細(xì)胞工程理論初級(jí)基礎(chǔ)

第三章細(xì)胞工程的理論根底編輯ppt細(xì)胞培養(yǎng)(cellculture)技術(shù)

即是選用各種細(xì)胞的最正確生存條件對活細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)和研究的技術(shù)，是廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)等研究領(lǐng)域的重要技術(shù)。編輯ppt動(dòng)物細(xì)胞與組織培養(yǎng)〔cellandtissueculture〕是動(dòng)物細(xì)胞工程的重要技術(shù)根底。動(dòng)物的細(xì)胞與組織培養(yǎng)是指從活的機(jī)體中取出組織或細(xì)胞，模擬機(jī)體內(nèi)生理?xiàng)l件，在體外建立無菌、適溫和一定營養(yǎng)條件等，使之生長和生存，并維持其結(jié)構(gòu)和功能的技術(shù)。編輯ppt組織培養(yǎng)的概念組織培養(yǎng)這一名詞實(shí)際上是一個(gè)通用名詞，習(xí)慣上泛指所有的體外培養(yǎng)。根據(jù)培養(yǎng)物的不同可概括為三個(gè)不同概念：細(xì)胞培養(yǎng)、組織培養(yǎng)和器官培養(yǎng)。編輯pptA：細(xì)胞培養(yǎng)：將組織塊用機(jī)械方法或酶解法別離成單個(gè)細(xì)胞，做成細(xì)胞懸液，再培養(yǎng)于固體基質(zhì)上，成單層細(xì)胞生長，或在培養(yǎng)液中呈懸浮狀態(tài)培養(yǎng)的技術(shù)稱為細(xì)胞培養(yǎng)。編輯pptB：組織培養(yǎng)：將活體的一小片組織放在盛有培養(yǎng)液的玻璃或塑料培養(yǎng)器皿中，待組織塊粘著后，沿底面平面移動(dòng)生長的過程稱為組織培養(yǎng)。從組織塊中生長出來的仍然是細(xì)胞，細(xì)胞在生長的同時(shí)也發(fā)生移動(dòng)，至使組織培養(yǎng)難以長時(shí)間維持其原有結(jié)構(gòu)，結(jié)果也就成了細(xì)胞培養(yǎng)。編輯pptC：器官培養(yǎng)：是指采取某些措施使器官的原基、器官的一局部或整個(gè)器官在體外存活、生長，并保持其原有結(jié)構(gòu)和功能的培養(yǎng)技術(shù)。編輯ppt體外培養(yǎng)的種類編輯ppt二、細(xì)胞培養(yǎng)的現(xiàn)實(shí)意義編輯ppt

生物技術(shù)上：生產(chǎn)各種生技術(shù)產(chǎn)品如：狂犬病、小兒麻痹癥等病毒疫苗，表皮生長因子及干擾素、白細(xì)胞介素等生長因子及單克隆抗體等?？茖W(xué)研究上：在病毒學(xué)、免疫學(xué)、遺傳學(xué)、腫瘤學(xué)等方面。臨床醫(yī)學(xué)上：胎兒的遺傳性疾病分析，藥物篩選及某些疾病的治療等編輯ppt三、細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)編輯ppt

1.研究的對象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時(shí)間監(jiān)控、檢測，甚至定量評(píng)估一局部活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。

編輯ppt

2.研究條件可以人為控制可以根據(jù)需要，控制包括pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理、化學(xué)的條件，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。編輯ppt3.研究的樣本可以到達(dá)比較均一性通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系那么可以到達(dá)均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞到達(dá)純化。編輯ppt4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄采用各種研究技術(shù)、記錄方法：

研究:倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記--

記錄:攝影照片、縮時(shí)電影、電視--編輯ppt5.研究的范圍比較廣泛學(xué)科多：細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等對象廣：

各種動(dòng)物：低等動(dòng)物--高等動(dòng)物--人類

一種動(dòng)物：不同年齡--

不同組織--

正?；虍惓！材[瘤--〕

編輯ppt6.研究的費(fèi)用相對較經(jīng)濟(jì)

可提供大量、同一時(shí)期、重復(fù)性好的、生物學(xué)性狀相似的實(shí)驗(yàn)對象。編輯ppt四、細(xì)胞培養(yǎng)的缺點(diǎn)編輯ppt現(xiàn)人工模擬體內(nèi)環(huán)境的技術(shù)已經(jīng)很高,

但,人工所模擬的條件與體內(nèi)實(shí)際情況

仍不完全相同.

