G試驗侵襲性真菌病的輔助診斷方法

內(nèi)容目錄一、真菌感染概述二、真菌與

葡聚糖一三、、鱟真試驗菌與感G試染驗概四、G試驗——臨床意義五、“生物探針”介紹六、“生物探針”操作流程七、“生物探針”的臨床比對八、G試驗的影響因素目前一頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點

湛江安度斯生物有限公司是查爾斯河公司設(shè)在中國的子公司，是中國細(xì)菌內(nèi)毒素檢測試劑的最大供應(yīng)商，也是中國細(xì)菌內(nèi)毒素檢測領(lǐng)域的技術(shù)領(lǐng)導(dǎo)者和創(chuàng)新先鋒；世界著名的美洲鱟試劑（LAL）生產(chǎn)企業(yè)——美國CR恩度斯弗公司（Charles

River

Endosafe,Inc.），也是查爾斯河實驗室公司的子公司湛江安度斯的簡介目前二頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點Charles

River

Laboratories

作為全球最大的實驗動物公司，Charles

RiverLaboratories一直是全球?qū)嶒瀯游锷虡I(yè)化繁育和市場供應(yīng)的領(lǐng)導(dǎo)者，擁有分布在北美、歐

洲和日本的15個分設(shè)施和遍布全球的銷售網(wǎng)

絡(luò)；已成為一個生物醫(yī)學(xué)前臨床產(chǎn)品和服務(wù)的主要

供應(yīng)商。目前三頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點庫珀博士

C

R

Endosafe（恩度斯弗）公司是美國著名三大鱟試劑企業(yè)之一,有國際知名權(quán)威學(xué)者詹母斯弗.庫珀博士(Dr.Jammes

F.Cooper)創(chuàng)建。庫珀博士是細(xì)菌內(nèi)毒素檢查研究領(lǐng)域的先驅(qū)。1971年他與Lein及Banger等人提出以鱟實驗法檢查熱源，并率先證明了鱟實驗法作為注射藥品熱源檢查的敏感方法的價值。1972年他協(xié)助美國(The

parentral

Drug

Association)的鱟試劑他一直主持著美國非經(jīng)腸道藥物協(xié)會(Theparenteral

Drug

Associatoin)的鱟實驗應(yīng)用促進(jìn)工作,以及每年一屆的美國南卡羅納州查爾頓的鱟實驗學(xué)術(shù)會議。目前四頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點

庫珀博士創(chuàng)建的Endosafe

公司現(xiàn)以成為美國鱟試劑(LAL)市場最大的供應(yīng)商.該公司的鱟試劑以其良好的穩(wěn)定性,廣泛的適用性

以及優(yōu)越的抗干擾性能享譽國際醫(yī)藥工業(yè)界.目前五頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點一、真菌感染概述真菌感染：

真菌感染在通常情況下我們最常見的是表皮的感染，例如頭癬、體癬、甲癬等，由于侵犯的部位大都表淺，不會導(dǎo)致嚴(yán)重問題，因而叫淺部真菌感染；深部真菌感染則是真菌突破人體天然屏障導(dǎo)致組織臟器的感染。6目前六頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點美國死于感染性疾病的十大原因感染類型死亡人數(shù)感染類型死亡人數(shù)1呼吸道56,

966呼吸道87,1812敗血癥9438敗血癥22,3963腎臟/泌尿道8006HIV/AIDS16,5244心臟2486腎臟/泌尿道13,4135肺結(jié)核2333心臟55776細(xì)菌性腦膜炎1402肝膽管45967胃腸道1377真菌23708肝膽管1277結(jié)核12599圍產(chǎn)期1305胃腸道105310真菌828圍產(chǎn)期8201980

1997真菌感染的死亡率上升了3.4倍（死亡率：0.7~2.4

/100,000）7目前七頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點EORTC/MSG原稱侵襲性真菌感染（IFI），修訂后改稱IFD；

是指真菌侵入人體，在組織、器官或血液中生長、繁殖，并導(dǎo)致炎癥反應(yīng)及組織損傷的疾病。是真菌感染致死的重要原因侵襲性真菌病(Invasive

FungalDisease

,IFD)8目前八頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點侵襲性真菌病已變得越來越常見9目前九頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點侵襲性真菌感染的診斷標(biāo)準(zhǔn)G試驗可作為擬診病例的微生物學(xué)標(biāo)志10目前十頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點主要可引發(fā)侵襲性真菌病的疾病腫瘤類：胃癌，肝癌，肝內(nèi)膽管癌，肺癌，多發(fā)性骨髓瘤，白血病，惡性淋巴瘤11目前十一頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點二、真菌與

葡聚糖6/17/2023121.某些真菌的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)目前十二頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點2.

