分枝桿菌的資料

分枝桿菌的資料第1頁(yè)/共90頁(yè)放線菌是多數(shù)不致病，對(duì)人致病的主要有放線菌屬和諾卡菌屬。第2頁(yè)/共8990頁(yè)前者為厭氧或微需氧菌，細(xì)胞壁中不含分枝菌酸，多引起內(nèi)源性感染。后者為需氧菌，細(xì)胞壁中含有分枝菌酸，非人體正常菌群的成員，常引起外源性感染。概

述放線菌與諾卡菌的區(qū)別第3頁(yè)/共8990頁(yè)特征放線菌諾卡菌培養(yǎng)特性厭氧或微需氧需氧菌35～37℃生長(zhǎng)20～25℃不生長(zhǎng)20～25℃或37℃均生長(zhǎng)抗酸性非抗酸性絲狀菌弱抗酸性分布寄生口腔、上呼吸道、胃腸道、泌尿生殖道存在外界環(huán)境如土壤多為腐生菌感染性內(nèi)源性感染外源性感染代表菌種 衣氏放線菌、齲齒放線菌牛型放線菌星形諾卡菌、巴西諾卡菌結(jié)核分枝桿菌（Mycobacteriumtuberculosis，MTB）簡(jiǎn)稱結(jié)核桿菌人和動(dòng)物結(jié)核病的病原菌第一節(jié) 結(jié)核分枝桿菌第4頁(yè)/共8990頁(yè)第5頁(yè)/共8990頁(yè)MTB包括人結(jié)核分枝桿菌（M.tuberculosis）牛分枝桿菌（M.bovis）非洲分枝桿菌（M.africanum）坎納分枝桿菌（M.canettii）田鼠分枝桿菌(M.microti)等前四種對(duì)人類致病，其中人型MTB感染率最高第6頁(yè)/共8990頁(yè)一、分類二、臨床意義第7頁(yè)/共8990頁(yè)大約1/3的人口已感染MTB有2000萬(wàn)活動(dòng)性結(jié)核病患者每年新發(fā)病900萬(wàn)人，死于結(jié)核病300萬(wàn)人近年來(lái)，AIDS的發(fā)病率上升，AIDS患者又極易患結(jié)核病，結(jié)核病已成為威脅人類健康的一個(gè)嚴(yán)重的全球性公共衛(wèi)生問(wèn)題WHO已把結(jié)核病與AIDS、瘧疾一起列為人類的最主要?dú)⑹侄?、臨床意義第8頁(yè)/共8990頁(yè)二、臨床意義第9頁(yè)/共8990頁(yè)(一)所致疾病通過(guò)呼吸道、消化道和損傷的皮膚等多途徑感染機(jī)體，引起多種臟器的結(jié)核病，其中以肺結(jié)核為多見(jiàn)(二)免疫性有菌免疫或稱傳染性免疫細(xì)胞免疫遲發(fā)型超敏反應(yīng)二、臨床意義第10頁(yè)/共8990頁(yè)(三)變異結(jié)核分枝桿菌易發(fā)生形態(tài)、菌落、生長(zhǎng)溫度、毒力以及耐藥性的變異卡介苗（Bacillus

Calmette-Guérin，BCG）是有毒力的牛型結(jié)核分枝桿菌在甘油、膽汁和馬鈴薯的培養(yǎng)基中經(jīng)13年230次傳代而獲得的減毒變異株現(xiàn)已廣泛用于人類結(jié)核病的防治二、臨床意義(四)耐藥性對(duì)常見(jiàn)抗菌藥物天然耐藥多重耐藥結(jié)核病(multiple-drug