當(dāng)細(xì)胞被置于體外培養(yǎng)后,

生活在缺乏動(dòng)態(tài)平衡的環(huán)境中,

久了，必然發(fā)生變化.編輯ppt因此，對于體外培養(yǎng)的細(xì)胞，應(yīng)該把他們視作一種既能保持動(dòng)物體內(nèi)原細(xì)胞一定的性狀、結(jié)構(gòu)和功能，又具有某些改變的，特定的細(xì)胞群體，而不能將之與體內(nèi)的細(xì)胞完全等同。編輯ppt五、細(xì)胞培養(yǎng)的工作原那么編輯ppt有標(biāo)準(zhǔn)化的工作方法培養(yǎng)用的液體極多〔如培養(yǎng)液、胰蛋白酶、HANKS液及抗菌素等〕，應(yīng)由專人負(fù)責(zé)，并保證做到按規(guī)程行事，配制濃度準(zhǔn)確，滅菌可靠，所有配好的溶液瓶上都要標(biāo)明名稱、濃度、消毒與否和制備日期等。一切培養(yǎng)用品都要有固定的存放點(diǎn)，防止雜亂無章，其中尤其重要的是：培養(yǎng)用品與非培養(yǎng)用品應(yīng)嚴(yán)格分開，已消毒品與未消毒品應(yīng)分別存放。編輯ppt第二節(jié)組織培養(yǎng)的細(xì)胞生物學(xué)編輯ppt一、體內(nèi)外細(xì)胞的差異和分化編輯ppt〔一〕體內(nèi)外細(xì)胞的差異培養(yǎng)細(xì)胞最多見的表現(xiàn)是：失去原有組織結(jié)構(gòu)和細(xì)胞形態(tài)，分化減弱或不顯，出現(xiàn)類似“反祖〞現(xiàn)象；表現(xiàn)為細(xì)胞趨單一化，或獲得不死性，或變成具有惡性性狀的細(xì)胞群。編輯ppt1.與體內(nèi)主要不同：

相對孤立、相對單一

缺乏體內(nèi)的系統(tǒng)作用、失去神經(jīng)體液的調(diào)節(jié)

和細(xì)胞相互間的影響編輯ppt2.主要表現(xiàn)

失去原有組織結(jié)構(gòu)和細(xì)胞形態(tài)

分化減弱或不顯

細(xì)胞趨向單一化；3.提示

要正確認(rèn)識(shí)體外培養(yǎng)細(xì)胞

是一種特定條件下生長的細(xì)胞群體。

編輯ppt（二）培養(yǎng)細(xì)胞的分化

1．不適應(yīng)(Deadaption)：表現(xiàn)為，細(xì)胞在原體內(nèi)時(shí)所擁有的分化特性減弱或不顯，如肝細(xì)胞產(chǎn)生酪氨酸轉(zhuǎn)移酶(TyrosineAminotranserase)特性的喪失.2．脫分化或去分化(Dedifferentiation)細(xì)胞也可能出現(xiàn)脫分化或去分化，即細(xì)胞失掉發(fā)生分化的能力。編輯ppt編輯ppt二、培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)分類編輯ppt體外細(xì)胞培養(yǎng)物的生長類型按生長方式:2型粘附型細(xì)胞:附著在某一固相支持物外表才能生長的細(xì)胞。懸浮型細(xì)胞:不必附著于固相支持物外表，而在懸浮狀態(tài)下即可生長的細(xì)胞。絕大多數(shù)有機(jī)體細(xì)胞屬粘附型細(xì)胞，只有少數(shù)細(xì)胞類型如某些腫瘤細(xì)胞和白細(xì)胞可在懸浮狀態(tài)下生長。編輯ppt體外培養(yǎng)細(xì)胞的分型

