丙環(huán)唑?qū)λ炯y枯病的防治作用

丙環(huán)唑?qū)λ炯y枯病的防治作用

水稻萎縮是由立枯絲生細(xì)胞菌（rizorconiasolanikuh）引起的水稻災(zāi)害之一，在世界上廣泛分布。立枯絲核菌主要侵染水稻葉鞘和葉片,引起枯斑,使水稻結(jié)實(shí)率降低,癟谷率增加,粒重下降,一般減產(chǎn)10%~20%,嚴(yán)重時(shí),減產(chǎn)超過30%。20世紀(jì)70年代以來,我國(guó)主要采用抗生素井岡霉素防治水稻紋枯病,并基本控制了紋枯病的嚴(yán)重危害。但是,井岡霉素因?yàn)椴痪哂袃?nèi)吸治療作用,并在自然界易降解失效,而常常表現(xiàn)防治效果不穩(wěn)定。三唑類殺菌劑是一類廣譜、高效、內(nèi)吸輸導(dǎo)性強(qiáng)的殺菌劑,對(duì)絲核菌屬的病原真菌具有很高的生物活性。它們主要通過抑制麥角甾醇生物合成來抑制或干擾菌體附著胞及吸器的發(fā)育、孢子形成和破壞菌絲細(xì)胞結(jié)構(gòu),從而降低病原菌的致病力,在植物病害的防治中,其地位日益受到人們的矚目。丙環(huán)唑是三唑類殺菌劑的一個(gè)代表性品種,已經(jīng)廣泛用于防治小麥全蝕病、白粉病、銹病、根腐病、水稻惡苗病、紋枯病、香蕉葉斑病等;國(guó)內(nèi)有關(guān)該藥對(duì)水稻紋枯病的防治多為田間藥效報(bào)道,對(duì)水稻紋枯病菌的離體抑制作用及在水稻上的應(yīng)用尚未見系統(tǒng)性研究。作者就丙環(huán)唑?qū)λ炯y枯病菌的抑制作用及其在水稻上的應(yīng)用做了初步探索,旨在為生產(chǎn)上科學(xué)合理使用丙環(huán)唑提供參考。1材料和方法1.1供試藥劑及藥劑菌株:立枯絲核菌(Rhizoctoniasolani),由本實(shí)驗(yàn)室2009年從江蘇省句容市田間水稻紋枯病病斑上分離保存。藥劑:95%丙環(huán)唑(propiconazole)原藥由江蘇豐登農(nóng)藥有限公司提供,62%井岡霉素(jinggangmycin)原藥由浙江桐廬匯豐生物化工有限公司提供。上述藥劑以甲醇為溶劑分別配成1×104μg/mL和1×103μg/mL的母液,4℃低溫保存,用于離體抑菌試驗(yàn)和溫室盆缽試驗(yàn)。25%丙環(huán)唑乳油由江蘇豐登農(nóng)藥有限公司提供,20%井岡霉素水溶性粉劑由無錫市玉祁生物有限公司提供,用于田間藥效試驗(yàn)。AEA培養(yǎng)基:酵母粉5g/L,甘油20mL/L,MgSO40.25g/L,NaNO36g/L,KCl0.5g/L,KH2PO41.5g/L,瓊脂粉20g/L,去離子水1L。1.2井佐素對(duì)枯絲核菌植物生長(zhǎng)的影響采用菌絲生長(zhǎng)速率法,在含丙環(huán)唑0、0.008、0.125、0.313、0.5、2.0、4.0μg/mL的AEA平板上測(cè)定丙環(huán)唑?qū)α⒖萁z核菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用,在含井岡霉素0、0.625、1.25、2.5、5.0、10.0μg/mL的AEA平板上測(cè)定井岡霉素對(duì)立枯絲核菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用,每處理重復(fù)3次,試驗(yàn)重復(fù)2次,置于25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3d。根據(jù)各濃度處理下藥劑對(duì)菌絲生長(zhǎng)的抑制率,求出丙環(huán)唑和井岡霉素在AEA培養(yǎng)基上抑制菌絲生長(zhǎng)的有效中濃度EC50。1.3不同濃度的aea平板菌核分離培養(yǎng)將在AEA培養(yǎng)基上培養(yǎng)的立枯絲核菌打成菌碟(d=5mm),分別接種在含丙環(huán)唑0、0.039、0.078、0.156、0.312、0.625、1.25、2.5、5.0μg/mL系列濃度的AEA平板上,25℃黑暗培養(yǎng)30d,菌核變褐成熟時(shí)用鑷子挑出收集,烘干,稱重。每處理重復(fù)3次,計(jì)算不同濃度藥劑對(duì)菌核形成的抑制率。