蛋白質(zhì)濃度與吸光值檢量線-OoCities課件

石油降解菌PseudomonasstutzeriRMRCPAH5

奎林氧化還原酶純化與生化性質(zhì)研究

指導(dǎo)教授易

逸

波

博士Yet-PoleI，Ph.D

林

忠

亮

博士Chung-LiangLin，Ph.D.報(bào)告人徐冠永

Kwuan-YungShi

石油降解菌PseudomonasstutzeriRMRC報(bào)告架構(gòu)研究背景與現(xiàn)況研究目的文獻(xiàn)回顧研究架構(gòu)研究方法結(jié)果與討論結(jié)論與展望報(bào)告架構(gòu)研究背景與現(xiàn)況一.研究背景與現(xiàn)況(1)石油主要成分包括飽和烴類、芳香族類、瀝青、樹脂等柏油類，並含有少量的氮、氧及硫化物。自工業(yè)革命以來，稱得上是最重要的能量及物質(zhì)來源，其同時可以做為燃料以及石化工業(yè)原料的性質(zhì)在現(xiàn)代甚至是近三十年內(nèi)都占有舉足輕重的地位。一.研究背景與現(xiàn)況(1)石油主要成分包括飽和烴類、芳香族類、一.研究背景與現(xiàn)況(2)在開採、運(yùn)送、產(chǎn)製相關(guān)原料的過程中，因人為、設(shè)備失誤或交通意外而引起工業(yè)事故，導(dǎo)致大量之油品或石化相關(guān)物質(zhì)洩漏至環(huán)境中。這些不屬於生物體且不存在於自然環(huán)境中之外來物質(zhì)分解甚為緩慢。一.研究背景與現(xiàn)況(2)一.研究背景與現(xiàn)況(3)大規(guī)模的原油洩漏對海生及陸生生物具有長期性危害，其中危害可以分為兩大類：物理性危害主要是原油黏度高，遮蓋海面造成透光性及通氣性下降威脅到海底生物化學(xué)性危害則是石油對生物具有直接毒性。

一.研究背景與現(xiàn)況(3)大規(guī)模的原油洩漏對海生及陸生生物具有一.研究背景與現(xiàn)況(4)當(dāng)石油洩漏到環(huán)境中若僅依靠自然的光分解和物化作用來清除的速度相對較緩慢，目前所採取的處理方式為下面三種：