resistance

tuberculosis，MDRTB)是指對(duì)2種或2種以上的抗結(jié)核藥產(chǎn)生耐藥性的結(jié)核菌感染。臨床治療相當(dāng)棘手，死亡率很高第11頁(yè)/共8990頁(yè)三、微生物學(xué)檢驗(yàn)第12頁(yè)/共8990頁(yè)（一）基本特性結(jié)核分枝桿菌尚未發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生內(nèi)毒素、外毒素及侵襲性酶致病性可能與細(xì)菌在組織細(xì)胞內(nèi)大量繁殖引起的炎癥、代謝物質(zhì)的毒性以及菌體成分引起的免疫損傷有關(guān)結(jié)核分枝桿菌的致病物質(zhì)主要是莢膜、脂質(zhì)和蛋白質(zhì)三、微生物學(xué)檢驗(yàn)第13頁(yè)/共8990頁(yè)（二）標(biāo)本采集據(jù)感染部位的不同采集不同的標(biāo)本疑肺結(jié)核：收集清晨第一口痰，清潔干燥的容器內(nèi)送檢疑泌尿系結(jié)核：清晨一次全部尿量或24小時(shí)尿沉淀10～15ml送檢，必要時(shí)作無(wú)菌導(dǎo)尿送檢（診斷泌尿道結(jié)核通常需3～5份標(biāo)本）采集膿液應(yīng)直接從潰瘍處取膿汁或分泌物,深部膿腫用無(wú)菌注射器抽取送檢其他：無(wú)菌抽取腦脊液、胸水、腹水及關(guān)節(jié)液等盛無(wú)菌試管送檢。腦脊液標(biāo)本靜置后，表面可有細(xì)薄凝塊，取凝塊作涂片或接種培養(yǎng)三、微生物學(xué)檢驗(yàn)（三）標(biāo)本直接檢查形態(tài)學(xué)檢查直接涂片染色鏡檢濃縮集菌涂片檢查法核酸檢測(cè)第14頁(yè)/共8990頁(yè)形態(tài)學(xué)檢查齊-尼染色（Ziehl-Neelsen

technique）是常用的抗酸染色法，染色后結(jié)核分枝桿菌

呈紅色，背景呈藍(lán)色第15頁(yè)/共8990頁(yè)形態(tài)學(xué)檢查用熒光染料金胺“O”染色，在熒光顯微鏡下菌體呈橘黃色第16頁(yè)/共8990頁(yè)涂片鏡檢的報(bào)告方式半定量報(bào)告石炭酸復(fù)紅染色：抗酸桿菌（1000×）熒光染色：抗酸桿菌（450×）未找到抗酸菌可疑抗酸桿菌；再送標(biāo)本檢測(cè)01～2/300視野01～2/70視野1＋1～9/100視野2～18/50視野2＋1～9/10視野4～36/10視野3＋1～9/視野4～36/視野4＋>9/視野第17頁(yè)/共8990頁(yè)>36/視野用PCR法快速診斷MTB感染PCR法檢測(cè)DNA特異性更強(qiáng)，敏感性更高PCR須按法規(guī)要求規(guī)范操作，應(yīng)防止標(biāo)本污染出現(xiàn)假性結(jié)果第18頁(yè)/共8990頁(yè)核酸檢測(cè)三、微生物學(xué)檢驗(yàn)（四）分離培養(yǎng)與鑒定······1.

培養(yǎng)特性專性需氧3％～5％CO2能促進(jìn)其生長(zhǎng)營(yíng)養(yǎng)要求高:須在含血清、卵黃、馬鈴薯、甘油以及含某些無(wú)機(jī)鹽類的特殊培養(yǎng)基上才能生長(zhǎng)良好。常用羅氏培養(yǎng)基最適生長(zhǎng)溫度為35～37℃，最適pH6.5～6.814～18h分裂1次，在固體培養(yǎng)基上2～5周才出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的菌落典型菌落為粗糙型，表面干燥呈顆粒狀，不透明，乳白色或淡黃色，如菜花樣第19頁(yè)/共8990頁(yè)2.分離培養(yǎng)第20頁(yè)/共8990頁(yè)標(biāo)本接種于選擇性培養(yǎng)基中(常用羅氏，所含的孔雀綠或青霉素可抑制雜菌生長(zhǎng))37℃，5％～10％CO2培養(yǎng)8周結(jié)核桿菌出現(xiàn)干燥呈顆粒狀、灰白色菌落涂片染色為抗酸陽(yáng)性第21頁(yè)/共8990頁(yè)Bactec

–TB

960快速培養(yǎng)系統(tǒng)第22頁(yè)/共8990頁(yè)3D-120型第23頁(yè)/共8990頁(yè)三、微生物學(xué)檢驗(yàn)第24頁(yè)/共8990頁(yè)（四）分離培養(yǎng)與鑒定3.菌種鑒定(1)