細(xì)胞壁含有

葡聚糖組分的真菌：是導(dǎo)致侵襲性真菌病(IFD)的常見真菌。細(xì)胞壁有

葡聚糖組分6/17/202313目前十三頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點這類真菌有：念珠菌曲霉菌耶氏肺孢菌鐮刀酶隱球菌接合菌.......6/17/202314目前十四頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點北京301醫(yī)院尸檢結(jié)果（77～97年）肺真菌病發(fā)生率3.7％

(38/1027

)隱球菌病、接合菌病占真菌病比例不高15目前十五頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點當(dāng)人體深部受這類真菌感染時，真菌在代謝過程會不斷釋放出葡聚糖。檢查患者的血液（血漿或血清），會發(fā)現(xiàn)葡聚糖含量明顯高于非感染者。因此，葡聚糖可作為具有這種細(xì)胞結(jié)構(gòu)的真菌感染標(biāo)識物。6/17/202316目前十六頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點三、鱟試驗與G試驗1.鱟（Hòu，后）試驗6/17/202317目前十七頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點鱟是地球上最古老的海洋生物之一，已有三億多年的歷史，人們稱它為“活化石”。雌雄6/17/202318目前十八頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點研究發(fā)現(xiàn)，鱟的循環(huán)細(xì)胞（阿米巴細(xì)胞）中含有一種特殊的凝固酶原。這種凝固酶原可以被自然界廣泛存在的兩種物質(zhì)激活為凝固酶，從而導(dǎo)致一系列的生化反應(yīng)。這兩種物質(zhì)就是脂多糖(Lipopolysaccharide,

LPS)和(1-3)-

-D葡聚糖。6/17/202319目前十九頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點人們利用鱟的阿米巴細(xì)胞溶胞物制備成了鱟試劑（LAL或TAL）。通常稱使用鱟試劑檢測脂多糖（LPS）或

-葡聚糖（

-G）的試驗為鱟試驗（LAL

Test

or

TALTest）。6/17/202320目前二十頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點2.

鱟試驗反應(yīng)機理21目前二十一頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點3.鱟試驗的應(yīng)用應(yīng)用I：細(xì)菌內(nèi)毒素檢查(Bacterial

Endotoxin

Test,

BET)6/17/202322目前二十二頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點研究發(fā)現(xiàn)，革蘭氏陰性細(xì)菌的細(xì)胞壁都含有一種叫內(nèi)毒素(Endotoxin)的組分。6/17/202323目前二十三頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點內(nèi)毒素是能夠引起哺乳動物原反應(yīng)的主要熱原物質(zhì)。革蘭氏陰性細(xì)菌在新陳代謝過程不斷地向環(huán)境釋放內(nèi)毒素，污染藥品和醫(yī)療器械。因此注射藥品和醫(yī)療器械都要求必須作細(xì)菌內(nèi)毒素檢查（BET）。6/17/202324目前二十四頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點應(yīng)用II：革蘭氏陰性菌脂多糖檢測6/17/202325目前二十五頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點細(xì)菌內(nèi)毒素的化學(xué)成分是脂多糖。當(dāng)人體深部感染革蘭氏陰性菌時，細(xì)菌會在體內(nèi)不斷釋放內(nèi)毒素（脂多糖）。檢查患者的血液（血漿）、腹水、尿液及腦脊液，會發(fā)現(xiàn)脂多糖明顯高于非感染者。脂多糖檢測對敗血癥、嚴(yán)重器官衰竭的快速輔助診斷有臨床價值。6/17/202326目前二十六頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點應(yīng)用III：真菌(1-3)--D葡聚糖檢測6/17/202327目前二十七頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點醫(yī)學(xué)上通常把用于檢測真菌

葡聚糖的鱟試驗稱為G試驗。這是取葡聚糖的英文名稱Glucan的首字母來命名該試驗。6/17/202328目前二十八頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點需要指出的是，隱球菌的細(xì)胞壁雖然有

葡聚糖組分，在隱球菌感染患者的血液中卻檢測不出葡聚糖異常。這可能與隱球菌具有特殊的細(xì)胞被膜有關(guān)。因此G試驗不適合對隱球菌感染的檢測。6/17/202329目前二十九頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點四、G試驗——臨床意義30目前三十頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點G試驗的臨床意義31目前三十一頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點G試驗的臨床意義32目前三十二頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點33目前三十三頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點34目前三十四頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點G試驗應(yīng)用科室35目前三十五頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點五、“生物探針”介紹36目前三十六頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點“生物探針”介紹37目前三十七頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點“生物探針”介紹38目前三十八頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點“生物探針”介紹39目前三十九頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點“生物探針”介紹40目前四十頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點“生物探針”功能快速定量的臨床檢測方法，幫助臨床醫(yī)生早期診斷目前常規(guī)方法難以判斷的侵襲性真菌感染、革蘭氏陰性菌感染，便于對感染的早期診斷、早期治療及對治療的療效判定?？蓹z測標(biāo)本：血漿、血清、尿液、腹水、腦脊液等41目前四十一頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點六、“生物探針”操作流程42目前四十二頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點“生物探針”操作流程43目前四十三頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點“生物探針”操作流程44目前四十四頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點“生物探針”操作流程45目前四十五頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點“生物探針”操作流程46目前四十六頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點“生物探針”操作流程49目前四十九頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點“生物探針”操作流程數(shù)據(jù)可接入LIS系統(tǒng)等50目前五十頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點侵襲性真菌感染的臨床檢測方法對比51目前五十一頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點產(chǎn)品特點靈敏度高快速檢測方法嚴(yán)謹(jǐn)準(zhǔn)確性高特異性好臨床符合率高52目前五十二頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點七、“生物探針”的臨床比對J廠家的-G試劑、LPS試劑均無特異性53目前五十三頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點最低檢測限最低濃度重復(fù)性10pg/ml廠商

