復(fù)合菌種益生菌制劑對蛋雞生產(chǎn)效果的影響

復(fù)合菌種益生菌制劑對蛋雞生產(chǎn)效果的影響

作為一種新型的綠色添加劑，其環(huán)保效果是通過改善微生態(tài)平衡對動物產(chǎn)生有益影響。這是微生物飼料的一種可以直接食用的新鮮食品（完整，1989）。它具有無殘留、無抗藥性、無環(huán)境、改善動物生長性能等優(yōu)點（gaskis等人，2002）。從20世紀(jì)90年代開始,益生菌在畜禽生產(chǎn)中的應(yīng)用與開發(fā)已經(jīng)成為國內(nèi)外學(xué)者研究的熱點(Zhao等,2007;Plumed-Ferrer等,2004;范會蘭,2009;肖發(fā)沂,2008)。Bruno(2007)、唐志剛等(2010)、劉輝等(2009)學(xué)者的研究報道表明,益生菌能夠促進(jìn)蛋雞的生產(chǎn)性能、提高蛋品質(zhì)、增加抗病能力。從目前的資料來看,益生菌的作用效果,無論是單一菌種的發(fā)酵產(chǎn)物還是幾種微生物的混合發(fā)酵產(chǎn)物,無論是在飲水中添加還是在飼料中添加,都還不太穩(wěn)定,這主要與益生菌的種類、活菌含量(添加比例)、雞的日齡和應(yīng)激等條件有關(guān)(吳建忠,2005)。研究結(jié)果表明,目前市場上占有率較高的益生菌產(chǎn)品主要是乳酸菌類和枯草芽孢桿菌類產(chǎn)品(趙劍闖等,2010)。單獨的枯草芽孢桿菌和乳酸菌在動物生產(chǎn)中的應(yīng)用效果均有報道(胡長慶等,2008;徐基利等,2010),然而二者組合在一起使用,使用效果的穩(wěn)定性是否將會得到進(jìn)一步提高,卻鮮有報道。本研究以從雞腸道內(nèi)分離篩選的枯草芽孢桿菌、乳酸桿菌作為益生菌株,利用發(fā)酵培養(yǎng)分別制備單一菌種和復(fù)合菌種益生菌制劑,在140日齡羅曼褐商品蛋雞基礎(chǔ)日糧上,按照質(zhì)量比0.1%比例,分別添加不同益生菌制劑,進(jìn)行蛋雞產(chǎn)蛋性能、蛋品質(zhì)及經(jīng)濟效益分析,目的在于探討單一菌種和復(fù)合菌種益生菌制劑對蛋雞生產(chǎn)效果的影響,為復(fù)合益生菌制劑在蛋雞生產(chǎn)上的應(yīng)用與推廣提供依據(jù)。1材料和方法1.1材料表面1.1.1試驗細(xì)菌雞源枯草芽孢桿菌、乳酸桿菌益生菌株,由鄭州牧業(yè)工程高等?？茖W(xué)校微生物實驗室提供。1.1.2試驗動物133日齡羅曼褐商品蛋雞,由開封市尉氏縣某蛋雞養(yǎng)殖場提供。1.1.3硫酸鐵、碳酸鈣硫酸鎂膏雞源枯草芽孢桿菌活化培養(yǎng)基為營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基,發(fā)酵培養(yǎng)基為葡萄糖1.5%、淀粉0.2%、豆粕粉3%、硫酸錳0.1%、磷酸氫二鉀0.3%、磷酸二氫鉀0.15%、硫酸鎂0.05%、酵母膏0.02%、氯化鐵0.01%、碳酸鈣0.01%,pH7.0;乳酸桿菌活化培養(yǎng)基為MRS培養(yǎng)基,發(fā)酵培養(yǎng)基為:葡萄糖2.0%、蛋白胨1.0%、牛肉膏0.5%、酵母膏0.5%、蕃茄汁10%,pH5.0。1.1.4hzq型搖床PX-250B型生化培養(yǎng)箱(上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠);HZQ-Q型搖床(哈爾濱東聯(lián)電子技術(shù)開發(fā)有限公司);BMR系列中試發(fā)酵罐(50L)(上海傲中生物工程設(shè)備有限公司)等。1.1.5試驗時間和地點試驗于2010年10月至2010年12月在開封市尉氏縣某蛋雞養(yǎng)殖場進(jìn)行。1.1.6分組、試驗方案選取體況相似的133日齡羅曼褐商品蛋雞2160只,隨機分為4組,每組3個重復(fù),每個重復(fù)180只,依次為對照組、試驗1組、試驗2組、試驗3組;各試驗組在基礎(chǔ)日糧基礎(chǔ)上分別添加質(zhì)量比0.1%的乳酸桿菌益生菌制劑、枯草芽孢桿菌益生菌制劑、復(fù)合益生菌制劑。預(yù)試期7d,正試期80d。對照組、試驗組飼養(yǎng)環(huán)境、飼喂、管理方式均按照雞場常規(guī)要求進(jìn)行。試驗日糧配方按照林冬梅等(2006)方法進(jìn)行配制。