生化反應(yīng)噬菌體鑒定法分子生物法菌種鑒定(4)高效液相色譜（HPLC）檢測(cè)分枝菌酸生化反應(yīng)--煩瑣、費(fèi)時(shí)（

4～8周）,影響因素多第25頁(yè)/共8990頁(yè)結(jié)核分枝桿菌不發(fā)酵糖類能產(chǎn)生觸酶人型MTB能合成煙酸，還原硝酸鹽，耐受噻吩-2-羧酸酰肼，而牛型MTB則不能人型和牛型的毒株中性紅試驗(yàn)均陽(yáng)性，無(wú)毒株則為陰性，并失去索狀生長(zhǎng)現(xiàn)象噬菌體鑒定法（PhaB）第26頁(yè)/共8990頁(yè)Wilson等于1997年建立的快速檢測(cè)新技術(shù)原理：是分枝桿菌噬菌體D29能感染活的分枝桿菌,未進(jìn)入感染菌體內(nèi)的噬菌體被隨后加入的殺毒劑滅活,已進(jìn)入菌體內(nèi)的噬菌體不受影響。噬菌體在感染菌體內(nèi)大量增殖,并將菌體裂解,釋放出的子代噬菌體可感染隨后加入的指示細(xì)胞,并將其裂解,在瓊脂平板上出現(xiàn)透亮的噬菌斑。分子生物法菌種鑒定第27頁(yè)/共8990頁(yè)P(yáng)CR限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析（PCR-RFLP）PCR單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析（PCR-SSCP）核酸探針核酸序列分析多重PCR高效液相色譜（HPLC）檢測(cè)分枝菌酸：由于不同種的分枝桿菌細(xì)胞壁中的分枝菌酸不同，所以利用HPLC檢測(cè)分枝菌酸可鑒定菌種。第28頁(yè)/共8990頁(yè)三、微生物學(xué)檢驗(yàn)第29頁(yè)/共8990頁(yè)（五） 免疫學(xué)診斷結(jié)核菌素試驗(yàn)結(jié)核分枝桿菌抗原檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌抗體檢測(cè)全血干擾素測(cè)定法結(jié)核菌素試驗(yàn)針對(duì)舊結(jié)核菌素(OT)與結(jié)核菌素純蛋白衍生物

(PPD)兩種菌體蛋白原理：當(dāng)將蛋白注入皮內(nèi)后，如受試者已感染結(jié)核桿菌，則結(jié)核菌素與致敏淋巴細(xì)胞特異性結(jié)合，在局部釋放淋巴因子，形成遲發(fā)性超敏反應(yīng)性炎癥，若受試者未感染MTB則無(wú)反應(yīng)。第30頁(yè)/共8990頁(yè)結(jié)核分枝桿菌抗原檢測(cè)第31頁(yè)/共8990頁(yè)用ELISA方法在血清中檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌抗原-結(jié)核菌外分泌特異性抗原(externalsecreted

specific

antigen)濃度。任何體液如血液、痰液、脊髓液、尿液和各式組織萃取液等體液可用于檢測(cè)特異蛋白抗原。結(jié)核抗體第32頁(yè)/共8990頁(yè)作為活動(dòng)性MTB感染的快速診斷方法之一比傳統(tǒng)的痰涂片抗酸染色、MTB培養(yǎng)等方法簡(jiǎn)便、快速、敏感性高，但存在一定的假陽(yáng)性。近年，膠體金、蛋白芯片檢查結(jié)核桿菌IgG抗體抗體，特別是后者，針對(duì)三種抗原（脂阿拉伯甘露糖、38K

Da和16K

Da蛋白質(zhì)抗原），其靈敏度和特異性均有所提高。全血干擾素測(cè)定法原理：當(dāng)全血與PPD和對(duì)照抗原（植物血凝素）共同孵育后，致敏的淋巴細(xì)胞可分泌IFN-γ，通過(guò)檢測(cè)IFN-γ的含量來(lái)鑒定菌種。2004年，Quantiferon-TB

