TCVMA 126-2023 規(guī)?；B(yǎng)殖場奶牛乳房炎常見致病菌檢測技術(shù)

ICS65.020.30CCSB41團(tuán) 體 標(biāo) 準(zhǔn)T/CVMA126-2023規(guī)?；B(yǎng)殖場奶牛乳房炎常見致病菌檢測技術(shù)Detectiontechnologyofcommonpathogenicbacteriaofdairycowmastitisinlarge-scalefarms2023-7-14發(fā)布 2023-7-14實施中國獸醫(yī)協(xié)會 發(fā)布T/CVMA126—2023前??言GB/T1.1—20201部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別這些專利的責(zé)任。本文件由青島市動物疫病預(yù)防控制中心提出。本文件由中國獸醫(yī)協(xié)會歸口。本文件主要起草人：李彥、趙永達(dá)、段笑笑、曲志娜、郭莉莉、劉蒙達(dá)、楊勝男、馬帥、王洪波、IT/CVMA126—2023規(guī)模化養(yǎng)殖場奶牛乳房炎常見致病菌檢測技術(shù)范圍本文件確定了規(guī)?；B(yǎng)殖場奶牛乳房炎的樣品采集、登記、實驗室檢測和記錄的程序。本文件適用于奶牛疑似乳房炎的確診。規(guī)范性引用文件（包括所有的修改單適用于本文件。NY/T2692 奶牛隱性乳房炎快速診斷技術(shù)NY/T2962 術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。奶牛乳房炎 bovinemastitis多由機(jī)械性刺激、病原菌浸入及化學(xué)物理性損傷所致的乳房實質(zhì)、間質(zhì)的炎癥。。臨床型乳房炎clinicalmastitis乳房和乳汁有肉眼可見臨床變化的炎癥。隱性乳房炎subclinicmastitis（泌乳期lactationperiod奶牛從分娩后開始泌乳之日起到停止泌乳（人工停乳或自然停乳）之間的一段時間。干乳期dryperiod經(jīng)產(chǎn)奶牛從停止泌乳之日起到分娩后重新泌乳之間的一段時期。1T/CVMA126—2023病原菌 pathogenicbacteria可以侵犯機(jī)體，引起感染甚至傳染病的微生物。注：或稱病原體。病原體中，以細(xì)菌和病毒的危害性最大。感染奶牛乳房炎的常見病原菌包括傳染性病原菌、環(huán)境性病原菌。臨床診斷臨床型乳房炎無臨床癥狀的乳房炎等發(fā)生變化，且能分離到可致病的病原菌。致病菌的分離樣品采集外觀觀察對疑似患病奶牛采樣前，應(yīng)對奶牛的整體狀況，包括精神狀態(tài)、乳房外觀、乳汁性狀等進(jìn)行觀察。試劑與材料參考附錄A中的規(guī)定，結(jié)合CLSI中規(guī)定的進(jìn)行。乳房清潔乳頭周圍無污物，用專用消毒毛巾或一次性紙巾擦除乳頭表面的灰塵和污物。若整個乳房較臟時，0.2%75%酒精進(jìn)行消毒。乳頭清潔清洗乳頭分為淋洗、擦干、按摩。淋洗后用干凈毛巾或紙巾擦凈。采樣和保存435mL以上乳汁于無菌采集管中。采集的乳汁樣品應(yīng)在2°C～8°C條件下冷藏，盡快送檢，也可置2°C～8°C低溫保存待檢。2T/CVMA126—2023樣品記錄包括樣品種類、奶牛場名稱、地址、牛編號、乳室、采樣日期、送檢日期、收樣人等詳細(xì)信息。實驗室診斷細(xì)菌的分離培養(yǎng)按照NY/T2692、NY/T2962、CLSI[1]的規(guī)定進(jìn)行操作。常見病原菌的培養(yǎng)參考附錄A的規(guī)定進(jìn)行。細(xì)菌的鑒定[2]16PCR檢測試16SRNA（16SrRNA）基因測序技術(shù)。乳汁體細(xì)胞檢測按照NY/T2692規(guī)定進(jìn)行判定，也可采用商品化的隱性乳房炎診斷試劑進(jìn)行檢驗判定，乳汁中的體細(xì)胞數(shù)量異常升高?