將立枯絲核菌在AEA平板上培養(yǎng)的成熟菌核浸漬在含丙環(huán)唑0、0.039、0.078、0.156、0.313、0.625、1.25、2.5、5.0μg/mL系列濃度的溶液中30s,風(fēng)干后置于AEA平板上,25℃培養(yǎng)。觀察不同處理的菌核萌發(fā)情況,試驗(yàn)分別重復(fù)4次,每個(gè)重復(fù)測(cè)定50個(gè)菌核。1.4丙環(huán)唑菌碟的制備將立枯絲核菌在AEA培養(yǎng)基上25℃培養(yǎng)3d后的菌碟,分別放在0、0.004、0.016、0.063、0.25、1.0、4.0μg/mL的丙環(huán)唑溶液中浸漬30s,風(fēng)干后,將菌碟接種于無病的分蘗末期水稻的倒數(shù)第3片葉鞘內(nèi),用脫脂棉保濕,27℃下培養(yǎng),每處理接種3盆,每盆10株水稻。9d后調(diào)查發(fā)病情況,并計(jì)算病斑長(zhǎng)度抑制率。1.5丙環(huán)唑?qū)λ娟幍栏瘮〉姆乐巫饔?.5.1立枯絲核菌菌盤內(nèi)固定術(shù)在溫室長(zhǎng)勢(shì)一致的分蘗末期‘秈優(yōu)63’水稻上均勻噴霧0、50、100、200、400μg/mL的丙環(huán)唑藥液,24h后將預(yù)培養(yǎng)好的立枯絲核菌菌碟內(nèi)嵌于水稻倒數(shù)第3片葉鞘內(nèi),每處理30株,3次重復(fù)。25~35℃塑料袋保濕培養(yǎng),9d后測(cè)量接種部位病斑長(zhǎng)度(cm),并計(jì)算病斑長(zhǎng)度抑制率。1.5.2治療效果的測(cè)量接種方法同保護(hù)作用的測(cè)定,只是接種24h后噴藥。1.6立枯絲核菌菌盤5.用0、200、400、800μg/mL的丙環(huán)唑藥液灌根處理(用藥量50mL)分蘗末期的無病水稻,24h后將預(yù)培養(yǎng)好的立枯絲核菌菌碟內(nèi)嵌于水稻倒數(shù)第3片葉鞘內(nèi),每處理為30株水稻,重復(fù)3次。9d后根據(jù)接種部位病斑長(zhǎng)度(cm),計(jì)算病斑抑制率,評(píng)價(jià)水稻根部對(duì)丙環(huán)唑的吸收和輸導(dǎo)活性。1.7持效期的測(cè)定用0、200、400、800μg/mL的丙環(huán)唑藥液均勻噴霧分蘗末期的無病水稻,采用1.5.1的方法分別于藥后的第1、3、7、9、11天接菌,接菌9d后測(cè)量接種部位病斑長(zhǎng)度(cm),并計(jì)算病斑長(zhǎng)度抑制率,評(píng)價(jià)丙環(huán)唑在水稻上的持效期。1.8水對(duì)照處理方式試驗(yàn)藥劑處理設(shè)置為:25%丙環(huán)唑乳油有效劑量為75、112.5、150g/hm2,對(duì)照藥劑20%井岡霉素水溶性粉劑有效劑量為150g/hm2和清水對(duì)照共5個(gè)處理。試驗(yàn)藥劑、對(duì)照藥劑以及空白對(duì)照處理采用隨機(jī)區(qū)組排列,每小區(qū)面積20m2,重復(fù)4次。在水稻(‘連粳6號(hào)’,‘中熟中粳’)分蘗末期第1次用藥,間隔25d,在水稻破口前第2次用藥,間隔10d后在水稻齊穗期第3次用藥,使用新加坡利農(nóng)Jactol6L噴霧器按藥液量750kg/hm2常規(guī)噴霧。分別于第2、3次用藥后14d,每小區(qū)隨機(jī)五點(diǎn)取樣調(diào)查200株水稻,參照水稻紋枯病田間藥效試驗(yàn)準(zhǔn)則的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)調(diào)查,計(jì)算病情指數(shù)和防效。2結(jié)果與分析2.1c20、ec29值表1為丙環(huán)唑和井岡霉素對(duì)水稻紋枯病菌菌株的回歸方程、EC50及EC90值。結(jié)果表明,丙環(huán)唑?qū)λ炯y枯病菌菌絲生長(zhǎng)具有強(qiáng)烈的抑制活性,毒力明顯高于井岡霉素,其EC50、EC90值分別為0.045、2.418μg/mL。2.2丙環(huán)唑?qū)说挠绊懺贏EA培養(yǎng)基上,在0.078~5.0μg/mL劑量范圍內(nèi),丙環(huán)唑?qū)诵纬傻囊种谱饔秒S藥劑濃度的升高而增強(qiáng),0.039μg/mL低劑量處理會(huì)刺激菌核產(chǎn)生,菌核產(chǎn)量比對(duì)照高17.92%(圖1)。