安度斯

最低檢測限編號檢測結(jié)果(pg/ml)陰性(pg/ml)<1.3檢測日期3.6?110.3?210.1?311.0?49.8?59.8?610.8?710.1?810.0?99.6?1010.3?1110.0?129.8?1310.7?149.8?1512.4?1610.3?179.7?189.6?199.4?209.9?219.6CV=6.85%目前五十四頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點批內(nèi)精密度目前五十五頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點批間精密度目前五十六頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點“生物探針”的臨床比對評價結(jié)論：安度斯產(chǎn)品的綜合性能具有明顯優(yōu)勢。57目前五十七頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點八、G試驗的影響因素6/17/202358目前五十八頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點1.檢測試劑的靈敏度1.1

葡聚糖的量值與標(biāo)準(zhǔn)品6/17/202359目前五十九頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點6/17/202360目前G試驗中葡聚糖采用的單位為重量單位“pg”。pg是一個非常非常微量的單位。因此G試驗是一項非常靈敏的生物檢測。當(dāng)然，越是靈敏精確的檢測，越容易受到干擾。目前六十頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點–

目前

葡聚糖沒有公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)！–沒有國際標(biāo)準(zhǔn)品，沒有國家標(biāo)準(zhǔn)品，也沒有公認(rèn)的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)品，只有企業(yè)的標(biāo)準(zhǔn)品（質(zhì)控品）6/17/202361目前六十一頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點–各企業(yè)的葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)品的來源不一。有的來自茯苓多糖，有的來自香菇多糖，有的來自海藻多糖。不同來源的

葡聚糖對鱟試劑的活性不同。–

各企業(yè)的

葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)品效價不一。你的1pg可能相當(dāng)我的10pg。相互之間無可比性。6/17/202362目前六十二頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點–

無統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)品導(dǎo)致不同廠家試劑盒有不同的參考值。有的是

10pg為陽性，有的是

100pg為陽性。–對參考值的表示各廠家也有所不同。有的以全血含量來表示，有的以檢測濃度來表示。6/17/202363目前六十三頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點1.2試驗器具對G試驗有重要的影響！葡聚糖是自然界廣泛存在的一種物質(zhì)，極容易污染到試驗器具。葡聚糖是一種非常穩(wěn)定的物質(zhì)，通常的蒸煮高壓、輻照等滅菌手段不能徹底破壞

葡聚糖。很難找到

真正意義的無

葡聚糖的器具。6/17/202364目前六十四頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點–G試驗使用到的實驗器具：采血針采血管（瓶）反應(yīng)試管移液器具（吸頭）最主要的污染來自采血管！6/17/202365目前六十五頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點重要建議最好使用廠家供應(yīng)的專用采血管（瓶）其次是用經(jīng)廠家檢測合格的采血管不能使用未經(jīng)檢測的實驗器具6/17/202366目前六十六頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點尊重科學(xué)，為患者負(fù)責(zé)！無效試驗是對患者最大的危害！6/17/202367目前六十七頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點2.試劑的生物特異性如前所述，G試驗的檢測試驗就是鱟試劑。鱟試劑可以對兩種物質(zhì)反應(yīng)，用于不同的用途。如下圖表示。檢測內(nèi)毒素/脂多糖用于革蘭氏陰性菌檢測鱟試劑檢測

葡聚糖（G試驗）用于真菌檢測6/17/202368目前六十八頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點在檢測試劑制備上，應(yīng)根據(jù)試劑的用途制備生物特異性強的檢測試劑，如：葡聚糖產(chǎn)生–用于檢測細(xì)菌脂多糖的試劑，不能對反應(yīng)。–

用于檢測真菌

葡聚糖的試劑，不能對脂多糖產(chǎn)生反應(yīng)。6/17/202369目前六十九頁\總數(shù)七十七頁\編于十三點遺憾的是，由于技術(shù)的原因，并不是所有廠家的試劑都具有生物特異性。有的試劑盒對LPS和

-G都反應(yīng)。有的試劑盒對非檢測對象低濃度時可能不反應(yīng)，較高濃度時會反應(yīng)。無生物特異性的試劑盒不能區(qū)分細(xì)菌感染和真菌感染，不具有臨床檢測價值