使大鼠CYP1A2,CYP2E1活性增強(qiáng),而對(duì)CYP3A4則無(wú)顯著影響。4乳液沒(méi)藥對(duì)戊巴比妥鈉代謝的影響戊巴比妥鈉代謝的快慢直接受P450活性的影響。小鼠連續(xù)ig給予乳香沒(méi)藥7d使戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的小鼠睡眠只數(shù)減少,說(shuō)明戊巴比妥鈉在體內(nèi)代謝加快,乳香沒(méi)藥連續(xù)使用可使P450活性增強(qiáng),但這個(gè)誘導(dǎo)作用卻與乳香沒(méi)藥的劑量呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)性,表明乳香沒(méi)藥在劑量增大的同時(shí)也在抑制戊巴比妥鈉在體內(nèi)的代謝。乳香沒(méi)藥單次給藥使戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的小鼠睡眠率升高更加證實(shí)了這一點(diǎn),小鼠睡眠率升高說(shuō)明戊巴比妥鈉的代謝被乳香沒(méi)藥所抑制,而整個(gè)實(shí)驗(yàn)距離首次用藥不足2h,乳香沒(méi)藥在此時(shí)間中對(duì)P450表達(dá)的影響可以忽略,可能是直接影響酶空間結(jié)構(gòu)而導(dǎo)致其活性降低或者競(jìng)爭(zhēng)性抑制戊巴比妥鈉代謝。從乳香沒(méi)藥用藥7d誘導(dǎo)P450活性增強(qiáng)來(lái)看,更可能是競(jìng)爭(zhēng)性抑制,但這個(gè)推測(cè)尚需進(jìn)一步研究證實(shí)。根據(jù)文獻(xiàn)P450活性的改變對(duì)于聯(lián)合用藥的有效性和安全性有明顯影響,乳香沒(méi)藥連