1.2方法1.2.1生死制劑的制備1.2.1.菌種活化培養(yǎng)將保存的乳酸桿菌、枯草芽孢桿菌斜面菌種分別接種于MRS固體培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基,37℃培養(yǎng),進(jìn)行菌種的活化培養(yǎng);然后將活化菌種分別接種于500mLMRS液體培養(yǎng)基、營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中,分別37與35℃、150r/min搖床培養(yǎng)。1.2.1.最佳液體發(fā)酵條件將培養(yǎng)28h乳酸桿菌種子培養(yǎng)液,以體積分?jǐn)?shù)5%接種量接入于50L發(fā)酵罐中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)。最佳液體發(fā)酵條件為溫度40℃、培養(yǎng)時間28h、初始pH5.0,即為乳酸桿菌培養(yǎng)物。將該培養(yǎng)物用麥麩吸附低溫烘干,即為乳酸桿菌益生菌制劑,分裝4℃保存。1.2.1.發(fā)酵、培養(yǎng)、發(fā)酵將培養(yǎng)18h的枯草芽孢桿菌種子液以體積分?jǐn)?shù)5%接種量接入于50L發(fā)酵罐中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)。最佳培養(yǎng)溫度為35℃,初始pH7.0,每隔2h取樣一次,測定樣品中的產(chǎn)芽孢率,當(dāng)產(chǎn)芽孢率達(dá)到90%以上時即可停止發(fā)酵。將發(fā)酵液固定化于麥麩上,干燥、粉碎,分裝4℃保存。1.2.1.4復(fù)合生動制劑的制備把乳桿菌益生菌制劑、枯草芽孢桿菌益生菌制劑按照1∶1比例混合,即得復(fù)合益生菌制劑,分裝4℃保存。1.2.2菌種含菌量的規(guī)定對于飼用益生菌制劑,活菌量是益生菌發(fā)揮作用的關(guān)鍵指標(biāo)之一(張璐等,2008),中國正式批準(zhǔn)生產(chǎn)的微生態(tài)制劑對含菌數(shù)量的規(guī)定是芽孢桿菌含量≥5×108CFU/g;乳酸桿菌≥1×107CFU/g。利用稀釋平板法檢測各益生菌制劑產(chǎn)品中活菌數(shù)(CFU/g)。1.2.3兩組實際耗料量及料蛋比、死正交試驗計算①每天觀察記錄每組產(chǎn)蛋數(shù)與日產(chǎn)蛋量,分別計算每組平均日產(chǎn)蛋量、平均蛋重、產(chǎn)蛋率,具體公式為:平均日產(chǎn)蛋量(g/(只·日))=總產(chǎn)蛋量/試驗天數(shù)/試驗雞數(shù);平均蛋重(g/個)=總產(chǎn)蛋量/產(chǎn)蛋總數(shù);產(chǎn)蛋率(%)=有效蛋數(shù)/試驗期雞累加數(shù)×100%;②以組為單位記錄每日耗料量,計算平均日耗料量、料蛋比,具體公式為:平均日耗料量(g/(只·日))=總耗料量/試驗天數(shù)/試驗雞累加數(shù);料蛋比=總耗料量/總產(chǎn)蛋量;③記錄每組每日的死亡或淘汰雞數(shù),計算死淘率,死淘率(%)=死亡或淘汰雞數(shù)/試驗初雞數(shù)×100%;④蛋品質(zhì)測定:于試驗中期(180日齡)和結(jié)束時(220日齡),每組分別隨機抽取30枚雞蛋,按照蘇青云等(2010)方法測定蛋殼厚度、蛋殼強度、蛋白高度、哈氏單位、蛋黃比重和蛋形指數(shù)。1.2.4dunpan氏法分析試驗數(shù)據(jù)采用SPSS10.0軟件中單因素方差分析(ANOVA)法分析,并用Duncan氏比較,結(jié)果中的數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示,P<0.05表示差異顯著。2結(jié)果與分析2.1活菌數(shù)測定經(jīng)檢測制備的乳酸桿菌益生菌制劑、枯草芽孢桿菌益生菌制劑、乳酸桿菌—枯草芽孢桿菌復(fù)合益生菌制劑3類益生菌產(chǎn)品中的活菌數(shù)分別為2.97×109、3.16×109、2.47×109CFU/g,達(dá)到國家標(biāo)準(zhǔn)要求。