Goldassay問(wèn)世，應(yīng)用結(jié)核分枝桿菌RD1區(qū)域編碼的期分泌抗原靶（ESAT）和培養(yǎng)濾液蛋白（CFP-10）特異抗原刺激細(xì)胞檢測(cè)。近來(lái)ESAT/CFP-10融合蛋白-ELISPOT用于診斷活動(dòng)性結(jié)核病，準(zhǔn)確、靈敏、特異、快速。結(jié)果與結(jié)核菌素試驗(yàn)相當(dāng)，干擾因素小。第33頁(yè)/共8990頁(yè)（六）藥物敏感性試驗(yàn)將純培養(yǎng)物菌懸液，接種含各種濃度藥物的固體培養(yǎng)基上，同時(shí)做不含藥物的對(duì)照組。經(jīng)過(guò)培養(yǎng)，含有藥物的培養(yǎng)基上菌落數(shù)目是對(duì)照組的75％以上，則認(rèn)為該菌對(duì)該藥物濃度為完全耐藥，如無(wú)菌落生長(zhǎng)則為敏感。第34頁(yè)/共8990頁(yè)三、微生物檢驗(yàn)第二節(jié) 非結(jié)核分枝桿菌第35頁(yè)/共8990頁(yè)一、概述與分類二、臨床意義三、微生物學(xué)檢驗(yàn)一、概述與分類第36頁(yè)/共8990頁(yè)非結(jié)核分枝桿菌（ＮontuberculosisMycobactericum，NTM）

:指結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群(結(jié)核分枝桿菌、牛分枝桿菌、非洲分枝桿菌、坎納分枝桿菌和田鼠分枝桿菌) 和麻風(fēng)分枝桿菌以外的其他分枝桿菌。NTM種類眾多，現(xiàn)已被鑒定的有150余種,包括專性寄生菌、腐生菌和中間型。第37頁(yè)/共8990頁(yè)國(guó)際分枝桿菌分類研究組（IWGMT）分為三類，即緩慢生長(zhǎng)菌、快速生長(zhǎng)菌和不能培養(yǎng)菌三種類型。Runyon按細(xì)菌產(chǎn)色素和生長(zhǎng)速度將臨床重要分枝桿菌分為RunyonⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ群概

述Runyon

分類法第38頁(yè)/共8990頁(yè)Ⅰ群———光產(chǎn)色菌,如猿猴分枝桿菌、堪薩斯分枝桿菌、海分枝桿菌;Ⅱ群———暗產(chǎn)色菌,如蘇加分枝桿菌、蟾蜍分枝桿菌、瘰疬分枝桿菌、戈登分枝桿菌;Ⅲ群———不產(chǎn)色菌,如鳥(niǎo)分枝桿菌復(fù)合群(M1aviumcomplex

,MAC) 、瑪爾摩分枝桿菌、土地分枝桿菌、潰瘍分枝桿菌、嗜血分枝桿菌;Ⅳ群———快生長(zhǎng)菌,如偶發(fā)分枝桿菌、龜分枝桿菌、膿腫分枝桿菌。二、臨床意義第39頁(yè)/共8990頁(yè)迄今為止已發(fā)現(xiàn)NTM有150余種，其中約

