細(xì)菌的生理生化反應(yīng)實(shí)驗(yàn)報(bào)告

細(xì)菌的生理生化反應(yīng)實(shí)驗(yàn)報(bào)告【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/p>

了解細(xì)菌生理生化反應(yīng)原理，掌握細(xì)菌鑒定中常見的生理生化反應(yīng)方法。

了解生理生化反應(yīng)在鑒別細(xì)菌中的意義。

【實(shí)驗(yàn)原理】

通過測(cè)定微生物校內(nèi)某些酶類的有無、對(duì)某些第五的利用能力、代謝產(chǎn)物的類型等來研究微生物帶血的多樣性。某些細(xì)菌產(chǎn)生色氨酸酶，能分解培養(yǎng)基蛋白胨中的色氨酸，產(chǎn)生吲哚，吲哚與對(duì)二甲基氨基苯甲醛發(fā)生反應(yīng)，形成紅色的玫瑰吲哚，為吲哚反應(yīng)陽性。

微生物發(fā)酵葡萄糖成丙酮酸，2分子丙酮酸縮合脫羧成乙酰甲基甲醇。乙酰甲基甲醇在堿性條件下與肌酸類物質(zhì)反應(yīng)，生成紅色化合物為V.P.反應(yīng)陽性。有些細(xì)菌發(fā)酵糖類產(chǎn)生有機(jī)酸較多，使發(fā)酵液的pH下降到4.2以下，當(dāng)加入甲基紅試劑后，時(shí)發(fā)酵液變紅色，為甲基紅反應(yīng)陽性。某種微生物能以某種糖類為碳源，產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則判斷為發(fā)酵這種糖。

【實(shí)驗(yàn)材料和用具】菌種：大腸桿菌、產(chǎn)氣腸桿菌、普通變形菌、枯草芽孢桿菌。培養(yǎng)基：葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基、蛋白胨水培養(yǎng)基、糖發(fā)酵培養(yǎng)基（葡萄糖、乳糖或蔗糖）、V-P試劑、甲基紅試劑、吲哚試劑儀器：酒精燈、接種環(huán)、超凈工作臺(tái)、恒溫培養(yǎng)箱、高壓滅菌鍋、試管、移液槍、滴管、杜氏小管?！緦?shí)驗(yàn)方法】（一）V-P反應(yīng)1.試管標(biāo)記取5只裝有葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基的試管，分別標(biāo)記大腸桿菌、產(chǎn)氣腸桿菌、普通變形菌、枯草芽孢桿菌和空白對(duì)照。2.接種培養(yǎng)以無菌操作分別接種少量菌苔至上述相應(yīng)試管的培養(yǎng)基中?？瞻讓?duì)照不接種。置37度恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24-48h。3.觀察記錄去除以上培養(yǎng)物，分別取出2ml培養(yǎng)液加入另外5支相應(yīng)編號(hào)的空試管中，加入與培養(yǎng)液等量的V-P試劑，充分震蕩2min。放置37度恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)30min觀察記錄結(jié)果。（二）甲基紅實(shí)驗(yàn)于V-P實(shí)驗(yàn)留下的培養(yǎng)液中，分別加入2-3滴甲基紅指示劑，立即觀察培養(yǎng)液的顏色變化（三）吲哚實(shí)驗(yàn)1.試管標(biāo)記取5只裝有蛋白胨水培養(yǎng)基的試管，分別標(biāo)記大腸桿菌、產(chǎn)氣腸桿菌、普通變形菌、枯草芽孢桿菌和空白對(duì)照。2.接種培養(yǎng)以無菌操作分別接種少量菌苔至上述相應(yīng)試管的培養(yǎng)基中?？瞻讓?duì)照不接種。置37度恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24-48h。3.觀察記錄在培養(yǎng)基中加入乙醚1-2ml，經(jīng)充分振蕩使吲哚萃取至乙醚中，靜置片刻后乙醚層浮于培養(yǎng)液的上面，此時(shí)沿試管壁緩慢加入5-10滴吲哚試劑。觀察記錄結(jié)果（四）糖發(fā)酵試驗(yàn)1.試管標(biāo)記取分別裝有葡萄糖、蔗糖、乳糖發(fā)酵培養(yǎng)液試管各4支，分別標(biāo)記大腸桿菌、產(chǎn)氣腸桿菌、普通變形菌和空白對(duì)照。2.接種培養(yǎng)以無菌操作分別接種少量菌苔至上述相應(yīng)試管的培養(yǎng)基中。空白對(duì)照不接種。置37度恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24-48h。3.觀察記錄【實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析】（一）V-P大腸產(chǎn)氣枯草變形對(duì)照結(jié)果—+———產(chǎn)氣腸桿菌結(jié)果為陽性，其余為陰性。（二）甲基紅大腸產(chǎn)氣枯草變形對(duì)照結(jié)果+++——大腸桿菌、產(chǎn)氣腸桿菌、枯草芽孢桿菌結(jié)果為陽性，變形菌為陰性。（三）糖發(fā)酵大腸產(chǎn)氣變形對(duì)照葡萄糖顏色+—+—是否產(chǎn)氣+———乳糖顏色+—+—是否產(chǎn)氣+———蔗糖——+—是否產(chǎn)氣——+—大腸桿菌可以利用葡萄糖和乳糖，并且產(chǎn)氣；普通變形菌可以利用葡萄糖、乳糖和蔗糖并且在蔗糖中產(chǎn)氣。（四）吲哚實(shí)驗(yàn)大腸產(chǎn)氣枯草變形對(duì)照結(jié)果+——+—大腸桿菌和普通變形菌結(jié)果為陽性，其余為陰性。（五）抗生素抑菌圈大小氯苯青霉素氯霉素卡那霉素鏈霉素對(duì)照金黃2.70.91.20.9-大腸1.11.21.21.3-氯苯青霉素對(duì)