處理方式方法敘述物理性藉吸油棉、攔油繩(網(wǎng))、沖洗法、高壓蒸氣洗除法和超音波震盪將懸浮於水中的油污打散或集中予以清除?；瘜W(xué)性使用分散劑(dispersants)或界面活性劑(surfactants)藉此來增加油品的乳化性，使其呈現(xiàn)小油滴狀以利清除。生物性以環(huán)境中之微生物來分解油污，具有不會造成二次污染之優(yōu)點(diǎn)，由於石油的成分多半是碳?xì)浠衔?，是可以被微生物?dāng)作碳源或能量的來源，利用微生物進(jìn)行降解可將複雜的大分子有機(jī)物分解成小分子。一般而言，利用微生物對NAHs進(jìn)行生物分解有不錯的效率，但是這類微生物的分解能力較易受到真實(shí)環(huán)境因子的限制而降低其降解速率。一.研究背景與現(xiàn)況(4)當(dāng)石油洩漏到環(huán)境中若僅依靠自然的光分一.研究背景與現(xiàn)況(5)PolycyclicaromaticHydrocarbons(PAH)污染物中通常約2/3都含有雜環(huán)的結(jié)構(gòu)，而含有N官能基的雜環(huán)化合物被稱為NAHs(NitrogenHeterocyclicAromaticHydrocarbons)。一般係由有機(jī)物經(jīng)過高溫(500~800oC)狀態(tài)下不完全氧化的熱解作用與其他有機(jī)顆粒再結(jié)合所產(chǎn)生的。一.研究背景與現(xiàn)況(5)一.研究背景與現(xiàn)況(6)NAHs在自然環(huán)境系統(tǒng)的降解途徑如下1.陽光照射而產(chǎn)生的光氧化作用(Photooxidation)進(jìn)而被分解2.在水體方面的物理作用上，污染物常因水體本身的流動而被乳化，形成所謂的乳膠(Emulsion)，這些被水所包覆的膠體就會因重力作用而自然沉降水底並遭底泥吸附。3.最重要的主要降解途徑是以揮發(fā)方式，較光解或生物分解來得重要。一.研究背景與現(xiàn)況(6)NAHs在自然環(huán)境系統(tǒng)的降解途徑如一.研究背景與現(xiàn)況(7)本研究的對象是含氮雜環(huán)碳?xì)浠衔镏械目?，此污染物是由兩個六碳環(huán)相連組成，其中一個碳環(huán)的第一個碳被氮元素所取代。相關(guān)衍生物是在第二、三或第四個碳的位置上被加上一個官能基(如圖)。一.研究背景與現(xiàn)況(7)本研究的對象是含氮雜環(huán)碳?xì)浠衔镏械亩?研究目的(1)臺灣本土所篩選出具降解奎林能力之菌株，以往研究中幾乎只針對生長最適化、酵素活性測試及代謝過程等生理作用機(jī)制進(jìn)行探討。目前對於奎林氧化還原酶(Qor)的分子生物層面與其生化性質(zhì)則未有較深入的探討。本研究著重奎林氧化還原酶之純化與其生化性質(zhì)探討研究為主要目的，針對奎林降解菌株P(guān)seudomonasstutzeriRMRCPAH5的Qor進(jìn)行研究。二.研究目的(1)臺灣本土所篩選出具降解奎林能力之菌株，以二.研究目的(2)若能只利用酵素製劑就達(dá)到油污分解的效果，即可避免去生物復(fù)育法對環(huán)境可能產(chǎn)生菌相甚至於是生態(tài)系的變化。站在減少環(huán)境衝擊的角度而言無寧是一個更好的選擇。二.研究目的(2)三.文獻(xiàn)回顧(1)作者年代內(nèi)容Coughlan等人1980研究中顯示能催化此種hydroxylation反應(yīng)的酵素是一種含鉬的去氫酶。Tada等人1980目前在降解奎林的研究中發(fā)現(xiàn)，不同污染源所分離出的菌種(不論是好氧或厭氧菌)在降解奎林時的方式不外乎兩種代謝途徑。Shukla等人1986PseudomonasputidaChinIK則可利用Coumarin或Furan-2-carboxylate當(dāng)作主要的碳源，在此反應(yīng)代謝作用中崁入環(huán)內(nèi)的氧原子是由水分子衍生的，而並非直接來自於氧分子的介入，故一般認(rèn)為

PseudomonasputidaChinIK的奎林代謝途徑是經(jīng)由

coumarinpathway

。Liu等人1994針對厭氧環(huán)境下，Quinoline在甲烷生成狀態(tài)下可被快速分解，硫酸還原態(tài)次之，在去硝化狀態(tài)下則不分解。微生物降解奎林之相關(guān)研究三.文獻(xiàn)回顧(1)作者年代內(nèi)容Coughlan等人1980研三.文獻(xiàn)回顧(2)

奎林降解的分解情形某些分解菌以奎林當(dāng)作基質(zhì)利用其實(shí)仍需要經(jīng)過一段時間的馴化動作，但直至馴化階段的菌株尚無法完全利用奎林作為唯一碳源，尤其是生長環(huán)境中有其它較易分解且可當(dāng)作碳源來源的化合物，或是有抗生素存在的情況下。但PAH5的特性並非是由一生長時期的結(jié)束來誘使另一階段的反應(yīng)作用；相反的它是一種同時分解兩種以上化合物的代謝方式。三.文獻(xiàn)回顧(2)

奎林降解的分解情形某些分解菌以奎林當(dāng)作基三.文獻(xiàn)回顧(3)

酶的特性酶，泛指所有有機(jī)催化劑它具有幾種性質(zhì):1.在反應(yīng)中不消耗或生成2.不改變反應(yīng)物生成的總量3.每秒鐘可催化1000到100，000個分子在生物體內(nèi)只需要很少量三.文獻(xiàn)回顧(3)

酶的特性酶，泛指所有有機(jī)催化劑三.文獻(xiàn)回顧(4)

各種輔因子介紹酶在作用中的活性常來自於它的構(gòu)型，為了維持構(gòu)型有時候會需要金屬離子，這個一般會稱為輔因子金屬離子在酵素中的功能Fe過氧化酶Mn氧化光合作用Mo氧化還原酶W嗜熱菌中氧的傳輸ZnDNA，RNA形成酶Ni氫化酶三.文獻(xiàn)回顧(4)