1/3與人類疾病有關(guān)。條件致病菌毒力低于結(jié)核分枝桿菌自然界中廣泛存在可以在人體某些部位定植結(jié)核病和NTM感染的治療不同為何要關(guān)注NTM？自然界中廣泛存在，如水、土壤和氣溶膠，可導(dǎo)致免疫力低下的患者感染。近年來(lái)，因手術(shù)器械、注射器具及醫(yī)療用水等滅菌不合格、使用不規(guī)范造成患者手術(shù)切口、注射部位NTM感染暴發(fā)事件。如：廣東省某中心衛(wèi)生院剖宮產(chǎn)患者手術(shù)切口感染事件。該事件是由于手術(shù)器械滅菌不合格導(dǎo)致的手術(shù)切口感染，病原菌為快速生長(zhǎng)型分枝桿菌。第40頁(yè)/共8990頁(yè)第41頁(yè)/共8990頁(yè)警鐘長(zhǎng)鳴——NTM潛在殺手？第42頁(yè)/共8990頁(yè)衛(wèi)生部關(guān)于嚴(yán)重醫(yī)院感染事件通報(bào)—關(guān)于深圳市某醫(yī)院發(fā)生嚴(yán)重醫(yī)院感染事件的通報(bào)衛(wèi)生部關(guān)于安徽省某立醫(yī)院惡性醫(yī)療損害事件的通報(bào)關(guān)于西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院某醫(yī)院發(fā)生嚴(yán)重醫(yī)院感染事件的通報(bào)關(guān)于山西省太原某中心醫(yī)院血液透析感染事件的通報(bào)關(guān)于天津市薊縣某院新生兒醫(yī)院感染事件的通報(bào)衛(wèi)生部關(guān)于安徽省某縣醫(yī)院血液透析患者感染丙肝事件的通報(bào)關(guān)于廣東省汕頭市潮陽(yáng)區(qū)某中心衛(wèi)生院剖宮產(chǎn)患者手術(shù)切口感染事件的通報(bào)———摘自江蘇省衛(wèi)生廳《嚴(yán)重醫(yī)院感染事件通報(bào)與處罰規(guī)定選編》（2010年7月）光產(chǎn)色分枝桿菌（RunyonⅠ群）堪薩斯分枝桿菌（M.kansaii）：能引起肺內(nèi)和肺外類似結(jié)核樣的病變海分枝桿菌(M.marinum)：存在于淡水或海水。除可引起冷血?jiǎng)游铮ㄈ玺~(yú)）感染外，亦能引起人的感染。通過(guò)皮膚微小創(chuàng)口侵入皮膚而引起所謂的“游泳池肉芽腫”。漁業(yè)工人可經(jīng)受損皮膚遭受感染猿分枝桿菌（M.simiae）：首先從猿分離到此菌，形態(tài)同結(jié)核分枝桿菌，可感染人類第43頁(yè)/共8990頁(yè)暗產(chǎn)色分枝桿菌（RunyonⅡ群）第44頁(yè)/共8990頁(yè)瘰疬分枝桿菌（M.scrofulaceum）：可引起人的淋巴結(jié)炎或肺部感染。斯氏分枝桿菌(M.szulgai)：可引起成人肺部的慢性感染。不產(chǎn)色分枝桿菌（RunyonⅢ群）第45頁(yè)/共8990頁(yè)鳥(niǎo)-胞內(nèi)分枝桿菌復(fù)合體(M.avium-intracellularecomplex,MACor

MAIC)：鳥(niǎo)分枝桿菌和胞內(nèi)分枝桿菌有許多相似之處，故合起來(lái)稱之為MAC。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)HIV感染和AIDS患者易感染MAC。潰瘍分枝桿菌（M.ulcerans）：對(duì)人可通過(guò)創(chuàng)傷局部感染，常在四肢伸側(cè)形成無(wú)痛性潰瘍，叫做

Buruli潰瘍，緩慢愈合或出現(xiàn)繼發(fā)感染。蟾蜍分枝桿菌（M.xenopi）：是蟾蜍肉芽腫的病原菌，對(duì)人則多引起老年男性的慢性肺部感染。快速生長(zhǎng)分枝桿菌（RunyonⅣ群）第46頁(yè)/共8990頁(yè)⑴偶發(fā)分枝桿菌（M.fortuitum）：可引起人的局部感染或肺部感染，對(duì)現(xiàn)有的抗結(jié)核藥物均耐藥。⑵龜分枝桿菌（M.chelonei）：該菌在引起免疫力低下患者感染的快速生長(zhǎng)非結(jié)核分枝桿菌中最常見(jiàn)，外傷引起的軟組織病變及手術(shù)后繼發(fā)感染，亦可引起肺部感染。⑶膿腫分枝桿菌（M.abscessus）：以前曾作為龜分枝桿菌膿腫亞種。常存在于自來(lái)水中，引起注射后醫(yī)院感染的暴發(fā)。該菌也可散發(fā)引起豐胸術(shù)后、中心靜脈插管、動(dòng)脈插管以及透析導(dǎo)管所致的菌血癥。另外，該菌可導(dǎo)致：近90%由快速生長(zhǎng)分枝桿菌引起的肺部感染，外傷后感染以及超過(guò)90%鼓膜切開(kāi)管植入術(shù)后耳炎。與龜分枝桿菌相似，該菌引起免疫力缺陷患者播散性皮下感染。膿腫分枝桿菌引起的注射后感染第47頁(yè)/共8990頁(yè)膿腫分枝桿菌引起的注射后感染第48頁(yè)/共8990頁(yè)膿腫分枝桿菌引起的注射后感染第49頁(yè)/共8990頁(yè)難于愈合的傷口第50頁(yè)/共8990頁(yè)潮濕治療室曾導(dǎo)致肌肉注射感染第51頁(yè)/共8990頁(yè)某醫(yī)院手術(shù)切口分枝桿菌感染暴發(fā)（廣東深圳，1998）表現(xiàn)：1998年4月1日～5月31日共手術(shù)292例，4月22日～7月14日發(fā)生切口感染166例。潛伏期為20～30天。切口部位開(kāi)始為小結(jié)節(jié)，繼而化膿成竇道，有線頭挾出。清創(chuàng)換藥后創(chuàng)面清潔但不愈合，或愈合后又復(fù)發(fā)，并有淋巴結(jié)炎傾向。調(diào)查：20份切口分泌物標(biāo)本培養(yǎng)出龜分枝桿菌（膿腫亞型）。醫(yī)院環(huán)境和無(wú)菌物品細(xì)菌學(xué)檢查合格。使用中和未啟用的戊二醛半小時(shí)不能殺滅金葡菌、1小時(shí)不能殺滅龜分枝桿菌，測(cè)濃度為0.137%。結(jié)論：戊二醛濃度錯(cuò)配導(dǎo)致手術(shù)器械分枝桿菌污染，從而引起切口感染。深圳孕婦感染事件開(kāi)庭：第52頁(yè)/共89409頁(yè)6人索賠2000多萬(wàn)元肌注部位偶發(fā)分枝桿菌感染暴發(fā)第53頁(yè)/共8990頁(yè)（福建南平，1998）表現(xiàn)：1998年8月～11月某診所59例患者發(fā)生肌注部位感染，潛伏期2～

