不同天齡果蠅體內(nèi)sod活力和mda含量的測(cè)定

不同天齡果蠅體內(nèi)sod活力和mda含量的測(cè)定

雖然很常見的寄生蟲是昆蟲，但它們的許多代謝路徑、生理功能和發(fā)育階段基本上與哺乳動(dòng)物相似，因此經(jīng)常用于老性學(xué)研究。本文對(duì)野生型OregonK黑腹果蠅體內(nèi)SOD和MDA隨年齡而發(fā)生變化的規(guī)律及其與壽命的關(guān)系進(jìn)行了研究,以期為探討生物體的衰老機(jī)理提供依據(jù)。1材料和方法1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物黑腹果蠅(Drosophilamelanogaster),野生型OregonK品系。1.2男性,指導(dǎo)收集8小時(shí)內(nèi)新羽化未交配的果蠅6000只,雌雄各半。將雌雄果蠅分開飼養(yǎng)在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中,置25±1℃,相對(duì)濕度50%~60%環(huán)境中培養(yǎng)。1.3蒼蠅生存測(cè)試未交配果蠅雌雄各200只,每天觀察記錄果蠅生存數(shù)和死亡數(shù),直到果蠅全部死亡為止。計(jì)算出存活率、平均壽命和平均最高壽命等3個(gè)指標(biāo)。1.4微生物指標(biāo)每隔10天取存活的果蠅雌雄各250只,分別隨機(jī)分為5組,即每50只果蠅為1個(gè)樣本。將50只果蠅(雌或雄)稱重,加0.5m1生理鹽水,在冰浴中以2000r/min勻漿10S,間歇10S,反復(fù)進(jìn)行3次,制成勻漿;以6000r/min離心10min,取上清液待測(cè)。測(cè)定值取5個(gè)樣本的平均值。1.5sod測(cè)定采用羥胺比色法。試劑盒由南京建成生物工程研究所提供,按SOD測(cè)定試劑盒說明書操作。測(cè)定結(jié)果以每克果蠅的SOD活力單位數(shù)表示(U/g)。1.6月經(jīng)期測(cè)定daa含量采用硫代巴比妥酸(TBA)熒光分光光度法。測(cè)定結(jié)果以每克果蠅含MDA納摩爾數(shù)表示(nmol/g)。2結(jié)果2.1不同年齡、不同性別學(xué)生的sod活力變化顯示1天齡組雌雄果蠅體內(nèi)SOD活力明顯低于同性別其他天齡組(P<0.05或P<0.01);雌蠅1~50天齡隨增齡SOD活力逐漸增加(P<0.05),60天齡的SOD活力比50天齡明顯降低(P<0.05);雄蠅1~40天齡體內(nèi)SOD活力隨增齡而增加(P<0.05),40天齡后SOD活力逐漸下降(P<0.05),50和60天齡的SOD活力已低于10天齡水平。另外各天齡雄雌果蠅SOD活力差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。2.2雄蠅mda的性別分布顯示1天齡組果蠅體內(nèi)MDA含量明顯低于同性別其他天齡組(P<0.01);雌雄果蠅隨增齡MDA含量逐漸增加,其中60天齡雄蠅MDA含量加速上升,明顯高于同性別其他天齡組(P<0.05或P<0.01);30天齡組雌雄果蠅MDA含量的差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。2.3d不同發(fā)育期克氏原螯蝦的存活率雌性果蠅的平均壽命和平均最高壽命均明顯高于雄蠅(表3)。1~40天齡雌雄果蠅的存活率同步緩慢下降;40天齡后存活率加速下降,雄蠅尤為突出,存活率明顯低于雌蠅(表4)。3脂質(zhì)過氧化作用與mda含量的關(guān)系研究結(jié)果顯示:果蠅體內(nèi)SOD活力在40、50天齡以前是隨增齡而上升,于中齡期(雄蠅40天齡,雌蠅50天齡)達(dá)到最高水平,當(dāng)進(jìn)入老齡后有下降的趨勢(shì)。此結(jié)果與某些關(guān)于健康人紅細(xì)胞中SOD活力隨增齡而降低的報(bào)道大相徑庭,但與王贊舜報(bào)道的中齡大鼠紅細(xì)胞SOD明顯高于幼齡和老齡大鼠的結(jié)果相似,這可能是因?qū)嶒?yàn)取材不同或不同種屬的動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育和生理代謝的差異所致。本研究還顯示,雌雄果蠅體內(nèi)MDA含量隨增齡而增加,這與關(guān)于健康人和大鼠的研究結(jié)果,相類似,表明脂質(zhì)過氧化作用隨年齡而增強(qiáng)可能是生物體所共有的特性。SOD是一種存在于生物體內(nèi)的抗氧化酶,它可清除自由基,減輕和阻斷脂質(zhì)過氧化作用,保護(hù)機(jī)體免受自由基的損傷,延續(xù)細(xì)胞的衰老。在生理?xiàng)l件下,SOD的生物合成量可以及時(shí)滿足清除自由基的需要,而且可隨自由基生成量的增加而增加。本研究發(fā)現(xiàn)各天齡組雄蠅的SOD高于雌蠅(P<0.01),而MDA則略低于雌蠅,這種性別之間的差異在人類和鼠類的研究中未見報(bào)道。分析其原因可能是雄蠅體形較雌蠅小,體重只有雌蠅的70%左右,體內(nèi)脂質(zhì)含量較雌蠅少,故其脂質(zhì)過氧化作用較小,消耗的SOD也較少。盡管雄蠅的SOD高于雌蠅,而MDA略低于雌蠅,但卻不能保證雄蠅比雌蠅長(zhǎng)壽。由此可見,SOD和MDA水平的高低并不能完全決定壽命的長(zhǎng)短,而SOD與MDA的平衡被打破才是影響壽命的重要因素。雄蠅SOD活力與MDA含量的反向變化趨勢(shì)于40天齡以后開始發(fā)生,比雌蠅提早10天;同時(shí)雄蠅40天齡后存活率也明顯低于雌蠅,這表明雄蠅衰老發(fā)生得比較早,故導(dǎo)致雄蠅的平均壽命和平均最高壽命均明顯低于雌蠅,這些現(xiàn)象提示機(jī)體內(nèi)SOD與MDA的平衡失調(diào)可能是步入衰老的征象和造成死亡的原因之一。衰老是一個(gè)多因素參與的復(fù)雜過程,隨著動(dòng)物增齡,組織過