編輯ppt貼附(粘附)型細(xì)胞粘附:是大多數(shù)有機(jī)體細(xì)胞在體內(nèi)

生存和生長發(fā)育的根本存在方式含義兩方面結(jié)果基于粘附特性，使細(xì)胞與細(xì)胞之間相互結(jié)合形成組織，

有機(jī)體的絕大多數(shù)細(xì)胞必須

粘附于一固相外表

才能生存和生長。

編輯ppt培養(yǎng)時(shí)：這些細(xì)胞被放到體外環(huán)境中以后,同樣需要粘附于某一固相外表才能生存和生長，因而屬于粘附型細(xì)胞。粘附(錨定或錨著)依賴型(性)細(xì)胞：唯有粘附于固相外表才能生存的細(xì)胞編輯ppt類型

細(xì)胞在體內(nèi)、外的粘附方式：存在差異

體內(nèi)：粘附是全方位

外形具有復(fù)雜的立體特征

體外：多數(shù)情況，細(xì)胞只有一個(gè)附著平面

外形一般與體內(nèi)時(shí)明顯不同按照培養(yǎng)細(xì)胞粘附生長時(shí)的主要形態(tài)，可分為幾大類型編輯ppt分類

根據(jù)形態(tài)大致的不同，主要2類：上皮細(xì)胞型成纖維細(xì)胞型

其它，不定型編輯ppt上皮細(xì)胞型名稱：僅形態(tài)上似體內(nèi)，實(shí)際上不完全等于--來源：來源于外胚層，內(nèi)胚層細(xì)胞如：皮膚及其衍生物消化道，乳腺，肺泡上皮性腫瘤形態(tài)：類似體內(nèi)的上皮細(xì)胞扁平，不規(guī)那么多角形，中有圓形核編輯ppt生長特點(diǎn)易相連成片相靠—緊密相連—成薄層------

鋪石狀生長時(shí)呈膜狀移動(dòng)很少脫離細(xì)胞群而單個(gè)活動(dòng)

體外培養(yǎng)細(xì)胞類型〔1〕——上皮細(xì)胞型編輯ppt成纖維細(xì)胞型名稱：凡在培養(yǎng)中形態(tài)與成纖維細(xì)胞類似的來源：由中胚層間充質(zhì)組織起源的組織如：真正的成纖維細(xì)胞心肌，平滑肌，成骨細(xì)胞，血管內(nèi)皮形態(tài)：似體內(nèi)成纖維細(xì)胞的形態(tài)胞體梭形或不規(guī)那么三角形胞質(zhì)向外伸出2—3個(gè)長短不等的突起中有卵圓形核編輯ppt生長特點(diǎn)：排列成放射狀，漩渦狀并不緊靠連成片，細(xì)胞—細(xì)胞接觸易斷開而單獨(dú)行動(dòng)游離的單獨(dú)的成纖維樣細(xì)胞，常有幾個(gè)伸長的細(xì)胞突起體外培養(yǎng)細(xì)胞類型〔2〕——成纖維細(xì)胞型編輯ppt貼附生長型--類型1.與體內(nèi)同名的細(xì)胞不完全相同如：形態(tài)相似的成纖維細(xì)胞，可不同來源自同一動(dòng)物不同組織的成纖維樣細(xì)胞相似但

開展趨向不同2.培養(yǎng)細(xì)胞的形態(tài)不穩(wěn)定條件改變，細(xì)胞形態(tài)可有變化編輯ppt培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)不穩(wěn)定