80天。起初肌注無(wú)明顯不適，少數(shù)針孔持續(xù)疼痛，多數(shù)在洗澡或接通知后撫摸發(fā)現(xiàn)注射處腫塊長(zhǎng)期不消。15天約長(zhǎng)0.5～1.0cm，后期硬塊出現(xiàn)波動(dòng)感，壓痛明顯，出現(xiàn)水樣膿液。繼發(fā)腹股溝淋巴結(jié)炎4例。膿液或病理標(biāo)本43份中33份檢出偶發(fā)分枝桿菌。調(diào)查：檢查27種藥物、一次性注射器和輸液器均合格；其他診所肌注者無(wú)發(fā)??；診所衛(wèi)生條件差，1個(gè)水龍頭，自來(lái)水直接從河中抽取，未消毒；玻璃注射器15枝，煮沸消毒，時(shí)間憑經(jīng)驗(yàn)，每天消毒1次；患者多時(shí)使用同種藥物者換針頭不換注射器。結(jié)論：污染注射器是引起感染暴發(fā)的主要原因，細(xì)菌則可能來(lái)自河水。第54頁(yè)/共8990頁(yè)（一）標(biāo)本采集見(jiàn)結(jié)核桿菌部分（二）涂片抗酸染色本菌為抗酸桿菌，但較結(jié)核分枝桿菌短而粗，大小約1～8μm×0.3～0.5μm，抗酸染色著色均勻，呈束狀或團(tuán)狀排列（三）分離培養(yǎng)與鑒定第55頁(yè)/共8990頁(yè)三、微生物學(xué)檢驗(yàn)（三）分離培養(yǎng)與鑒定⑴光產(chǎn)色分枝桿菌（RunyonⅠ群）菌落特點(diǎn)是在暗處一般不產(chǎn)生或僅產(chǎn)生少量色素，光照1h后能在48h內(nèi)轉(zhuǎn)為黃色或橘黃色需在營(yíng)養(yǎng)復(fù)雜的培養(yǎng)基上才能生長(zhǎng)，生長(zhǎng)緩慢，菌落光滑有時(shí)可形成索狀生長(zhǎng)第56頁(yè)/共8990頁(yè)三、微生物學(xué)檢驗(yàn)（三）分離培養(yǎng)與鑒定（2）暗產(chǎn)色分枝桿菌（RunyonⅡ群）無(wú)論有光或無(wú)光均能產(chǎn)生色素，呈黃色或橘黃色生長(zhǎng)緩慢，菌落為光滑型第57頁(yè)/共8990頁(yè)三、微生物學(xué)檢驗(yàn)（三）分離培養(yǎng)與鑒定⑶不產(chǎn)色分枝桿菌（RunyonⅢ群）缺乏β-胡蘿卜素，故在光照和暗處均不能產(chǎn)生色素第58頁(yè)/共8990頁(yè)三、微生物學(xué)檢驗(yàn)（三）分離培養(yǎng)與鑒定⑷快速生長(zhǎng)分枝桿菌（RunyonⅣ群）在普通培養(yǎng)基上即可生長(zhǎng)最適生長(zhǎng)溫度為25～45℃生長(zhǎng)速度快，3～6d即可形成菌落第59頁(yè)/共8990頁(yè)三、微生物學(xué)檢驗(yàn)微需氧培養(yǎng)4天第60頁(yè)/共8990頁(yè)三、微生物學(xué)檢驗(yàn)第61頁(yè)/共8990頁(yè)（四）其他鑒定方法NTM非培養(yǎng)方法的鑒定與結(jié)核分枝桿菌類似，可參考結(jié)核桿菌部分。NTM的實(shí)驗(yàn)室診斷可跟據(jù)細(xì)菌生長(zhǎng)速度、色素等表型特征進(jìn)行初步鑒定，再進(jìn)行分子診斷，后者應(yīng)用越來(lái)越廣泛。第三節(jié) 麻風(fēng)分枝桿菌第62頁(yè)/共8990頁(yè)麻風(fēng)病的病原菌，麻風(fēng)是一種慢性傳染病，主要表現(xiàn)為皮膚、黏膜和神經(jīng)末梢的損害。晚期可侵犯深部組織和器官，形成肉芽腫。根據(jù)臨床表現(xiàn)、免疫病理變化和細(xì)菌檢查結(jié)果等將麻風(fēng)分為瘤型、結(jié)核樣型和界限類綜合征等三種病型。第63頁(yè)/共8990頁(yè)麻風(fēng)分枝桿菌（M.leprae）第64頁(yè)/共8990頁(yè)麻風(fēng)病的病原菌1873年挪威學(xué)者Armauer

