細菌分離培養(yǎng)與鑒定程序

細菌分離培養(yǎng)與鑒定程序一、 背景記錄1、 豬的臨床癥狀2、 不同豬的發(fā)病階段（早、中、晚、解剖前宰殺還是解剖前已死亡）3、 解剖病變（保存好照片）二、 分離用培養(yǎng)基1、 常用培養(yǎng)基：鮮血瓊脂培養(yǎng)基、巧克力培養(yǎng)基2、 非常用培養(yǎng)基：麥康凱培養(yǎng)基、沙門氏菌選擇性培養(yǎng)基三、 病料的選取和保存1、 首選來自剛宰殺后的活畜禽或死后2-4小時內(nèi)的畜禽2、 得到病料后應該立即進行細菌分離，分離細菌前最長保存時間（在4°C冰箱內(nèi)）最好不要超過3-4小時。分離細菌前應將病料保存在4C冰箱不得放入-20C冰箱。分離細菌后如需要根據(jù)細菌生長鑒定情況來決定病料用途（需再次接種、需再次觸片、需接種動物等等）可先將病料暫存4C冰箱，但不得超過2天。一般情況下分離細菌后應及時將需長期保存的少量病料分裝到塑料瓶中進行記錄保存，多余的病料進行無害化處理。四、 分離路線1、 選擇分離細菌的目標臟器：根據(jù)疑似疾病和病理變化確定，一般選病變比較嚴重的臟器做為分離細菌的目標臟器，并選擇臟器的病健交界處做為細菌分離的最終部位。一頭豬應該選擇多個臟器或部位分離細菌。并對不同部位細菌在整個疾病中的作用有一定的評價，如：心血中的細菌多為全身感染分布的病原；關節(jié)、腸道、創(chuàng)口、及肺臟則可能只是局部分布的細菌。）2、 分離細菌一般采用鮮血瓊脂培養(yǎng)基劃線培養(yǎng)、懷疑存在只能在巧克力培養(yǎng)基上且需要一定二氧化碳才能生長的細菌（如：副豬嗜血桿菌、傳染性胸膜肺炎放線桿菌等）感染時、應同時采用巧克力培養(yǎng)基劃線、放到燭缸進行培養(yǎng)。劃線時應該在做到無菌操作的前提下盡量取較大的一塊組織或較多量的分泌物、先在培養(yǎng)基表面涂布一小片區(qū)域，然后棄去病料再用接種環(huán)從涂布區(qū)域開始進行劃線。這樣一方面可保證分離到病料中的細菌，另一方面也能保證長出單個菌落為進一步鑒定提供方便，同時也為評價病料中細菌含量及不同細菌數(shù)量比例的評價提供依據(jù)。如果病料來自病程較長或死亡動物且細菌種類復雜、難以確定病原菌的情況下、可考慮分離細菌的同時取病料接種小鼠、再從小鼠分離細菌，二者互為參考。3、 細菌的鑒定步驟①生長特性及形態(tài)觀察，②顯微鏡鏡檢，③PCR鑒定，④測序鑒定一種細菌的鑒定并不一定都得經(jīng)過以上4步鑒定，能確定細菌種類即可。4、 進行藥物敏感性實驗5、 細菌的保存每一種細菌經(jīng)鑒定后均應進行編號保存6管到-80^冰箱，保存2管到-20°C冰箱。并及時記錄到細菌檔案中，鑒定清楚的菌種及時送交3-4管全余老師處。6、 細菌血清型的確定及致病性分析有目的的選取分離到的細菌進行進一步實驗。五、每月進行一次病案討論細菌鑒定人員需進行全面的總結報告，總結報告內(nèi)容包括：病料接收時間、地點、臨床背景資料（免疫背景、流行情況、發(fā)病情況、死亡情況、畜主處理情況、效果），病變圖片、該病料相關（該場的抗體檢測結果、病原檢測結果）的實驗室診斷結果、最后處理（最后與畜主的聯(lián)系及建議事宜）。細菌鑒定人員報告完畢后再由大家進行討論分析。同時細菌鑒定人員應整理好病案討論記錄。細菌分離鑒定工作值班表姓名在前的為主時間姓名2012.03王湘、張桂華2012.04錢辛、賀名葉2011.05張桂華、王湘2011.06賀名葉、錢辛2012.07王湘、張桂華注意事項：1、值