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文檔簡介

免疫熒光雙染光染色。雙重免疫熒光標記法(double冰凍切片熒光tunel+免疫熒光雙標實驗步驟固定10min，待丙酮完全干后于PBS（PH7.4）中），3、?破膜：切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加破膜工作液育20min，將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每4、?加試劑1,2：按片子數(shù)量和組織大小取tunel試劑盒內(nèi)適量試劑5、?BSA封閉:將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，8、?DAPI復(fù)染細胞核：切片用PBS（PH7.4）洗外激發(fā)波長330-380nm，發(fā)射波長420nm；FITC綠光激發(fā)波長465-495nm，發(fā)射波長515-555?nm；CY3紅光激發(fā)波長510-560，發(fā)射波長590nm）石蠟切片熒光tunel+免疫熒光雙標實驗步驟Ⅱ15-20min-無水乙醇Ⅰ10min-無水乙醇Ⅱ10min-95%酒精5min-90%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min-蒸），育20min，將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每4、?加試劑1,2：按片子數(shù)量和組織大小取tunel試劑盒內(nèi)適量試劑1?(TdT)?和試劑2(dUTP)按2:29混合，加到圈內(nèi)覆蓋組織，切片平放于5、?BSA封閉:將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，6、?加一抗：輕輕甩掉封閉液，在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗，切片平放于濕盒內(nèi)4°C孵育過夜。（濕盒內(nèi)加少量水防止抗體蒸7、?加二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每8、?DAPI復(fù)染細胞核：切片用PBS（PH7.4）洗滌3次，每次5min。去除PBS后在圈內(nèi)滴加DAPI染液，避光室溫孵育10min。外激發(fā)波長330-380nm，發(fā)射波長420nm；FITC綠光激發(fā)波長465-495nm，發(fā)

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