Hansen從麻風(fēng)患者皮膚結(jié)節(jié)中發(fā)現(xiàn)，又名Hansen桿菌。革蘭染色陽(yáng)性具有抗酸性一、臨床意義第65頁(yè)/共8990頁(yè)WHO自1995年始對(duì)麻風(fēng)患者實(shí)施免費(fèi)治療麻風(fēng)病發(fā)病率直線下降2008年全球新發(fā)現(xiàn)麻風(fēng)患者249000例中國(guó)現(xiàn)癥麻風(fēng)病患者由解放初期的50多萬(wàn)人減少至目前的6000余人2001～2008年,我國(guó)每年新發(fā)現(xiàn)患者1400～1700例二、微生物學(xué)檢驗(yàn)第66頁(yè)/共8990頁(yè)（一）基本特性本菌為抗酸桿菌，較結(jié)核分枝桿菌短而粗，大小約1～8μm×0.3～0.5μm，抗酸染色著色均勻，

呈束狀或團(tuán)狀排列。麻風(fēng)分枝桿菌為典型的胞內(nèi)寄生菌，有麻風(fēng)分枝桿菌存在的細(xì)胞胞漿呈泡沫狀，稱為麻風(fēng)細(xì)胞。用藥后細(xì)菌可斷裂為顆粒狀、鏈桿狀等，著色不均勻，叫做不完整菌。革蘭染色陽(yáng)性，無(wú)鞭毛、無(wú)莢膜、無(wú)芽胞。二、微生物學(xué)檢驗(yàn)第67頁(yè)/共8990頁(yè)（二）標(biāo)本采集通常自眶上、顴下、下頜、耳廓及鼻腔黏膜等數(shù)處采取標(biāo)本二、微生物學(xué)檢驗(yàn)第68頁(yè)/共8990頁(yè)（三）標(biāo)本直接檢查

1.顯微鏡檢查用刀刮取組織液做涂片，火焰固定，抗酸染色、鏡檢，麻風(fēng)分枝桿菌呈紅色，細(xì)胞呈藍(lán)色。金胺“O”染色、熒光顯微鏡檢查，可提高陽(yáng)性率麻風(fēng)分枝桿菌多呈束狀或成團(tuán)聚集，結(jié)核分枝桿菌多散在，偶有聚集。麻風(fēng)分枝桿菌菌體粗直，兩端尖細(xì)，而結(jié)核分枝桿菌則細(xì)長(zhǎng)略彎曲，且有分枝現(xiàn)象。在鏡下可見(jiàn)大量麻風(fēng)細(xì)胞。2.活組織切片抗酸染色及病理學(xué)檢查。第69頁(yè)/共8990頁(yè)二、微生物學(xué)檢驗(yàn)第70頁(yè)/共8990頁(yè)（四）其他診斷方法該菌目前尚不能人工培養(yǎng)近年采用PCR技術(shù)檢測(cè)麻風(fēng)菌基因、運(yùn)用新發(fā)現(xiàn)抗原血清學(xué)與T細(xì)胞試驗(yàn)可以對(duì)麻風(fēng)病進(jìn)行早期診斷。第四節(jié) 放線菌屬第71頁(yè)/共8990頁(yè)放線菌（Actinomyces）能引起牛和人的疾病