各種輔因子介紹酶在作用中的活性常來自於它三.文獻(xiàn)回顧(5)

鉬酸鹽在菌體生長中的地位奎林的環(huán)狀結(jié)構(gòu)被裂解時會衍生出一鎢酸鹽的物質(zhì)，進(jìn)而有效的抑制分解菌的生長，故一般來說奎林降解實(shí)驗(yàn)的培養(yǎng)基中會添加鉬酸鹽(molybdstate)來達(dá)到專一性對抗的目的，以利菌種的生長並維持分解酵素的活性(Blaschkeetal.，1991)。

三.文獻(xiàn)回顧(5)

鉬酸鹽在菌體生長中的地位奎林的環(huán)狀結(jié)構(gòu)被三.文獻(xiàn)回顧(6)

色層分析法的純化概述色層分析法：係利用分離物在流動相中移動的速度不同加以分離。三.文獻(xiàn)回顧(6)

色層分析法的純化概述色層分析法：係利用分三.文獻(xiàn)回顧(7)

色層分析法與吸附模式膠體一般可視為多孔性的小球體，而蛋白質(zhì)則視為固相的顆粒。Langmuir的假設(shè)1.同一處不會發(fā)生堆疊吸附2.兩相近吸附點(diǎn)不會互相干擾3.各吸附點(diǎn)的吸附能力相同三.文獻(xiàn)回顧(7)

色層分析法與吸附模式膠體一般可視為多孔性三.文獻(xiàn)回顧(8)

色層分析法與吸附模式模式中參數(shù)介紹α:吸/脫附平衡常數(shù)Vo:空白體積(1-α)*Vo/Vt:溶質(zhì)分子(在此指蛋白質(zhì))保持自由不被膠體吸附的機(jī)率Vt:總有效空間三.文獻(xiàn)回顧(8)

色層分析法與吸附模式模式中參數(shù)介紹三.文獻(xiàn)回顧(8)

色層分析法與吸附模式溶質(zhì)流率=Fout(1-α)*Vo/Vt(理想式)此式可以用於調(diào)整管柱體積與流動相速率三.文獻(xiàn)回顧(8)

色層分析法與吸附模式三.文獻(xiàn)回顧(9)

吸附簡化模式mt=m+q，pt=p+q，α=q/pt取代q=ptα，m=mt-q，p=pt-q可以得出Kp=m*p/q=[mt*(1-α)]/αp：蛋白質(zhì)在溶液中總濃度m：總有效結(jié)合位址q：結(jié)合相的蛋白質(zhì)濃度Rf：溶質(zhì)移動到液相中的移動率Kp=(m*p)/q：蛋白質(zhì)與固定相的分離常數(shù)α=(1-Rf)：溶質(zhì)的移動率總有效吸附位址濃度為mt總蛋白質(zhì)濃度為pt(自由加結(jié)合)三.文獻(xiàn)回顧(9)

吸附簡化模式mt=m+q，pt=p+q，三.文獻(xiàn)回顧(10)

離心回收數(shù)學(xué)模式T=[9/2*η/ω2*γ2*(ρ–ρo)]*lnxb/xtη：溶液動態(tài)黏度ω:離心陀角速度γ:顆粒的平均粒徑ρ:含有懸浮顆粒的溶液平均密度ρ0:空白溶液的密度xb:離心管底到軸心的距離xt:顆粒密度中心到軸心的距離三.文獻(xiàn)回顧(10)

離心回收數(shù)學(xué)模式T=[9/2*η/ω2三.文獻(xiàn)回顧(11)

離心回收數(shù)學(xué)模式純水ρo=1丙酮ρo=0.93無水蛋白質(zhì)ρ=1.34飽和蛋白質(zhì)水溶液ρ=1/2(1+1.34)=1.17其(ρ–ρo)=1.17-1=0.17>0而若以丙酮為溶劑則(ρ–ρo)=0.2藉由更換液相可以控制離心最低所需時間三.文獻(xiàn)回顧(11)

離心回收數(shù)學(xué)模式純水ρo=1三.文獻(xiàn)回顧(12)