菌核經(jīng)不同濃度丙環(huán)唑處理后,與對(duì)照相比,菌核萌發(fā)沒有受到影響。未用丙環(huán)唑處理的菌核接種到含有不同濃度丙環(huán)唑的培養(yǎng)基平板上,各處理間菌核均可萌發(fā),但菌絲的生長(zhǎng)明顯受到抑制,抑制作用隨濃度的提高而加強(qiáng)。由此可見,丙環(huán)唑不抑制菌核的萌發(fā),而主要是抑制菌絲生長(zhǎng)。2.3丙環(huán)唑?qū)Σ“唛L(zhǎng)度的影響表2表明,立枯絲核菌經(jīng)不同濃度丙環(huán)唑處理后致病力明顯減弱,丙環(huán)唑處理濃度越高,菌絲體致病力越弱。丙環(huán)唑處理濃度為0.004μg/mL時(shí),病斑長(zhǎng)度抑制率為16.39%,當(dāng)丙環(huán)唑濃度達(dá)到4μg/mL時(shí),病斑長(zhǎng)度抑制率為91.8%,均比對(duì)照發(fā)病程度要輕。這可能與丙環(huán)唑主要抑制菌絲生長(zhǎng)有關(guān)。2.4丙環(huán)唑在水稻接菌前后和24h的用量對(duì)促進(jìn)水稻紋枯病的效果丙環(huán)唑防治水稻紋枯病的保護(hù)作用與治療作用測(cè)定結(jié)果見表3。結(jié)果表明,丙環(huán)唑在水稻接菌前、后24h用藥對(duì)水稻紋枯病都有很好的防治效果,且防效相當(dāng)。丙環(huán)唑濃度為200μg/mL時(shí),防治效果均可達(dá)到50%。2.5病斑的抑制率用丙環(huán)唑200、400、800μg/mL灌根處理水稻,病斑抑制率均超過50%,都比對(duì)照發(fā)病輕,且隨著藥劑濃度的增高病斑長(zhǎng)度減小(表4)。這表明丙環(huán)唑可以被水稻根系吸收并輸送到莖部和葉鞘,從而有效抑制病斑的擴(kuò)展。2.6接種時(shí)間的確定由圖2可知,水稻在藥劑處理后同一時(shí)間接種,病情的抑制程度會(huì)隨著丙環(huán)唑濃度的增高而加強(qiáng);相同劑量處理下,病情的抑制會(huì)隨著推遲接種的天數(shù)增加而減小。藥后11d接菌,丙環(huán)唑800μg/mL處理的防效仍然達(dá)到40.10%,這表明800μg/mL丙環(huán)唑在本試驗(yàn)條件下在水稻上的防治持效期至少有11d,可以很好地抑制病情的發(fā)展。2.7試驗(yàn)前后對(duì)水稻生長(zhǎng)的影響結(jié)果如表5所示,在田間,25%丙環(huán)唑乳油對(duì)水稻紋枯病有很好的防治效果。在水稻破口前第2次用藥和水稻齊穗期第3次用藥后14d,75g/hm2的丙環(huán)唑乳油防效分別達(dá)到69.39%和75.82%,與井岡霉素有效劑量150g/hm2的效果相當(dāng),高濃度的防治效果明顯高于井岡霉素。試驗(yàn)期間各藥劑處理在試驗(yàn)劑量范圍內(nèi),未見對(duì)水稻生長(zhǎng)有明顯不良影響。對(duì)水稻的孕穗、抽穗安全,未產(chǎn)生任何藥害。3對(duì)水稻紋枯病的防治作用作者研究了丙環(huán)唑?qū)λ炯y枯病菌的抑制作用及對(duì)水稻紋枯病的防治效果。丙環(huán)唑?qū)λ炯y枯病菌的菌絲生長(zhǎng)、菌核形成具有很強(qiáng)的抑制作用。丙環(huán)唑?qū)说拿劝l(fā)沒有作用,但對(duì)菌核萌發(fā)后菌絲的生長(zhǎng)具有明顯的抑制作用,導(dǎo)致萌發(fā)后的菌絲致病力下降,產(chǎn)菌核能力和數(shù)量下降,從而有可能減少來年水稻紋枯病的初侵染源。丙環(huán)唑?qū)λ炯y枯病菌的致病力也有強(qiáng)烈的抑制作用,可能是因?yàn)楸h(huán)唑主要抑制水稻紋枯病菌的菌絲生長(zhǎng)。防治水稻紋枯病的傳統(tǒng)藥劑井岡霉素不具有內(nèi)吸治療作用,并在自然界易降解失效,而常常表現(xiàn)防治效果不穩(wěn)定。在這種情況下,在田間合理、科學(xué)地使用丙環(huán)唑防治水稻紋枯病顯得很有必要。根據(jù)本研究結(jié)果,丙環(huán)唑?qū)λ?/p>