血清Hela高血清低血清

成纖維細(xì)胞樣上皮樣細(xì)胞

pHHela太酸或太堿標(biāo)準(zhǔn)pH

成纖維細(xì)胞樣上皮樣細(xì)胞

細(xì)胞密度3T3低密度高密度

成纖維細(xì)胞樣上皮樣細(xì)胞生長狀態(tài)改變

懸浮或貼附懸浮貼附

圓形成纖維或上皮樣

轉(zhuǎn)化與否未轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化后成纖維樣可成上皮樣編輯ppt懸浮生長型

概念培養(yǎng)時(shí)不貼附于底物而呈懸浮狀態(tài)生長或以機(jī)械方法使保持懸浮狀態(tài)下生長來源自血，脾或骨髓，尤以血中白細(xì)胞癌腫細(xì)胞也可能特點(diǎn)在懸浮中生長良好細(xì)胞圓形，單個(gè)或小細(xì)胞團(tuán)編輯ppt優(yōu)點(diǎn)

生存空間大，提供數(shù)量大傳代方便(不需消化)易于收獲可獲得穩(wěn)定狀態(tài)缺點(diǎn)觀察不方便很多細(xì)胞不能懸浮生長(尤以正常細(xì)胞)

編輯ppt懸浮型概念：培養(yǎng)時(shí)不貼附于底物而呈懸浮狀態(tài)生長來源：自血，脾或骨髓，尤以血中白細(xì)胞癌腫細(xì)胞特點(diǎn)：在懸浮中生長良好細(xì)胞圓形，單個(gè)或小細(xì)胞團(tuán)優(yōu)點(diǎn)：生存空間大，提供數(shù)量大，傳代方便(不需消化)，易于收獲，可獲得穩(wěn)定狀態(tài)缺點(diǎn)：觀察不方便，很多細(xì)胞不能懸浮生長(尤以正常細(xì)胞)編輯pptHL-60分化細(xì)胞Giemsa染色1.細(xì)胞種類：HL-60；