離心回收數(shù)學(xué)模式飽和硫酸銨溶液在水中濃度約4M，比重1.2353M磷酸鈉溶液在pH7.4時比重高達(dá)1.35(ρ–ρo)=((1.34+1.35)-1.35)<0則T式不成立，離心無法收集其中的蛋白質(zhì)此式也可以應(yīng)用於緩衝液的選擇三.文獻(xiàn)回顧(12)

離心回收數(shù)學(xué)模式飽和硫酸銨溶液在水中濃菌體自休眠中活化離心收集擴(kuò)大培養(yǎng)初步馴化破菌處理離子交換管柱層析疏水性膠體管柱層析硫銨分劃膠體過濾管柱層析電泳檢定菌體收集段酵素粗抽段層析純化段酵素鑑定段四.研究架構(gòu)透析脫鹽過濾濃縮菌體自休眠中活化離心收集擴(kuò)大培養(yǎng)初步馴化破菌處理離子交換管柱五.研究方法(1)實(shí)驗(yàn)菌種奎林降解菌：PseudomonasstutzeriRMRCPAH5【格蘭氏陰性(Gramnegative)短桿菌，具運(yùn)動性。在好氧環(huán)境環(huán)境下會生長，厭氧環(huán)境下不生長，不會產(chǎn)生內(nèi)生孢子】五.研究方法(1)實(shí)驗(yàn)菌種五.研究方法(2)菌株的培養(yǎng)以LB培養(yǎng)基批次培養(yǎng)至對數(shù)生長期後期菌體的收集

以離心機(jī)10000rpm、離心時間10分鐘，收集菌體菌體的破碎：以超音波震盪在冰水浴中加以破碎，作用時間一秒鐘，冷卻時間一秒鐘為1循環(huán)，每20循環(huán)停機(jī)冷卻20秒，全部操作時間為15分鐘五.研究方法(2)菌株的培養(yǎng)五.研究方法(3)將粗抽液以硫酸銨分劃做分離分離成五個Fraction，分別測定活性及蛋白質(zhì)濃度將活性最高的分劃部分，冰存預(yù)備做為後續(xù)純化步驟所用五.研究方法(3)將粗抽液以硫酸銨分劃做分離硫酸銨在液相中與水分子競爭吸附於蛋白質(zhì)表面示意圖蛋白質(zhì)分子硫酸銨在液相中與水分子競爭吸附於蛋白質(zhì)表面示意圖蛋白質(zhì)分子五.研究方法(3)選擇硫酸銨當(dāng)鹽析工具的理由1.中性且具有很大分子量2.溶劑度在攝氏0~30度變化很小3.溶液密度不影響蛋白質(zhì)沉降4.可以與螯合劑結(jié)合保護(hù)酵素5.高濃度鹽可抑制細(xì)菌及原生生物生長6.便宜五.研究方法(3)選擇硫酸銨當(dāng)鹽析工具的理由五.研究方法(4)蛋白質(zhì)濃度測定法此定量方法利用CoomassieBrilliantBlueG-250會與蛋白質(zhì)結(jié)合的特性，在coomassieblue與蛋白質(zhì)結(jié)合後，其顏色會從棕紅色轉(zhuǎn)變成為藍(lán)色，此顏色變化在595nm波長光中有特殊吸收峰，可簡單的用分光光度計(jì)測定。必須配合標(biāo)準(zhǔn)品檢量線做內(nèi)插法五.研究方法(4)蛋白質(zhì)濃度測定法五.研究方法(5)蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)檢量線的製作:將BSA標(biāo)準(zhǔn)品配為10mg/ml?再以連續(xù)稀釋的方法稀釋為1?0.8?0.6?0.4?0.2?0.1(mg/ml)五組，加入檢測用的染劑(coomassieblue20%溶液)取標(biāo)準(zhǔn)品以1比50的比例加入染劑震盪使完全混合再靜置5分鐘後以A.595測定其吸光值。五.研究方法(5)蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)檢量線的製作:五.研究方法(6)有關(guān)酵素的定量有兩種性質(zhì)，一個是酵素的總量?另一個是酵素的活性。酵素總量可以用蛋白質(zhì)濃度測定法測得之，但是有兩種問題會干擾;其中之一是酵素純度問題，另一個問題是酵素活性不一定是100%。

因此需要針對酵素活性做檢測五.研究方法(6)有關(guān)酵素的定量有兩種性質(zhì)，一個是酵素的總量五.研究方法(7)檢測酵素活性，必須建立兩個前提:

