訶子中鰓帶刺成分的含量測定

訶子中鰓帶刺成分的含量測定

有機(jī)子是君子科植物的成熟果實(shí)。具有澀腸止瀉,斂肺利咽作用,臨床用于久瀉久痢,便血脫肛,肺虛喘咳,久咳不止,咽痛音啞。訶子中主要含鞣質(zhì)成分,此成分具有收斂性,有沉淀蛋白或凝集蛋白之功,可能與中醫(yī)認(rèn)識(shí)的收澀作用有關(guān)。有報(bào)道,鞣質(zhì)的煎出量以先煎為高,并且隨著煎煮時(shí)間的延長而升高,又有報(bào)道,鞣質(zhì)受熱破壞或聚合,其破壞程度隨加熱時(shí)間延長而增大,報(bào)道結(jié)果不盡相同。本文采用干酪素法測定訶子中鞣質(zhì)的含量,以探討不同煎煮方法對(duì)訶子中鞣質(zhì)含量的影響。1實(shí)驗(yàn)材料1.1特芬材料訶子購自湖南省望城縣藥材公司,經(jīng)鑒定符合《中國藥典》(1995年版)規(guī)定。1.2內(nèi)標(biāo)物的測定鞣酸(分析純,遵義市第2化工廠);干酪素(化學(xué)純,成都化學(xué)試劑廠);Folin試劑(鎢酸鈉A.R50g,加85%磷酸40ml和蒸餾水375ml,混合,加熱回流3h,冷后再加水稀釋至500ml,避光保存);0.1Mr醋酸-醋酸鈉緩沖液(pH5.0);日本島津UV-2501型紫外可見分光光度儀;電動(dòng)振蕩機(jī)。2實(shí)驗(yàn)方法2.1樣品溶液的制備2.1.1水浴中保濕各取干燥訶子果實(shí)粗粉約4g,精密稱定,置200ml錐形瓶中,加入沸水80ml,加蓋,分別置于20℃、40℃、60℃、80℃水浴中保溫浸泡60min。用4層紗布過濾,藥渣用適量蒸餾水洗滌2次,洗液與濾液合并,加蒸餾水至100ml。2.1.2改性處理,添加因液各取干燥訶子果實(shí)(塊狀2~3mm)約4g,置200ml燒杯中,加入80ml蒸餾水,依表中條件、不浸泡或浸泡不同時(shí)間,以直火加熱不同時(shí)間(沸后計(jì)時(shí)),煎煮期間不斷補(bǔ)充蒸餾水,以保證體積不變。用4層紗布過濾,藥渣用適量蒸餾水洗滌2次,洗液與濾液合并,加蒸餾水至100ml。2.2重量測定2.2.1對(duì)照溶液的制備精密稱取經(jīng)80℃干燥2h的鞣酸,用30%甲醇配制成每1ml含1mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。2.2.2吸收度的測定精密吸取對(duì)照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml分別于10ml棕色容量瓶中,加30%甲醇至5.0ml,然后加0.1Mr醋酸-醋酸鈉緩沖液(pH5.0)至刻度,搖勻。分別精密吸取此溶液各1.0ml于10ml棕色容量瓶中,各加Folin試劑0.5ml,混勻,再加5%碳酸鈉溶液至刻度,搖勻。于室溫放置20min后,以蒸餾水作空白,在波長720nm處測定吸收度。以濃度對(duì)吸收度求得回歸方程為A=0.00744C+0.0041r=0.9992說明在10~50μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。2.2.3干u3000酸鈉緩沖液配制精密吸取樣品液10ml,置蒸發(fā)皿中,水浴蒸干,放冷,以30%甲醇溶解并定量轉(zhuǎn)移至150ml容量瓶中,用30%甲醇稀釋至刻度。精密吸取上述甲醇液2.0ml,置25ml棕色容量瓶中,加0.1Mr醋酸-醋酸鈉緩沖液(pH5.0)10.0ml,30%甲醇稀釋至刻度,混勻(溶液Ⅰ)。