2.2對平均產(chǎn)蛋量、產(chǎn)蛋率和不合格率的影響由表1可知,在蛋雞飼料中添加益生菌制劑可以顯著提高平均蛋重,試驗各組分別比對照組提高2.06%、2.02%、3.97%(P<0.05),試驗3組比試驗1、2組分別提高了1.87%、1.91%(P<0.05),試驗1、2組間差異不顯著(P>0.05);與對照組相比,試驗各組可以顯著提高平均日產(chǎn)蛋量,分別比對照組提高4.39%、4.96%、7.87%(P<0.05),試驗3組與試驗1、2組差異顯著,分別提高了3.34%、2.77%;可以顯著提高產(chǎn)蛋率,各試驗組比對照組分別提高2.31%、2.88%、3.91%(P<0.05),試驗3組與試驗1、2組差異顯著,分別提高了1.56%、1.00%(P<0.05);有降低不合格蛋率、死淘率、平均日耗料量趨勢,但各組間差異不顯著(P>0.05);可以顯著降低料蛋比,其中試驗1、2組間差異不顯著,試驗3組顯著優(yōu)于試驗1、2組,分別降低了1.99%、1.49%。說明乳酸桿菌—枯草芽孢桿菌復(fù)合益生菌制劑較乳酸桿菌益生菌制劑、枯草芽孢桿菌益生菌制可以顯著提高平均蛋重、平均日產(chǎn)蛋量、產(chǎn)蛋率,顯著降低料蛋比,而對不合格蛋率、死淘率、平均日耗料量的影響不顯著。2.3提高雞蛋蛋白哈夫單位值由表2可知,與對照組相比,在蛋雞飼料中添加益生菌制劑可以顯著提高A級蛋的比例(蛋殼顏色比色扇6級以上蛋占驗蛋總數(shù)比例),各試驗組分別比對照組提高了11.26%、14.67%、21.45%(P<0.05),其中試驗3組顯著優(yōu)于試驗1、2組,分別提高了9.16%、5.91%(P<0.05);可以顯著降低蛋形指數(shù)、顯著提高蛋比重和蛋殼厚度,但試驗各組間差異不顯著(P>0.05);可顯著提高蛋黃比率,分別比對照組提高9.66%、13.42%、18.11%(P<0.05),其中試驗3組顯著優(yōu)于試驗1、2組,分別提高了7.71%、4.14%(P<0.05);對于改善雞蛋蛋白哈夫單位值效果不明顯。說明在蛋雞飼料中添加益生菌制劑可以顯著提高蛋品質(zhì),其中乳酸桿菌—枯草芽孢桿菌復(fù)合益生菌制劑在提高A級蛋比例、提高蛋黃比率方面,顯著優(yōu)于枯草芽孢桿菌益生菌制劑、乳酸桿菌益生菌制劑。2.4毛利潤檢測由表3可知,對照組、試驗組分別獲得的毛利潤為5839.85、6649.81、6838.38、7372.92元,各試驗組分別比對照組提高了13.87%、17.10%、26.25%;每只雞的毛利潤分別為11.12、12.45、12.81、13.80元,各試驗組分別比對照組提高了11.96%、15.20%、24.10%;與乳酸桿菌益生菌制劑、枯草芽孢桿菌益生菌制相比,乳酸桿菌—枯草芽孢桿菌復(fù)合益生菌制劑使每只雞毛利潤分別提高了10.84%、7.73%。說明益生菌制劑可以顯著提高蛋雞養(yǎng)殖經(jīng)濟效益,其中乳酸桿菌—枯草芽孢桿菌復(fù)合益生菌制劑的應(yīng)用效果顯著優(yōu)于乳酸桿菌益生菌制劑、枯草芽孢桿菌益生菌制。3復(fù)合益生菌制劑的制備試驗結(jié)果表明,在蛋雞生產(chǎn)中應(yīng)用益生菌制劑可以顯著提高平均蛋重、日產(chǎn)蛋數(shù)、產(chǎn)蛋率,降低料蛋比,提高蛋品質(zhì),其中乳酸桿菌—枯草芽孢桿菌復(fù)合益生菌制劑的應(yīng)用效果顯著優(yōu)于乳酸桿菌益生菌制劑、枯草芽孢桿菌益生菌制劑,使每只雞毛利潤分別提高了10.84%、7.73%;這是因為乳酸菌通過產(chǎn)生有機酸抑制有害菌的生長,通過誘導(dǎo)特異性和非特異性免疫應(yīng)答途徑增強動物機體免疫力,通過分解食物中的蛋白質(zhì)、糖類,合成維生素,提高飼料養(yǎng)分的消化率和生物學(xué)效價;芽孢桿菌通過生物奪氧來達(dá)到抑菌效果,通過在腸道發(fā)揮免疫佐劑的作用,提高動物體液免疫和細(xì)胞免疫水平,通過分泌蛋白質(zhì)、淀粉、纖維素等生物活性酶提高畜禽對飼料中難以消化物質(zhì)的利用程度。兩者的聯(lián)合使用,在蛋雞生產(chǎn)中表現(xiàn)出了很好的協(xié)同作用效果。益生菌制劑的益生作用是通過有益微生物在動物體內(nèi)一系列生理活動來實現(xiàn)的,其最終效果同施加的益生菌的數(shù)量密切相關(guān),數(shù)量不夠,在體內(nèi)不能形成菌群優(yōu)勢,難以起到益生作用;數(shù)量過多,不僅造成不必要的浪費,而且還會破壞動物體內(nèi)正常菌群的穩(wěn)定。據(jù)文獻(xiàn)報道(張旭等,2010;劉輝等,2009;余東游等,2010),目前