連翹酯苷抗感染及耐熱作用研究

連翹酯苷抗感染及耐熱作用研究

熱毒類化合物中藥連翹是木犀科植物連翹的干燥果實。具有清熱解毒、消瘀、分粘液的功效。它是一種常用的解熱藥物。它經(jīng)常被用來治療急性感染疾病和其他熱疾病，該綜合征屬于熱毒癥。連翹酯苷是連翹的主要成分之一,具有一定的活性。本實驗主要研究連翹酯苷抗感染、解熱作用,探討其與中藥連翹清熱解毒作用的關(guān)系,結(jié)果如下。1材料和方法1.1實驗材料1.1.1r大鼠r大鼠昆明種小鼠,18～22g;健康Wistar大鼠,體重180～220g,雌雄各半;新西蘭兔,體重1.5～1.8kg,雌雄各半,均由山西省中醫(yī)藥研究院動物實驗室提供。1.1.2藥物、藥物、養(yǎng)老藥連翹酯苷,淡黃色粉狀物,用生理鹽水配制成所需濃度,山西省中醫(yī)藥研究院中藥方劑所提供,批號:20030401;清開靈注射液,稀釋1.6倍后使用,山西太行藥業(yè)股份有限公司出品,批號:050202;干酵母,湖北安琪酵母股份有限公司出品,批號:20050601;大腸桿菌內(nèi)毒素,中國藥品生物制品檢定所提供,批號:981;生理鹽水,山東華魯制藥有限公司出品,批號:2005021409。1.1.3原液及儀器綠膿桿菌原液濃度0.3億/ml,大腸桿菌原液濃度5億/ml,金黃色葡萄球菌原液濃度300億/ml,均由山西省中醫(yī)藥研究院化驗室提供。水銀體溫計;醫(yī)用一次性注射器,10*75mm試管;電子天平(德國賽多利斯BP211D型);三用電熱水浴箱(北京醫(yī)療器械廠產(chǎn)品);FZQ-2型旋轉(zhuǎn)震蕩儀(泰縣醫(yī)用儀器廠)。1.2實驗方法1.2.1細菌感染調(diào)查將小鼠隨機分為5組:對照組;連翹酯苷小(0.25g/kg)、中(0.5g/kg)、大(1.0g/kg)3個劑量組;清開靈組(12.5ml/kg)。各給藥組均腹腔注射給藥,給藥體積為0.2ml/10g,每日一次,連續(xù)給藥三天,對照組給予等量的生理鹽水。末次給藥后1小時,按預(yù)實驗劑量腹腔注射綠膿桿菌(0.2ml/10g),記錄注射細菌后72小時內(nèi)動物死亡數(shù),計算死亡率。大腸桿菌(0.2ml/10g)、金黃色葡菌球菌(0.1ml/10g)實驗過程與此相同。1.2.2各組大鼠最適劑量的確定實驗室適應(yīng)飼養(yǎng)3日后,挑選合格大鼠(一日內(nèi)間隔1小時連續(xù)兩次測得肛溫變化不超過0.3℃者)隨機分為5組:對照組;連翹酯苷小(0.25g/kg)、中(0.5g/kg)、大(1.0g/kg)3個劑量組;清開靈組(12.5ml/kg)。各給藥組實驗當(dāng)日均腹腔注射給藥一次,給藥體積為0.2ml/10g,對照組給予等量生理鹽水。大鼠于實驗前10h開始禁食,排空直腸后測量肛溫兩次,每次間隔一小時,取平均值做為基礎(chǔ)體溫。然后各給藥組分別腹腔注射藥物,對照組腹腔注射同體積生理鹽水。給藥后立即于背部皮下注射20%酵母懸液,給藥量為10ml/kg,分別測量給藥后1、2、4、6、8、10、12小時的肛溫,計算各測定點大鼠體溫的變化,并進行比較。1.2.3采用u3000次給藥,一般在半干重、大劑量大時服用不同劑量組實驗室適應(yīng)飼養(yǎng)3日后,挑選合格家兔(一日內(nèi)間隔1小時連續(xù)兩次測得肛溫變化不超過0.3℃者)隨機分為5組:對照組;連翹酯苷小(0.25g/kg)、中(0.5g/kg)、大(1.0g/kg)3個劑量組;清開靈組(12.5ml/kg)。