2.培養(yǎng)的天數(shù)：ATRA1微摩爾作用5天；

3.放大倍速：倒置顯微鏡X10；

4.培養(yǎng)基種類：1640+8％胎牛血清；

5.細(xì)胞狀態(tài)與特征簡述：懸浮細(xì)胞，分化的細(xì)胞核漿比例減小，核仁減少或消失，胞核呈桿狀或分葉狀。編輯pptKU812

1.細(xì)胞種類：人嗜堿細(xì)胞性白血病細(xì)胞系；

2.培養(yǎng)的天數(shù)：5d；

3.放大倍速：倒置顯微鏡X20；

4.培養(yǎng)基種類：RPMI1640+10%新生牛血清；

5.細(xì)胞狀態(tài)與特征簡述：細(xì)胞呈圓形，懸浮生長。

編輯pptHeLa細(xì)胞

1.細(xì)胞種類：人HeLa細(xì)胞傳代培養(yǎng)；

2.培養(yǎng)的天數(shù)：7d；

3.放大倍速：倒置顯微鏡X200；

4.培養(yǎng)基種類：DMEM+10%小牛血清；

5.細(xì)胞狀態(tài)與特征簡述：細(xì)胞呈多角形，貼壁生長。編輯pptK562細(xì)胞

1.細(xì)胞種類：K562〔人慢性紅白血病細(xì)胞株〕；

2.培養(yǎng)的天數(shù)：傳代后2天；

3.放大倍數(shù)：倒置顯微鏡X10；

4.培養(yǎng)基種類：RPMI1640+10%胎牛血清，4mMGlutamine；

5.細(xì)胞狀態(tài)與特征簡介：懸浮生長，少數(shù)貼壁，喜愛成團(tuán)懸浮。編輯ppt三、培養(yǎng)細(xì)胞的生長特點(diǎn)編輯ppt〔一〕貼附〔二〕接觸抑制〔三〕密度抑制編輯ppt四、培養(yǎng)細(xì)胞的生長和增殖過程編輯ppt〔一〕組織培養(yǎng)細(xì)胞生命期(LifeSpanofCultureCells)培養(yǎng)細(xì)胞生命期，是指細(xì)胞在培養(yǎng)中持續(xù)增殖和生長的時(shí)間。包括原代培養(yǎng)期、傳代培養(yǎng)期及衰退期。編輯ppt正常培養(yǎng)的細(xì)胞周期編輯ppt游離期懸浮，胞質(zhì)回縮，全部細(xì)胞變?yōu)閳A球形。吸附期貼附底物，一般24小時(shí)內(nèi)貼壁。潛伏期此時(shí)細(xì)胞有生長活動(dòng)，根本無增殖。細(xì)胞株潛伏期一般為6～24小時(shí)。對數(shù)生長期細(xì)胞數(shù)隨時(shí)間變化成倍增長，活力最正確，最適合進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。停止期〔平臺(tái)期〕細(xì)胞長滿瓶壁后，細(xì)胞雖有活力但不再分裂機(jī)制：接觸抑制、密度依賴性編輯ppt原代培養(yǎng)(PrimaryCulture)期也稱初代培養(yǎng)，即從體內(nèi)取出組織接種培養(yǎng)到第一次傳代階段，一般持續(xù)1-4周。特點(diǎn)：細(xì)胞呈活潑移動(dòng)，可見細(xì)胞分裂，但不旺盛。與體內(nèi)原組織在形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能活動(dòng)上相似性大。編輯ppt傳代期特點(diǎn)：在全生命期中此期的持續(xù)時(shí)間最長，細(xì)胞增殖旺盛，并能維持二倍體核型。傳代：體內(nèi)細(xì)胞生長在動(dòng)態(tài)平衡環(huán)境中，而組織培養(yǎng)細(xì)胞的生存環(huán)境是培養(yǎng)瓶、皿或其它容器，生存空間和營養(yǎng)是有限的。當(dāng)細(xì)胞增殖到達(dá)一定密度后，那么需要?jiǎng)e離出一局部細(xì)胞和更新營養(yǎng)液，否那么將影響細(xì)胞的繼續(xù)生存，這一過程叫傳代。初代培養(yǎng)的細(xì)胞一經(jīng)傳代后便改稱做細(xì)胞系〔CellLine〕。編輯ppt衰退期特點(diǎn)：此期細(xì)胞仍然生存，但增殖很慢或不增殖，最后衰退凋亡。編輯ppt〔二〕體外培養(yǎng)細(xì)胞一代生存期潛伏期指數(shù)增生期停滯期所謂細(xì)胞的“一代〞是指從細(xì)胞接種到別離再培養(yǎng)的一段時(shí)間。編輯ppt〔三〕單個(gè)細(xì)胞的生長過程編輯ppt〔四〕、體外培養(yǎng)細(xì)胞的遺傳學(xué)特征〔1〕核型變化〔2〕永生化和惡變〔3〕細(xì)胞性別編輯ppt〔五〕、體外培養(yǎng)細(xì)胞的生存環(huán)境〔一〕無污染環(huán)境〔二〕溫度〔三〕氣體環(huán)境和氫離子濃度編輯ppt〔六〕、體外培養(yǎng)細(xì)胞生存所需根本物質(zhì)〔1〕糖〔2〕氨基酸〔3〕維生素〔4〕促生長因子〔5〕其它物質(zhì)編輯ppt〔七〕細(xì)胞凍存和復(fù)蘇細(xì)胞深低溫保存的根本原理是：在－70℃以下時(shí)，細(xì)胞內(nèi)的酶活性均己停止，即代謝處于完全停止?fàn)顟B(tài)，故可以長期保存。細(xì)胞低溫保存的關(guān)鍵：在于通過0~20℃階段的處理過程。在此溫度范圍內(nèi)，水晶呈針狀，極易招致細(xì)胞的嚴(yán)重?fù)p傷。編輯ppt編輯ppt凍存和復(fù)蘇的原那么：慢凍快融慢凍程序4℃10分鐘－20℃30分鐘－80℃16-18小時(shí)(或隔夜)液氮罐長期儲(chǔ)存。編輯ppt凍存管