1891年，Wolff和Israel應(yīng)用厭氧培養(yǎng)法，首先將人型放線菌培養(yǎng)成功。因菌落生長(zhǎng)呈放射狀而得名。一、分

類第72頁(yè)/共8990頁(yè)放線菌是引起人放線菌?。ˋctinomycosis）的病原菌，屬于內(nèi)源性感染。目前發(fā)現(xiàn)衣氏放線菌（A.israelii）、內(nèi)氏放線菌（A.naeslundii）粘放線菌(A.viscous)、齲齒放線菌（A.odontolyticus）及丙酸蛛網(wǎng)菌。（Arachniapropionica）5種可引起人的放線菌病，其中衣氏放線菌最多見(jiàn)。牛型放線菌（A.bovis）是本屬的典型菌種，主要引起牛的放線菌病。放線菌目（Actinomycetales）放線菌屬（Actinomyces）諾卡菌屬（Nocardia）分枝桿菌屬（Mycobacterium）第73頁(yè)/共8990頁(yè)分類（1）含分枝菌酸諾卡菌屬

分枝桿菌屬棒狀桿菌屬（2）不含分枝菌酸放線菌屬二、臨床意義第74頁(yè)/共8990頁(yè)放線菌：正常菌群所致疾?。簝?nèi)源性感染(放線菌病)：軟組織肉芽腫性炎癥(慢性,無(wú)痛,多發(fā)性瘺管,排出硫磺樣顆粒。)齲齒和牙周炎（一）基本特性·G+、非抗酸性絲狀菌·培養(yǎng)困難，厭氧或微需氧·硫磺樣顆粒（菌落）壓片或組織切片，顯微鏡下可見(jiàn)顆粒呈菊花狀。第75頁(yè)/共8990頁(yè)三、微生物學(xué)檢驗(yàn)硫磺樣顆粒(sulfur

granule)第76頁(yè)/共8990頁(yè)（二）分離培養(yǎng)培養(yǎng)：厭氧或微需氧氣體環(huán)境：5％CO2營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基：腦心浸液瓊脂平板溫度與時(shí)間：37℃，24～48h菌落:灰白色蜘蛛狀、不規(guī)則結(jié)節(jié)狀或臼齒狀菌落,初分離(粗糙)生化特性:溶血(-)葡萄糖(+)甘露醇(+)吲哚(-)觸酶試驗(yàn)(-)【黏液放線菌除外】第77頁(yè)/共8990頁(yè)三、微生物學(xué)檢驗(yàn)放線菌菌落特點(diǎn)第78頁(yè)/共8990頁(yè)第五節(jié) 諾卡菌屬第79頁(yè)/共8990頁(yè)需氧菌含分枝菌酸分布 土壤中，多數(shù)不致病菌致病菌星形諾卡菌（N.

asteroides）巴西諾卡菌（N.

brasiliensis）一、概

述第80頁(yè)/共8990頁(yè)諾卡菌屬（Nocardia）革蘭染色不定，一般認(rèn)為該菌為革蘭陽(yáng)性桿菌有細(xì)長(zhǎng)的分枝菌絲，生長(zhǎng)于表面并伸入瓊脂培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的某個(gè)時(shí)期有弱抗酸性形態(tài)與放線菌相似，但菌絲末端不膨大二、分類第81頁(yè)/共8990頁(yè)該屬包括至少包括22個(gè)菌種醫(yī)學(xué)上常見(jiàn)的有13個(gè)種：膿腫諾卡菌、非洲諾卡菌、星形卡菌、巴西諾卡菌、短鏈

諾卡菌復(fù)合群、肉色諾卡菌、鼻疽諾卡菌、新星諾卡菌、豚鼠耳炎諾卡菌、少食諾卡

菌、假巴西諾卡菌、南非諾卡菌、老兵諾

卡菌。三、臨床意義第