各給藥組實驗當(dāng)日均腹腔注射給藥一次,給藥體積為0.2ml/10g,對照組給予等量生理鹽水。實驗前10h開始禁食,排空直腸后測量肛溫兩次,每次間隔一小時,取平均值做為基礎(chǔ)體溫。然后各給藥組分別腹腔注射藥物,對照組腹腔注射同體積生理鹽水。末次給藥后1小時,左側(cè)耳緣靜脈注射大腸桿菌內(nèi)毒素溶液,注射劑量為10EU/kg,分別測量給內(nèi)毒素后1、2、3、4、6小時家兔的肛溫,計算各測定點家兔體溫的升高值,并進行比較。2結(jié)果和分析體內(nèi)抗感染實驗用四格表確切概率法,比較組間差異。解熱實驗用Excel工作表處理。2.1各組大鼠感染情況比較對綠膿桿菌所致感染,連翹酯苷注射給藥各劑量組可產(chǎn)生明顯對抗作用,可降低動物死亡率。中、大劑量組與對照組相比有顯著性差異。對大腸桿菌所致感染,清開靈、連翹酯苷注射給藥各劑量組可產(chǎn)生明顯對抗作用,可降低動物死亡率,與對照組相比有顯著性差異。對金葡菌所致感染,清開靈、連翹酯苷注射給藥各劑量組可產(chǎn)生明顯對抗作用,可降低動物死亡率,與對照組相比有顯著性差異。見附表1。2.2對酵母發(fā)熱模型大鼠體溫的影響注射給連翹酯苷各劑量組對酵母所致發(fā)熱大鼠均有解熱作用,能顯著抑制酵母發(fā)熱模型大鼠體溫的升高,與對照組相比多個時間點有統(tǒng)計學(xué)意義,見附表2。2.3粘土內(nèi)毒素?zé)崮Ｐ偷慕鉄嵝ЧB翹酯苷各劑量組及清開靈注射給藥均可明顯抑制內(nèi)毒素所致家兔體溫升高,與對照組相比有顯著性差異。見附表33麻黃酯苷注射對細菌的作用能引起人體或者動物體發(fā)熱的物質(zhì),通稱為致熱原。根據(jù)來自于體外或體內(nèi)又把致熱原劃分為外源性致熱原和內(nèi)生致熱原,近年來不少學(xué)者認(rèn)為,許多外源性致熱原可能主要是激活產(chǎn)生內(nèi)生致熱原細胞,使后者產(chǎn)生和釋放內(nèi)生致熱原,再通過某種途徑作用于下丘腦體溫調(diào)節(jié)中樞使體溫調(diào)定點上移體溫升高,引起發(fā)熱。通過實驗證實連翹酯苷注射給藥有一定的解熱功效,能延緩酵母發(fā)熱大鼠的體溫升高過程,能促進內(nèi)毒素所致發(fā)熱家兔的體溫下降。連翹酯苷的解熱作用是通過直接抑制體溫調(diào)節(jié)中樞而發(fā)揮作用或是以抑制體內(nèi)內(nèi)生致熱原的產(chǎn)生,或是抑制某些中樞介質(zhì)的作用緩解還有待進一步的探求。腹腔注射給藥對多種細菌引起的感染有良好的對抗作用,有報道稱連翹酯苷可能具有增強機體免疫系統(tǒng)功能的作用,從而影響機體免疫功能的不同方面。研究也證實許多清熱藥對機體的免疫功能有促進作用,如黃連、連翹、黃芩、穿心蓮、野菊花、石膏等能增強白細胞和網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吞噬功能;所以探討起抗感染作用的機理可從能否增強白細胞和網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吞噬功能;能否促進淋巴細胞的轉(zhuǎn)化率;抑制變態(tài)反