1.2ml2ml，5ml編輯ppt液氮罐編輯ppt編輯ppt細(xì)胞復(fù)蘇方法〔1〕從液氮中取出冷凍管，迅速投入37～38℃水浴中，使其融化〔1分鐘左右〕；〔2〕5分鐘內(nèi)用培養(yǎng)液稀釋至原體積的10倍以上；〔3〕低速離心10分鐘；〔4〕去上清，加新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng)剛復(fù)蘇的細(xì)胞。編輯ppt編輯ppt低溫保護(hù)劑的應(yīng)用在細(xì)胞凍存時(shí)參加低溫保護(hù)劑，能大大提高凍存效果。常用的低溫保護(hù)劑是DMSO，它是一種滲透性保護(hù)劑。也有用甘油的凍存液：含20%血清培養(yǎng)基10%DMSO〔或10％甘油〕DMSO液用培養(yǎng)液配好，防止因臨時(shí)配制產(chǎn)熱而傷害細(xì)胞。編輯ppt細(xì)胞欲冷凍保存時(shí)，細(xì)胞濃度應(yīng)該多少？

冷凍管內(nèi)細(xì)胞數(shù)目一般為1×106cells/ml融合瘤細(xì)胞那么以5×106cells/ml為宜。編輯ppt細(xì)胞的運(yùn)輸技術(shù)編輯ppt〔八〕細(xì)胞培養(yǎng)的污染和檢測細(xì)胞污染的種類:細(xì)菌、酵母菌、霉菌和病毒污染源:無菌操作技術(shù)不當(dāng);操作室環(huán)境不佳;污染之血清;污染之細(xì)胞.編輯ppt細(xì)菌培養(yǎng)液被洋蔥佰克霍爾德菌污染了。洋蔥佰克霍爾德菌〔Burkholderiacepacia〕原屬假單胞菌屬，是植物病原菌。編輯ppt白色念珠菌污染編輯ppt真菌感染

編輯ppt支原體污染電鏡照片,煎蛋狀和其他形狀編輯ppt編輯ppt

細(xì)菌和真菌的污染和檢測肉眼直接觀察法培養(yǎng)檢查法顯微鏡觀察法編輯pptⅡ.支原體的污染和檢測Hayflick培養(yǎng)基直接培養(yǎng)法DNA熒光染色法PCR方法相差顯微鏡觀察法測出細(xì)胞株有支原體污染時(shí)，應(yīng)直接滅菌后丟棄，以防止污染其它細(xì)胞株。編輯ppt病毒的污染和檢測細(xì)胞的直接觀察動(dòng)物接種檢查電子顯微鏡觀察免疫學(xué)檢查PCR技術(shù)編輯ppt第三節(jié)建立細(xì)胞系或細(xì)胞株編輯ppt一、體外培養(yǎng)細(xì)胞的種類和命名〔一〕初代培養(yǎng)(原代培養(yǎng))初代培養(yǎng)又稱原代培養(yǎng)，即直接從體內(nèi)取出的細(xì)胞、組織和器官進(jìn)行的第一次的培養(yǎng)物。一旦已進(jìn)行傳代培養(yǎng)(subculture)的細(xì)胞，便不再稱為初代培養(yǎng)，而改稱為細(xì)胞系。編輯ppt原代培養(yǎng)

直接從體內(nèi)取出的細(xì)胞進(jìn)行的第一次培養(yǎng)物。優(yōu)點(diǎn)：組織細(xì)胞剛脫離機(jī)體，生物性狀尚未發(fā)生較大變化，在一定程度上能夠反映體內(nèi)的狀態(tài)。大鼠肝細(xì)胞原代培養(yǎng)