；虬醇又萑榉垦讬z測法（CaliforniaMastitisTest，CMT），將采集的疑似患病奶牛的乳汁，在表面活性物質(zhì)和堿性藥物作用下，使乳中體細(xì)胞被破壞，釋放出DNA，按CMT操作說明及判定標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行奶牛隱性乳房炎的判定。一般以每毫升牛奶中含20萬個細(xì)胞為亞臨床乳房炎的臨界值（＋）；超過該值為陽性，低于該值則正常。如采用CMT法，可按表1進(jìn)行判定。表1 CMT法的判定方法及標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)判定被檢乳反應(yīng)狀態(tài)體細(xì)胞數(shù)（千/毫升）－陰性混合物呈液體狀，傾斜檢驗盤時，流動流暢，無凝塊0～200±可疑混合物呈液體狀，盤底有微量沉淀物，搖動時消失200～500＋弱陽性500～800＋＋陽性全部呈凝膠狀，有一定黏性，回轉(zhuǎn)時向心集中，不易散開800～5000＋＋＋強(qiáng)陽性混合物大部分或全部形成明顯的膠狀沉淀物，黏稠，幾乎完全黏附與盤底，旋轉(zhuǎn)搖動時，沉淀集于中心，難以散開＞5000檔案與記錄3T/CVMA126—2023B。4T/CVMA126—2023附 錄 A（資料性）常見病原菌的培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件表A.1給出了常見病原菌的培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件。表A.1 常見病原菌的培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件病原菌培養(yǎng)基培養(yǎng)條件金黃色葡萄球菌營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基需氧或兼性厭氧，最適生長溫度37°C，最適生長pH7.4無乳鏈球菌血瓊脂培養(yǎng)基35℃培養(yǎng)18h～24h停乳鏈球菌血瓊脂培養(yǎng)基35℃培養(yǎng)18h～24h牛支原體PPLO（20%馬血清pH7.9最佳CO2條件培養(yǎng)5d～7d乳房鏈球菌血瓊脂培養(yǎng)基55℃培養(yǎng)1d～2d凝固酶陰性葡萄球菌血瓊脂培養(yǎng)基35℃18h～2448h～72h腸球菌血瓊脂培養(yǎng)基37℃培養(yǎng)18h大腸埃希氏菌營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基37℃培養(yǎng)6h～8h肺炎克雷伯氏菌營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基37℃培養(yǎng)12h～18h產(chǎn)氣腸桿菌血瓊脂培養(yǎng)基35℃培養(yǎng)18h～24h沙雷氏菌普通瓊脂培養(yǎng)基25℃～30℃培養(yǎng)1d～2d變形桿菌普通瓊脂培養(yǎng)基在20℃～40℃之間繁殖旺盛志賀氏菌普通瓊脂培養(yǎng)基37℃培養(yǎng)12h～18h沙門氏菌普通瓊脂培養(yǎng)基37℃培養(yǎng)12h～18h綠膿桿菌普通瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)最適生長溫度為35℃，pH為7.2，CO25%～10%有助于生長化膿放線菌血瓊脂培養(yǎng)基最適生長溫度37℃，20℃～40℃生長牛棒狀桿菌普通瓊脂培養(yǎng)基最適生長溫度37℃巴氏桿菌普通瓊脂培養(yǎng)基最適生長溫度37℃5T/CVMA126—2023附 錄 B（資料性）奶牛感染乳房炎檔案記錄表表B.1給出了奶牛感染乳房炎檔案記錄表。表B.1奶牛感染乳房