精密吸取溶液Ⅰ10.0ml,置已盛有干酪素250mg的50ml棕色容量瓶中,在振蕩器上振蕩1h,然后過濾,濾液搖勻(溶液Ⅱ)。分別精密吸取溶液Ⅰ和Ⅱ各1.0ml,置10ml棕色容量瓶中,照標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下,測定吸收度為A1和A2,以兩吸收度之差(△A)代入回歸方程,求得鞣質(zhì)濃度,計(jì)算出樣品中鞣質(zhì)的含量。3不同浸泡時(shí)間的鞣質(zhì)含量實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示:同樣熱水浸泡60min,隨水浴溫度的升第3期陳娟,等不同煎煮方法對(duì)訶子中鞣質(zhì)含量的影響9高,鞣質(zhì)浸出量呈增大趨勢。同樣煎煮30min、水浸30min、60min及不浸泡的鞣質(zhì)含量相差不大,但浸泡6h,12h含量明顯升高。說明在短時(shí)間內(nèi)浸泡與不浸泡對(duì)鞣質(zhì)含量的影響意義不大,但延長浸泡時(shí)間(6h,12h)有助于鞣質(zhì)的浸出。同樣浸泡30min,直火煎煮不同時(shí)間,煎液中鞣質(zhì)的含量當(dāng)煎煮時(shí)間在1h之內(nèi),隨著煎煮時(shí)間的延長而呈增長趨勢,但煎煮1~3h的煎液鞣質(zhì)含量無明顯差異。4含量測定結(jié)果的比較及研究的選擇關(guān)于鞣質(zhì)含量的測定方法,《中國藥典》用皮粉法,但此法測出的鞣質(zhì)含量與藥物的療效不相符合;呂湘林設(shè)計(jì)了鞣質(zhì)與Zn2+生成絡(luò)合物沉淀的絡(luò)合量法,方法雖較簡便快捷,但測定數(shù)據(jù)和皮粉法無顯著差異;羅文毓等用改進(jìn)的干酪素法測定了大黃、兒茶、訶子、五倍子中鞣質(zhì)含量,并與皮粉法、絡(luò)合量法進(jìn)行了比較,實(shí)驗(yàn)表明皮粉法,絡(luò)合量法測定結(jié)果明顯高于改進(jìn)的干酪素法,并認(rèn)為干酪素法只與有療效的鞣質(zhì)結(jié)合,而無療效的鞣質(zhì)(如鞣質(zhì)的氧化產(chǎn)物等)則不被測定,而藥典皮粉法、絡(luò)合量法因無選擇性,把無療效的鞣質(zhì)也一并測定了。因此,本文選用干酪素法測定訶子中鞣質(zhì)含量,以避免測定方法對(duì)結(jié)果的影響。有關(guān)加熱溫度、時(shí)間對(duì)鞣質(zhì)含量影響的報(bào)道不少,但結(jié)果卻不盡相同。羅文毓證明大黃中鞣質(zhì)受熱破壞或聚合,其破壞程度與加熱時(shí)間有關(guān);賈天柱等對(duì)訶子不同炮制品做了鞣質(zhì)含量比較研究,結(jié)果表明炒訶子、麩煨訶子、面煨訶子鞣質(zhì)含量均低于生訶子;蔣紀(jì)洋等卻證明生訶子經(jīng)煨、炒、燙后鞣質(zhì)含量增高,且提高砂溫(燙制)、滑石粉溫度(煨制),鞣質(zhì)含量也增加。本試驗(yàn)表明,短時(shí)間浸泡(1h之內(nèi))對(duì)鞣質(zhì)的浸出含量無明顯影響,但長時(shí)間浸泡(6~12h)并煎煮0.5h,鞣質(zhì)的含量明顯增加;煎煮1h以上,鞣質(zhì)的含量增加不明顯,對(duì)工業(yè)生產(chǎn)節(jié)省能源有一定意義。造成這種差別的原因,可能有二:一是含量測定方法選擇的不一致;如有用皮粉法的