1.細(xì)胞種類：大鼠原代肝細(xì)胞；

2.培養(yǎng)的天數(shù)：剛別離，未經(jīng)培養(yǎng)；

細(xì)胞狀態(tài)與特征簡述：剛別離時(shí)球形透亮，貼壁后呈不規(guī)那么。編輯ppt編輯ppt編輯ppt(二〕傳代培養(yǎng)將細(xì)胞從一個(gè)培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移到另一個(gè)培養(yǎng)瓶即稱為傳代培養(yǎng)原代培養(yǎng)的細(xì)胞在生長、繁殖一定時(shí)間后，由于空間缺乏或細(xì)胞密度過大導(dǎo)致營養(yǎng)枯竭，會(huì)影響細(xì)胞的生長，因此需要進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，即傳代或稱為傳代培養(yǎng)。HepG2細(xì)胞

細(xì)胞種類：人肝腫瘤細(xì)胞；

培養(yǎng)的天數(shù)：傳代培養(yǎng)2天；

細(xì)胞狀態(tài)與特征簡述：呈多角型、不規(guī)那么貼壁生長，成團(tuán)聚集。

編輯ppt編輯ppt編輯ppt根據(jù)細(xì)胞生長的恃點(diǎn)，傳代方法有3種：1．懸浮生長細(xì)胞傳代離心法傳代：離心〔1000轉(zhuǎn)/分〕去上清，沉淀物加新培養(yǎng)液后再混勻傳代。2．半懸浮生長細(xì)胞傳代〔Hela細(xì)胞〕此類細(xì)胞局部呈現(xiàn)貼壁生長現(xiàn)象，但貼壁不牢，可用直接吹打法使細(xì)胞從瓶壁脫落下來，進(jìn)行傳代。3．貼壁生長細(xì)胞傳代采用酶消化法傳代。常用的消化液有0.25％的胰蛋白酶液。細(xì)胞傳代方法編輯ppt首次傳代本卷須知細(xì)胞生長密度不高時(shí)，不能急于傳代；原代培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞需控制消化時(shí)間；吹打已消化的細(xì)胞應(yīng)減少機(jī)械損傷；首次傳代時(shí)細(xì)胞接種數(shù)量要多一些；首次傳代培養(yǎng)的pH應(yīng)偏低些；小牛血清濃度可加大至15%～20%左右。編輯ppt細(xì)胞計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)結(jié)果以每毫升細(xì)胞數(shù)表示細(xì)胞計(jì)數(shù)的原理和方法與血細(xì)胞計(jì)數(shù)相同血細(xì)胞計(jì)數(shù)器：手工計(jì)數(shù)細(xì)胞Coulter計(jì)數(shù)儀：人工計(jì)數(shù)編輯ppt細(xì)胞計(jì)數(shù)步驟1、將血球計(jì)數(shù)板及蓋片擦拭干凈，并將蓋片蓋在計(jì)數(shù)板上。2、將細(xì)胞懸液吸出少許，滴加在蓋片邊緣，使懸液充滿蓋片和計(jì)數(shù)板之間。3、靜置3分鐘。4、鏡下觀察，計(jì)算計(jì)數(shù)板四大格細(xì)胞總數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml＝4大格細(xì)胞總數(shù)/4×104

注意：壓線細(xì)胞只計(jì)左側(cè)和上方的。鏡下偶見由兩個(gè)以上細(xì)胞組成的細(xì)胞團(tuán)，應(yīng)按單個(gè)細(xì)胞計(jì)算，假設(shè)細(xì)胞團(tuán)占10%以上，說明分散不好，需重新制備細(xì)胞懸液。編輯ppt編輯ppt編輯ppt培養(yǎng)細(xì)胞活力測定細(xì)胞活力：總細(xì)胞中活細(xì)胞所占的百分比由組織中別離細(xì)胞一般也要檢查活力，以了解別離的過程對細(xì)胞是否有損傷作用。復(fù)蘇后的細(xì)胞也要檢查活力，了解凍存和復(fù)蘇的效果。編輯ppt測定方法臺(tái)盼藍(lán)法活細(xì)胞不被染色，死細(xì)胞染成藍(lán)色。流式細(xì)胞儀細(xì)胞活性指標(biāo)通常包括細(xì)胞膜對核酸染料的通透性，代謝活性，膜電位等。編輯ppt四唑鹽〔MTT〕比色法四唑鹽〔MTT〕商品名為噻唑藍(lán)；MTT比色法的原理：活細(xì)胞中琥珀脫氫酶能將四唑鹽復(fù)原成不溶干水的藍(lán)紫色產(chǎn)物甲臢〔formazan)，并沉淀在細(xì)胞中，而死細(xì)胞沒有這種功能。二甲亞砜〔DMSO〕能溶解沉積在細(xì)胞中藍(lán)紫色結(jié)晶物，溶液顏色深淺與所含的formazan量成正比。甲臢染料在A570nm處產(chǎn)生吸收值，用酶標(biāo)儀測定OD值；編輯ppt傳代本卷須知接種數(shù)量為5×104～8×105個(gè)/ml傳代密度太低，細(xì)胞容易死亡，表現(xiàn)出細(xì)胞在到達(dá)增長前有較長的滯留期。培養(yǎng)液由于pH下降而呈現(xiàn)黃色，說明細(xì)胞已經(jīng)到達(dá)最大密度需要換液或進(jìn)行傳代培養(yǎng)。如果是單層貼壁的細(xì)胞，等長滿培養(yǎng)瓶外表，即可進(jìn)行傳代。編輯ppt細(xì)胞系〔CellLine〕

培養(yǎng)物開始第一次傳代培養(yǎng)后的細(xì)胞有限細(xì)胞系〔FiniteCellLine〕連續(xù)細(xì)胞系或無限細(xì)胞系〔InfiniteCellLine〕腫瘤細(xì)胞系或株

我國已建細(xì)胞系主要為這類細(xì)胞。腫瘤細(xì)胞系多由癌瘤建成，多呈類上皮型細(xì)胞具有不死性和異體接種致瘤性。編輯ppt細(xì)胞株細(xì)胞株:用單細(xì)胞別離培養(yǎng)增殖形成的具特定生長特性的細(xì)胞群。再由原細(xì)胞株進(jìn)一步別離培養(yǎng)出與原株性狀不同的細(xì)胞群，亦可稱之為亞株。編輯ppt克隆細(xì)胞株

從一個(gè)經(jīng)過生物學(xué)鑒定的細(xì)胞系用單細(xì)胞別離培養(yǎng)或通過篩選購方法，由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群，稱細(xì)胞株。編輯ppt細(xì)胞培養(yǎng)板

6孔，12孔，24孔，48孔96孔

編輯ppt二倍體細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞染色體數(shù)目具有與原供體二倍細(xì)胞染色體數(shù)相同或根本相同(2n細(xì)胞占75＞或80％以上)的細(xì)胞群，稱二倍體細(xì)胞培養(yǎng)。二倍體細(xì)胞在正常情況下具有限生命期，故屬有限細(xì)胞系。編輯ppt腫瘤細(xì)胞系或株是現(xiàn)有細(xì)胞系中最多的一類，我國已建立細(xì)胞系主要為這類細(xì)胞。腫瘤細(xì)胞系多由癌瘤建成，多呈上皮細(xì)胞型，常已傳幾十代或百代以上，并并具有不死性和異體接種致瘤性。編輯ppt對已建成的各種細(xì)胞系或細(xì)胞株習(xí)慣上都給以名稱；細(xì)胞的命名無嚴(yán)格統(tǒng)一規(guī)定，大多采用有一定意義縮寫字或代號(hào)表示。但不管什么形式，均不宜太長，以便記憶和了解，今列舉以下幾種代表性的細(xì)胞名稱供參考；HeLa：為供體患者的性名(來源于宮頸癌)CHO：中國地鼠卵巢細(xì)胞(ChineseHamsterOvary)宮—743：宮頸癌上皮細(xì)胞，1974年3月建立NIH3T3：美國國立衛(wèi)生研究所(NationalInstituteofHealth)建立,每3天傳代一次，每次接種3×106細(xì)胞／毫升。細(xì)胞系或細(xì)胞株的命名編輯ppt二、建立細(xì)胞系〔或株〕的要求〔一〕組織來源