閃式提取法提取甘草酸的最佳工藝研究

閃式提取法提取甘草中甘草酸的最佳工藝研究于敏邵煒軍蘇瑾

佳木斯大學(xué)化學(xué)與藥學(xué)院摘要：目的采用閃式提取法探討提取甘草酸的最佳工藝。方法采用正交設(shè)計(jì)法，考察提取溶劑、浸泡時(shí)間、提取電壓和提取時(shí)間對(duì)甘草酸提取率的影響。結(jié)果最佳提取工藝為A3B2C2D1，即1﹪氨水，浸泡1.5h，電壓130V，提取時(shí)間45s。結(jié)論閃式提取具有節(jié)省時(shí)間、節(jié)能高效的優(yōu)點(diǎn)。關(guān)鍵詞：閃式提取；正交設(shè)計(jì)；甘草酸TheStudyoftheBestExtractConditionofGlycyrrhizicAcidbytheHerbalBlitzkriegExtractorYUMinSHAOWei-junTheCollegeofChemistryandPharmacologyofJiamusiUniversityAbstract:ObjectiveTodisussthebestextractconditionofglycyrrhizicacidbytheHerbalBlitzkriegExtractor.MethodsUsingtheorthogonaldesign,observedtheeffectofextractivesolvent,dippingtime,extractivevoltageandextractivetimeontheextractefficiencyof

glycyrrhizicacid.ResultsThebestextractioncondition:extractivesolvent1%hantshorn,dippingtime1.5h,extractivevoltage130V,extractivetime45s.ConclusionHerbalBlitzkriegExtractownstheadvantagesofsavingtime,workingandenergy.Keys:HerbalBlitzkriegExtract,orthogonaldesign,glycyrrhizicacid

甘草系豆科植物，素有“國(guó)老”之稱，善調(diào)藥性，甘草酸是甘草中主要生理活性成分，近年來(lái)臨床應(yīng)用表明甘草酸可以抑制乙肝病毒、感染細(xì)胞表面抗原的分泌，并能夠增強(qiáng)機(jī)體的免疫力等[1-2]。

目前對(duì)甘草酸的提取方法主要有滲漉法、熱回流法、超聲法、微波法等，本實(shí)驗(yàn)研究閃式提取器提取甘草酸的最佳條件。閃式提取器是劉延澤等參考動(dòng)物組織搗碎的原理發(fā)明的新型提取儀器，它的主要原理是在適當(dāng)?shù)娜軇┐嬖谙?，利用高速機(jī)械剪切力和攪拌力，迅速破壞植物細(xì)胞組織，使組織細(xì)胞內(nèi)部的化學(xué)成分（或有效成分）與溶劑充分接觸，使有效成分快速溶解轉(zhuǎn)移，在短時(shí)間內(nèi)達(dá)到內(nèi)外溶解平衡[3]。1儀器與試劑1.1儀器JHBC-50S閃式提取器(北京市金鼐科技發(fā)展有限公司)；高效液相色譜儀1100系列(Agilent公司)；LXJ-ⅡB型離心機(jī)(上海安亭科技儀器廠)；GZX-9140MBE電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠)；JA3003電子天平(上海分析儀器廠)。2.2試劑與藥品甘草（RadixGlycyrrhizae)；甘草酸單銨鹽(中國(guó)藥品生物制品檢定所，110731-200614)；硫酸(哈爾濱試劑化工廠)；正丁醇(天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司)；醋酸銨(上海新寶精細(xì)化工廠)；冰醋酸(天津市瑞金特化學(xué)制品有限公司)；甲醇(色譜純，天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所)。2實(shí)驗(yàn)方法2.1正交設(shè)計(jì)稱取甘草20g于溶劑中浸泡，采用閃式提取法進(jìn)行提取，過(guò)濾，濾液用1﹪的硫酸調(diào)pH值至3-4，放置24h，離心(10min，v=3000r/min),取沉淀，于60℃干燥至恒重，并精密稱定。采用L9(34)正交表進(jìn)行試驗(yàn)，以甘草酸的提取率為指標(biāo)，考察提取溶劑、浸泡時(shí)間、提取電壓、提取時(shí)間4個(gè)因素，優(yōu)選閃式提取甘草酸的最佳提取條件。因素水平表見(jiàn)表1。

表1因素水平表

水平A溶劑B浸泡時(shí)間(h)C電壓(V)D提取時(shí)間(s)10.1﹪氨水11204520.5﹪氨水1.51306031﹪氨水2140902.2甘草酸的含量測(cè)定2.2.1色譜條件[4]色譜柱型號(hào)：ZorbaxSBC18

(4.6mm×250mm)；流速：1.0ml/min；柱溫：30℃；流動(dòng)相：甲醇:0.2mol/L醋酸銨溶液：冰醋酸(67：33：1)；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)：250nm。2.2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密稱取甘草酸銨標(biāo)準(zhǔn)品1.3mg置于10ml的容量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻即可(每1ml含甘草酸銨對(duì)照品0.13mg/ml)。精密吸取1μL、3μL、5μL、7μL、10μL對(duì)照溶液進(jìn)樣，記錄峰面積，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。2.2.3甘草酸的含量測(cè)定精密稱取甘草酸提取物5mg用20ml水溶解，用水飽和的正丁醇萃取兩次，每次20ml，水洗兩次，減壓揮盡正丁醇，殘留物用流動(dòng)相溶解并定容至10ml，精密吸取5μL樣品溶液進(jìn)樣，記錄圖譜及峰面積，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算甘草酸銨的含量，并轉(zhuǎn)換為甘草酸的量(每0.2mg甘草酸銨標(biāo)準(zhǔn)品，折合甘草酸為0.1959mg)。2.2.4回收率試驗(yàn)取5μL樣品溶液，加入5μL甘草酸單銨鹽對(duì)照溶液，記錄圖譜及峰面積，計(jì)算回收率。2.3.5精密度與穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取同一批對(duì)照溶液10μL于0、2、4、6、8h進(jìn)樣，記錄圖譜及峰面積，計(jì)算RSD值。

3實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制以峰面積Y對(duì)進(jìn)樣量X(μg)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線得標(biāo)準(zhǔn)方程：Y=444.15X-0.5124(r=1)表明甘草酸銨在0.13-1.30μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。3.2方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果回收率結(jié)果為98.20%。精密度和穩(wěn)定性試驗(yàn)的數(shù)據(jù)見(jiàn)表2，對(duì)照品平均峰面積為576.76(n=5)，RSD為0.76%。表2精密度試驗(yàn)和穩(wěn)定性試驗(yàn)的數(shù)據(jù)（n=5）對(duì)照品時(shí)間（h）進(jìn)樣量（μL）峰面積1010576.072210579.573410576.224610570.155810581.81

3.3正交試驗(yàn)結(jié)果以甘草酸的提取率為標(biāo)準(zhǔn)，優(yōu)選閃式提取的最佳提取條件。正交試驗(yàn)結(jié)果與方差分析見(jiàn)表3、表4。表3甘草酸提取正交試驗(yàn)結(jié)果

ABCD提取量(g)純度(%)甘草酸量(g)提取率(%)111113.872030.391.17675.883212223.491433.301.16265.813313333.448632.021.10425.521421233.820232.081.22876.143522313.549443.901.55827.791623123.863432.461.25416.270731323.407940.531.38126.906832134.780633.561.60448.0229332