１.活性定義２．活性偵測法五.研究方法(7)檢測酵素活性，必須建立兩個前提:五.研究方法(8)酵素確實(shí)的含量，通常以實(shí)際的酵素活性表示，常用的單位有兩種:

1.以units/ml表示，即1ml的抽出液中含有多少unit(單位)的該種酵素活性。2.以unit/mg表示，即抽出液中，每1mg的蛋白質(zhì)含有多少unit(單位)的該種酵素活性。五.研究方法(8)酵素確實(shí)的含量，通常以實(shí)際的酵素活性表示，五.研究方法(9)酵素活性單位(unit)，一般係指在單位時間(通常為分鐘)內(nèi)，酵素催化使得基質(zhì)減少或是產(chǎn)物增加的量。產(chǎn)物增加量μmole每一個活性U=(反應(yīng)時間-分鐘)五.研究方法(9)酵素活性單位(unit)，一般係指在單位時五.研究方法(10)活性分析法係使用INTreduction方法，利用INT接受反應(yīng)中產(chǎn)生的電子並呈現(xiàn)粉紅色的變化。INT=2-p-iodophenyl-3-p-nitrophenyl-5-phenyl-2H-tetrazoliumchlorideINT平常時的溶液為無色微偏淡黃，接受電子之後的產(chǎn)物稱為INTFormazan，為粉紅到紅色，此顏色在503nm波長下有特殊吸收峰，可為分光光度計(jì)所測得。

必須配合標(biāo)準(zhǔn)品的檢量線做內(nèi)插法五.研究方法(10)活性分析法係使用INTreductio五.研究方法(11)使用乙醇將INTformazan溶解懸浮並配成不同濃度的溶液，再模擬活性分析法中的濃度分配稀釋，然後測定其吸光值即可用做活性分析之用。

五.研究方法(11)五.研究方法(12)活性分析的試劑:

1.500λTrisbuffer(with0.75%TritonX-100)2.500λINTsolution(2.5mMinD.D.water)3.50λQuinoline(170mMin2-Propanol)4.10λsample(EnzymeSolution)反應(yīng)五分鐘以後，以攝氏100度水浴一分鐘中止反應(yīng)，待放涼之後，以分光光度計(jì)測定其吸光值。五.研究方法(12)活性分析的試劑:五.研究方法(13)將硫酸銨分劃後的樣本以色層分析法做進(jìn)一步的純化。色層分析法係指利用依據(jù)不同性質(zhì)在相同背景內(nèi)有不同移動速率，產(chǎn)生空間上的分開而將混合物加以分離。移動的速度差異來自於分離物的各種性質(zhì)如顆粒大小、表面帶電性、親/疏水性等等五.研究方法(13)將硫酸銨分劃後的樣本以色層分析法做進(jìn)一步五.研究方法(14)本實(shí)驗(yàn)使用FPLC系統(tǒng)來執(zhí)行色層分析FPLC為Amersham所發(fā)展的系統(tǒng)，可以不用很高的壓力，而其容量更大於HPLC，可用在製備式純化上(樣本量可達(dá)500mg)五.研究方法(14)本實(shí)驗(yàn)使用FPLC系統(tǒng)來執(zhí)行色層分析五.研究方法(15)在實(shí)驗(yàn)中實(shí)際上會看到的圖型五.研究方法(15)在實(shí)驗(yàn)中實(shí)際上會看到的圖型五.研究方法(16)以三根管柱對Qor做純化1.疏水性層析法2.離子交換層析法3.膠體過濾層析法五.研究方法(16)以三根管柱對Qor做純化五.研究方法(17)疏水性層析法

(HydrophobicInteractionChromatography，HIC)

PhenylSepharose6FastFlow(highsub)蛋白質(zhì)分子表面有部份疏水性區(qū)域，若在一極性很強(qiáng)的環(huán)境中，則會被吸附在非極性的固定相擔(dān)體上；若環(huán)境的極性降低，則可被溶離出來。五.研究方法(17)疏水性層析法五.研究方法(18)離子交換層析法(IonExchange)DEAEpharoseFastFlow

利用分子的帶電性質(zhì)進(jìn)行分離，解析力好且具多樣性，是重要而應(yīng)用極廣的純化方法。隨著擔(dān)體不同可以分為兩大類1.陽離子交換膠體2.陰離子交換膠體五.研究方法(18)離子交換層析法(IonExchange五.研究方法(19)膠體過濾法(Gelfiltration)

