星狀神經(jīng)節(jié)阻滯在無(wú)血預(yù)充過(guò)程中對(duì)體外循環(huán)大鼠認(rèn)知功能的影響

星狀神經(jīng)節(jié)阻滯在無(wú)血預(yù)充過(guò)程中對(duì)體外循環(huán)大鼠認(rèn)知功能的影響

體外循環(huán)（cpb）是指將患者體內(nèi)的血液引導(dǎo)到外，通過(guò)膜氧合器交換氣體，然后通過(guò)泵的作用將其放入體內(nèi)，以維持身體的氧氣和血液循環(huán)的相對(duì)狀態(tài)。這是一種有效的持續(xù)血液動(dòng)力學(xué)工具，取代了心肺環(huán)，成為臨床領(lǐng)域的重要工程。1材料和方法1.1大鼠分組及分組30只健康SD成年雄性大鼠，由廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供（許可證編號(hào)：SCXK桂2014-0002），體重400～450g。將大鼠隨機(jī)分為3組：假手術(shù)組（S組）、CPB組（C組）和SGB+CPB組（SC組），每組10只。S組大鼠只進(jìn)行動(dòng)靜脈置管，C組大鼠建立CPB模型轉(zhuǎn)流2h,SC組大鼠建立SGB后立即行CPB模型轉(zhuǎn)流2h。1.2動(dòng)脈穿刺方法腹腔注射1%戊巴比妥鈉50mg/kg將大鼠麻醉后仰臥固定于手術(shù)臺(tái)上，行氣管插管，連接HX-300S動(dòng)物呼吸機(jī)（成都泰盟軟件有限公司），控制潮氣量為8mL/kg，呼吸頻率為60次/min，維持呼氣末二氧化碳4.66～5.99kPa的機(jī)械通氣。CPB采用右側(cè)頸外靜脈—右側(cè)股動(dòng)脈。右側(cè)頸外靜脈用22G靜脈穿刺針置管引流，右側(cè)股動(dòng)脈用24G靜脈穿刺針進(jìn)行灌注，尾動(dòng)脈穿刺術(shù)監(jiān)測(cè)動(dòng)脈血壓和血?dú)夥治觥ｌo脈給予400IU/kg的肝素鈉，激活全血凝固時(shí)間（activatedclottingtime,ACT）≥480s后進(jìn)行CPB轉(zhuǎn)流1.3局麻和羅哌卡因注射大鼠腹腔注射1%戊巴比妥鈉30mg/kg，在仰臥位的狀態(tài)下行SGB。在大鼠左側(cè)胸鎖關(guān)節(jié)外側(cè)0.3cm處注射0.1mL1%利多卡因進(jìn)行局麻，用1mL注射器垂直進(jìn)針穿刺，針尖斜面朝上，朝向足端約0.3cm時(shí)注射0.25%羅哌卡因0.5mL+1%利多卡因0.5mL。SGB成功的標(biāo)志為出現(xiàn)明顯Horner綜合征，表現(xiàn)為大鼠左側(cè)眼窩內(nèi)陷、瞳孔縮小、眼瞼下垂和眼裂變小。SGB成功后進(jìn)行CPB模型建立。1.4酸ph值、鈉離子na分別于實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前（T0）和實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后1h(T1）、2h(T2）、6h(T3）、24h(T4）、72h(T5）、第7天（T6）抽取大鼠尾動(dòng)脈血0.4mL，用i-STAT1血?dú)夥治鰞x（美國(guó)Medtroniz公司）測(cè)量酸堿（pH）值、鈉離子（Na1.6切片制備將各組大鼠麻醉后斷頸取腦，用組織固定液固定24h后修塊，階梯式脫水，石蠟包埋，冠狀位切片，厚約5μm。HE依次染色，脫水封片，光學(xué)顯微鏡觀察大鼠海馬的組織結(jié)構(gòu)。1.7尼氏染色試驗(yàn)將各組大鼠腦組織的石蠟切片脫蠟后用甲苯胺藍(lán)染色，冰醋酸分化，脫水透明封片，顯微鏡觀察海馬神經(jīng)元形態(tài)學(xué)特征。1.8中藥測(cè)試測(cè)試將T4～T6時(shí)間段的各組大鼠放入水迷宮中進(jìn)行測(cè)試。測(cè)試開(kāi)始前讓大鼠在水中自由游泳2min，找到水中平臺(tái)，若大鼠未及時(shí)找到平臺(tái)，則引導(dǎo)大鼠找到平臺(tái)1.9統(tǒng)計(jì)方法所有數(shù)據(jù)均采用SPSS23.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（2結(jié)果2.1不同時(shí)期各組大鼠的血液生化指標(biāo)的比較與S組相比，C組和SC組在T2～T3時(shí)間段的pH值、Na2.2組hb含量比較C組和SC組在T2～T5時(shí)間段的Hb的含量低于S組，且在T2時(shí)間段最低（均P<0.05）。在T2～T4時(shí)間段，C組Hb含量低于SC組，且均低于S組（P<0.05）；在T5時(shí)間段，C組和SC組Hb含量低于S組（P<0.05），見(jiàn)表2。2.3s組與s組p>0.05比較C組和SC組的IL-2濃度在T2～T4時(shí)間段高于S組（均P<0.05），且在T2時(shí)間段最高。在T2～T4時(shí)間段C組IL-2濃度高于SC組，且均高于S組（P<0.05），見(jiàn)圖1。2.4馬組織受損HE染色觀察，S組DG區(qū)的大鼠海馬細(xì)胞排列緊密而整齊；而C組大鼠海馬組織受損嚴(yán)重，細(xì)胞排列紊亂疏松、神經(jīng)元彌漫性空泡變性、大量小膠質(zhì)細(xì)胞浸潤(rùn)、核固縮明顯；SC組的病理學(xué)改變較C組明顯緩解，細(xì)胞排列較為規(guī)則，小膠質(zhì)細(xì)胞、核固縮細(xì)胞和神經(jīng)元空泡變性的數(shù)量也明顯減少，見(jiàn)圖2。2.5c組神經(jīng)元自由基型尼氏染色觀察，S組的大鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元排列緊密且層次清晰、結(jié)構(gòu)完整且神經(jīng)元中尼氏小體含量豐富；而C組神經(jīng)元帶不完整、神經(jīng)元缺失嚴(yán)重，且尼氏小體解體明顯；SC組神經(jīng)元受損情況較C組明顯好轉(zhuǎn)，神經(jīng)元排列相對(duì)規(guī)整，神經(jīng)元缺失數(shù)量減少，且尼氏小體含量相對(duì)豐富，見(jiàn)圖3。2.6空間探索次數(shù)對(duì)逃避充壓在T4～T6時(shí)間段，C組比SC組大鼠在空間探索中象限穿越次數(shù)增加，逃避潛伏期時(shí)間延長(zhǎng)，且兩組數(shù)值明顯高于S組（均P<0.05），見(jiàn)圖4。3血清il-2、mds-na表達(dá)NaIL-2作為有效的抗炎因子，主要來(lái)源于CD輔助T細(xì)胞下，從而持續(xù)低水平狀態(tài)。在無(wú)血預(yù)充的CPB中，可能反復(fù)激活了Prdm1編碼的轉(zhuǎn)錄因子B淋巴細(xì)胞激活，誘導(dǎo)成熟蛋白1抑制IL-2的大量產(chǎn)生在CPB中，無(wú)論是缺血還是炎癥均會(huì)引起細(xì)胞水腫進(jìn)而導(dǎo)致腦水腫，最先體現(xiàn)于星形膠質(zhì)細(xì)胞，表現(xiàn)為空泡樣變性。在CPB中會(huì)增加反應(yīng)性的星形膠質(zhì)細(xì)胞反應(yīng)性的星形膠質(zhì)細(xì)胞中的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，從而會(huì)破壞血腦屏障，并加速星形膠質(zhì)細(xì)胞腫脹，而無(wú)血預(yù)充下的CPB會(huì)使其進(jìn)一步加劇，加重腦水腫有研究表明，Morris水迷宮廣泛用于空間記憶和學(xué)習(xí)，可作為術(shù)后認(rèn)知功能的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)，但運(yùn)動(dòng)功能缺陷不能作為水迷宮認(rèn)知功能測(cè)定的混淆因素研究顯示，在無(wú)血預(yù)充的情況下進(jìn)行CPB容易加重機(jī)體內(nèi)環(huán)境紊亂，導(dǎo)致組織、器官缺血缺氧壞死，如外周末梢功能循環(huán)障礙、認(rèn)知功能障礙、延長(zhǎng)術(shù)后恢復(fù)時(shí)間甚至實(shí)驗(yàn)動(dòng)物死亡綜上所述，SGB可以在一定程度上穩(wěn)定大鼠在無(wú)血預(yù)充條件下進(jìn)行CPB時(shí)機(jī)體的內(nèi)環(huán)境，調(diào)控血漿中IL-2的表達(dá)，減輕大腦的組織細(xì)胞水腫和神經(jīng)炎癥反應(yīng)，改善大腦缺血缺氧的狀況，從而減少大鼠POCD的發(fā)生。將大鼠麻醉后，在右頸內(nèi)靜脈處取血0.8mL，置于抗凝管中