SephasrylS-300此種膠體顆粒內(nèi)有相當(dāng)長的孔道，越小的分子會在孔道中走的距離越長，導(dǎo)致流出時間越晚(passthrough);相對的，大分子則會從顆粒間空隙直接通過(bypass)，因此流出時間越早。五.研究方法(19)膠體過濾法(Gelfiltration五.研究方法(20)SDS利用膠體電泳將純化後的酵素做分子量大小及等電點(diǎn)的測定。將Enzymesolution加熱到攝氏100度，五分鐘，使其蛋白質(zhì)變性以後放置使其冷卻至室溫。注入膠體開始電泳，結(jié)束之後取出膠片以CoomassieBlue染色並觀察。五.研究方法(20)SDS六.結(jié)果與討論(1)

菌體生長的生長曲線

菌體生長曲線六.結(jié)果與討論(1)

菌體生長的生長曲線菌體生長曲線六.結(jié)果與討論(2)

蛋白質(zhì)濃度與吸光值檢量線

595nm六.結(jié)果與討論(2)

蛋白質(zhì)濃度與吸光值檢量線595nm六.結(jié)果與討論(3)

INTFormazan模擬INT反應(yīng)活性全濃度圖

六.結(jié)果與討論(3)

INTFormazan模擬INT反應(yīng)六.結(jié)果與討論(4)

INTformazan具較高線性範(fàn)圍的細(xì)部圖

六.結(jié)果與討論(4)

INTformazan具較高線性範(fàn)六.結(jié)果與討論(5)

降解Quinoline時間與吸光值對照圖

六.結(jié)果與討論(5)

降解Quinoline時間與吸光值對照六.結(jié)果與討論(6)

酵素位置確認(rèn)結(jié)果

A:發(fā)酵液全液B：離心分離後的菌體C：破菌後粗抽液D：膜蛋白E：使用後的LBF：TrisBuffer（空白組）G：空白未使用過的LBH：BSAStandard六.結(jié)果與討論(6)

酵素位置確認(rèn)結(jié)果A:發(fā)酵液全液六.結(jié)果與討論(7)

硫酸銨分劃各濃度區(qū)蛋白與酵素活性圖改成柱狀圖六.結(jié)果與討論(7)

硫酸銨分劃各濃度區(qū)蛋白與酵素活性圖改成六.結(jié)果與討論(8)

以HIC進(jìn)行疏水性層析法活性與蛋白量比較圖

U六.結(jié)果與討論(8)

以HIC進(jìn)行疏水性層析法活性與蛋白量比六.結(jié)果與討論(8)

疏水性層析法操作條件A.高鹽度buffer40mMTris/HClwith100mMAmmoniumSulfateB.低鹽度buffer10mMTris/HClNoAmmoniumSulfateC.平衡膠體用的buffer100mMTris/HClwith750mMAmmoniumSulfateD.流洗管內(nèi)其他未被吸附的物質(zhì)的流洗液100mMTris/HClwith300mMAmmoniumSulfatepH:8.5流速:40ml/Hr每管收集體積:5ml操作結(jié)束之後,將回收的樣本以透析法脫鹽並用於離子交換法六.結(jié)果與討論(8)

疏水性層析法操作條件A.高鹽度buf六.結(jié)果與討論(9)

離子交換法活性與蛋白量比較圖

六.結(jié)果與討論(9)

離子交換法活性與蛋白量比較圖六.結(jié)果與討論(9)

離子交換層析法操作條件A:低鹽度buffer50mMTris/HClbuffer200mMNaClB:高鹽度buffer50mMTris/HClbuffer700mMNaClC:平衡膠體用兼流洗不吸附蛋白buffer50mMTris/HClbufferpH:8.0流速:100ml/Hr每管收集體積:10ml操作結(jié)束之後,將回收的樣本以濃縮過濾法調(diào)整體積並用於膠體過濾層析法六.結(jié)果與討論(9)

離子交換層析法操作條件A:低鹽度buf六.結(jié)果與討論(10)

膠體過濾法中蛋白質(zhì)量與活性比較圖

六.結(jié)果與討論(10)

膠體過濾法中蛋白質(zhì)量與活性比較圖六.結(jié)果與討論(10)

膠體過濾法操作條件A:流洗buffer: