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專題2微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用課題1微生物的實驗室培養(yǎng)課后篇鞏固提升基礎(chǔ)鞏固1.以下關(guān)于無菌技術(shù)的敘述,錯誤的是()A.對實驗操作的空間、操作者的衣著和手進行滅菌B.將用于微生物培養(yǎng)的培養(yǎng)皿、接種用具和培養(yǎng)基等進行滅菌C.為避免周圍環(huán)境中微生物的污染,實驗操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進行D.實驗操作時應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍物品相接觸答案A解析對實驗操作的空間、操作者的衣著和手進行清潔和消毒。2.煮沸消毒法與巴氏消毒法的主要區(qū)別是()A.溫度不同B.時間不同C.前者適用于固體消毒,后者適用于液體消毒D.沒有區(qū)別答案A解析煮沸消毒法是指在100℃條件下煮沸5~6min,而巴氏消毒法則是在70~75℃條件下煮30min或在80℃條件下煮15min,二者的關(guān)鍵區(qū)別是溫度不同。3.細菌培養(yǎng)基常在121℃高壓蒸汽滅菌鍋中滅菌。如果只是在100℃溫度下將細菌培養(yǎng)基滅菌,下列生物仍會存活的是()A.大腸桿菌 B.一種青霉菌C.枯草芽孢桿菌的芽孢 D.沙門氏菌答案C解析芽孢是細菌為了抵御外界不良環(huán)境而形成的一種休眠體,100℃的溫度不能將其殺死。4.平板劃線法是微生物培養(yǎng)中常用的接種方法。下列敘述錯誤的是()A.在酒精燈的火焰旁操作可以避免周圍環(huán)境中微生物的污染B.第二次及以后劃線均要從上次劃線末端開始,以達到分離單菌落的目的C.劃線用力大小要適當(dāng),防止劃破培養(yǎng)基,最后一區(qū)域要與第一區(qū)域相連D.接種后需將平板倒置培養(yǎng),防止冷凝水落入培養(yǎng)基造成污染答案C解析無菌技術(shù)要求實驗操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進行,以避免周圍環(huán)境中微生物的污染,A項正確;在第二次及以后的劃線時,總是從上一次劃線的末端開始劃線,這樣做的目的是將聚集的菌體逐漸稀釋以便獲得單個菌落,B項正確;劃線時要避免最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)的劃線相連,因為最后一區(qū)細菌最少,而第一區(qū)細菌最多,如果連在一起則有可能影響單個菌落的分離效果,C項錯誤;接種后需將平板倒置培養(yǎng),防止冷凝水落入培養(yǎng)基造成污染,D項正確。5.稀釋涂布平板法是微生物培養(yǎng)中常用的一種接種方法。下列相關(guān)敘述錯誤的是()A.操作中需要將菌液進行一系列的濃度梯度稀釋B.需將不同稀釋度的菌液分別涂布到固體培養(yǎng)基表面C.不同濃度的菌液均可在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落D.操作過程中對培養(yǎng)基和涂布器等均需進行嚴(yán)格的滅菌處理答案C解析若菌液濃度過大,形成的菌落連在一起,則得不到單個的菌落。6.為了保持菌種的純凈,需要進行菌種的保藏,下列有關(guān)敘述不正確的是()A.對于頻繁使用的菌種,可以采用臨時保藏的方法B.臨時保藏的菌種一般接種到試管的斜面培養(yǎng)基上C.臨時保藏的菌種容易被污染或產(chǎn)生變異D.對于需要長期保存的菌種,可以采用低溫4℃保藏的方法答案D解析對于需要長期保存的菌種,可以采用甘油管藏的方法,保存于20℃的冷凍箱中。7.下表是某微生物培養(yǎng)基的組成成分及對應(yīng)含量,請據(jù)此回答下列問題。編號成分含量①粉狀硫10g②(NH4)2SO40.4g③K2HPO44.0g④MgSO49.25g⑤FeSO40.5g⑥CaCl20.5g將上述物質(zhì)溶解后,用蒸餾水定容到100mL(1)上表培養(yǎng)基可培養(yǎng)的微生物類型是。

(2)若除去成分②,加入(CH2O),該培養(yǎng)基可用于培養(yǎng)。

(3)表中營養(yǎng)成分共有類。

(4)不論何種培養(yǎng)基,在各種成分都溶化后分裝前,要進行的是。

(5)若上表培養(yǎng)基用于菌種鑒定,應(yīng)該增加的成分是。

答案(1)自養(yǎng)型微生物(2)固氮微生物(3)3(4)調(diào)節(jié)pH(5)瓊脂(或凝固劑)解析(1)由題表可知,該培養(yǎng)基中沒有碳源,說明培養(yǎng)的微生物是從外界環(huán)境中獲取碳源的,因此培養(yǎng)的微生物是自養(yǎng)型微生物。(2)該培養(yǎng)基若加入(CH2O),培養(yǎng)基中就有了碳源,但除去成分②,培養(yǎng)基中就沒有了氮源,該培養(yǎng)基就只能用于培養(yǎng)固氮微生物。(3)題表中的營養(yǎng)物質(zhì)有水、無機鹽、無機氮源3類,缺乏碳源和特殊營養(yǎng)物質(zhì)。(4)微生物的生長需要一定的pH,所以培養(yǎng)基分裝前需要調(diào)節(jié)pH。(5)該培養(yǎng)基中無凝固劑,為液體培養(yǎng)基。菌種的純化和鑒定通常利用固體平板培養(yǎng)基以獲得單個菌落,因此需要加入凝固劑,如瓊脂,將液體培養(yǎng)基轉(zhuǎn)變成固體培養(yǎng)基。能力提升8.利用稀釋涂布平板法純化的大腸桿菌,經(jīng)培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)其培養(yǎng)基上出現(xiàn)了多種菌的菌落,不可能的原因是()A.培養(yǎng)基制備過程中被雜菌污染B.接種過程中,無菌操作不符合要求C.系列稀釋時,無菌操作不符合要求D.由大腸桿菌的種類不同造成的答案D解析大腸桿菌培養(yǎng)基中出現(xiàn)了多種菌的菌落,說明被雜菌污染了,雜菌可能來自培養(yǎng)基,也可能是因為操作過程中無菌操作不符合要求。9.下列關(guān)于倒平板及對菌種純化的說法,正確的是()A.倒平板時左手將滅過菌的培養(yǎng)皿蓋完全打開,右手將錐形瓶中培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿(10~20mL),左手立即蓋上培養(yǎng)皿蓋B.使用已滅菌的接種環(huán)及培養(yǎng)基之后不需要再滅菌C.平板冷凝后要將平板倒置,以防皿蓋上的冷凝水落入培養(yǎng)基D.涂布器用火焰灼燒滅菌答案C解析倒平板時用左手的拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙,而不是直接將培養(yǎng)皿蓋完全打開;使用滅過菌的接種環(huán)及培養(yǎng)基之后仍需進行滅菌處理,以免污染環(huán)境或感染操作者;涂布器滅菌時需沾少量酒精引燃。10.在生產(chǎn)、生活和科研實踐中,經(jīng)常通過消毒和滅菌來避免雜菌的污染。請回答下列問題。(1)在實驗室中,玻璃和金屬材質(zhì)的實驗器具(填“可以”或“不可以”)放入干熱滅菌箱中進行干熱滅菌。

(2)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高溫瞬時消毒法,與煮沸消毒法相比,這兩種方法的優(yōu)點是。

(3)密閉空間內(nèi)的空氣可采用紫外線照射消毒,其原因是紫外線能。在照射前,適量噴灑,可強化消毒效果。

(4)水廠供應(yīng)的自來水通常是經(jīng)過(填“氯氣”“乙醇”或“高錳酸鉀”)消毒的。

(5)某同學(xué)在使用高壓蒸汽滅菌鍋時,若壓力達到設(shè)定要求,而鍋內(nèi)并沒有達到相應(yīng)溫度,最可能的原因是。

答案(1)可以(2)在達到消毒目的的同時,營養(yǎng)物質(zhì)損失較少(3)破壞DNA結(jié)構(gòu)消毒液(4)氯氣(5)未將鍋內(nèi)冷空氣排盡解析(1)玻璃和金屬材質(zhì)的實驗器具可以通過干熱滅菌的方法來滅菌。(2)巴氏消毒法是在70~75℃下煮30min或在80℃下煮15min,可以殺死牛奶中的微生物,并使牛奶的營養(yǎng)成分不被破壞;高溫瞬時消毒法是在較短的時間內(nèi)利用高溫殺死微生物,由于時間較短,營養(yǎng)物質(zhì)損失較少。(3)紫外線能破壞DNA結(jié)構(gòu),有消毒、殺菌的作用。在照射前,適量噴灑消毒液,可以強化消毒效果。(4)自來水通常是經(jīng)過氯氣消毒的。(5)使用高壓蒸汽滅菌鍋時,若壓力達到設(shè)定要求,但沒有達到相應(yīng)溫度,最可能的原因是鍋內(nèi)冷空氣沒有排盡。11.請分析回答下列與微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用相關(guān)的問題。(1)圖中是利用法進行微生物接種,把聚集的菌種逐步分散到培養(yǎng)基的表面。為達到這一目的,操作上應(yīng)注意

(答出一點即可)。(2)菌落形成的根本原因是。將乳酸菌接種到徹底滅菌的固體培養(yǎng)基上,要使其正常生長必須給予的條件是。

(3)純化菌株時,通常使用的劃線工具是。劃線的某個平板培養(yǎng)后,第一區(qū)域的劃線上都不間斷地長滿了菌,第二區(qū)域所劃的第一條線上無菌落,其他劃線上有菌落。造成劃線無菌落可能的操作失誤有。

答案(1)平板劃線稀釋①每次劃線前要灼燒接種環(huán);②接種環(huán)冷卻后從上一區(qū)劃線末端開始劃線;③首尾區(qū)不重疊(答出其中一點即可)(2)由單個細菌繁殖成為群體無氧條件(3)接種環(huán)①接種環(huán)灼燒后未冷卻;②劃線未從第一區(qū)域末端開始解析(1)根據(jù)圖示可知,圖中利用的是平板劃線法接種。操作時應(yīng)注意每次劃線前要灼燒接種環(huán),接種環(huán)冷卻后從上一區(qū)劃線末端開始劃線,首尾區(qū)不重疊等。(2)乳酸菌是厭氧細菌,要在無氧條件下培養(yǎng)。(3)純化菌株時,通常用接種環(huán)進行劃線操作。第二區(qū)域劃第一條線時,若接種環(huán)灼燒后未冷卻,會導(dǎo)致所劃第一條線上無菌落。若第二區(qū)域劃第一條線時未從第一區(qū)域末端開始,也會導(dǎo)致第二區(qū)域的第一條線上無菌落。12.下表為牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的成分列表,據(jù)此回答下列問題。成分牛肉膏/g蛋白胨/gNaCl/g蒸餾水含量0.510.5加蒸餾水定容至100mL(1)蛋白胨在培養(yǎng)基中的主要作用是

。

(2)要用此材料配制觀察細菌菌落狀況的培養(yǎng)基,還需添加的成分是。

(3)從配制培養(yǎng)基直到培養(yǎng)完成,所采用的預(yù)防雜菌污染的方法有

(答出三點即可)。(4)在培養(yǎng)基凝固前要擱置斜面,其目的是

。

答案(1)提供碳源和氮源(2)瓊脂(3)高壓蒸汽滅菌、灼燒接種環(huán)、酒精擦手、在火焰旁接種等(4)擴大接種面積解析蛋白胨中有大量的由蛋白質(zhì)水解而成的多肽類等物質(zhì),在培養(yǎng)基中提供碳源、氮源和生長因子。微生物菌落是在固體培養(yǎng)基上形成的,所以此培養(yǎng)基還需添加瓊脂。13.空氣中的微生物在重力等作用下,可以一定程度地沉降。某研究小組欲用平板收集教室空氣中的微生物,以了解教室內(nèi)不同高度空氣中微生物的分布情況。實驗步驟如下:①配制培養(yǎng)基(成分:牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O);②制作無菌平板;③設(shè)置空白對照組和若干實驗組,進行相關(guān)操作;④將各組平板置于37℃恒溫箱中培養(yǎng)一段時間,統(tǒng)計各組平板上菌落的平均數(shù)?;卮鹣铝袉栴}。(1)該培養(yǎng)基中微生物所需的氮來源于。若要完成步驟②,該培養(yǎng)基中的成分X通常是。

(2)步驟③中,實驗組的操作是。

(3)若在某次調(diào)查中,某一實驗組平板上菌落平均數(shù)為36個/平板,而空白對照組的一個平板上出現(xiàn)了6個菌落,這種結(jié)果說明在此次調(diào)查中出現(xiàn)了現(xiàn)象。若將30(即366)個/平板作為本組菌落數(shù)的平均值,該做法(填“正確”或“不正確”)。

答案(1)牛肉膏、蛋白胨瓊脂(2)將各實驗組平板分別放置在教室不同高度的位置上,開蓋暴露相同的一段時間(3)污染不正確解析(1)培養(yǎng)基中的牛肉膏、蛋白胨為微生物的生長既提供了碳源也提供了氮源。微生物培養(yǎng)所采用的培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基,故題中X應(yīng)是瓊脂,在培養(yǎng)基中起凝固劑的作用。(2)本實驗是為了了解教室內(nèi)不同高度空氣中微生物的分布情況,所以應(yīng)選擇不同的高度放置平板,并使之暴露在空氣中一段時間(各組時間相同),以利于空氣中微生物沉附在平板上。(3)空白對照實驗的設(shè)計是不暴露在空氣中,不應(yīng)出現(xiàn)菌落,若出現(xiàn)了菌落說明此次實驗中的平板被污染。用實驗組獲取的菌落的平均值減去污染產(chǎn)生的菌落數(shù),作為實驗的結(jié)果,這種做法不正確,應(yīng)在防止污染的情況下重新實驗,以獲得較準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)。14.回答下列與細菌培養(yǎng)相關(guān)的問題。(1)在細菌培養(yǎng)時,培養(yǎng)基中能同時提供碳源、氮源的成分是(填“蛋白胨”“葡萄糖”或“NaNO3”)。通常,制備培養(yǎng)基時要根據(jù)所培養(yǎng)細菌的不同來調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH,其原因是。硝化細菌在沒有碳源的培養(yǎng)基上(填“能夠”或“不能”)生長,原因是。

(2)用平板培養(yǎng)細菌時一般需要將平板(填“倒置”或“正置”)。

(3)單個細菌在平板上會形成菌落,研究人員通??筛鶕?jù)菌落的形狀、大小、顏色等特征來初步區(qū)分不同種的微生物,原因是。

(4)有些使用后的培養(yǎng)基在丟棄前需要經(jīng)過處理,這種處理可以殺死丟棄物中所有的微生物。

答案(1)蛋白胨不同細菌生長繁殖所需的最適pH不同能夠硝化細菌可以利用空氣中的CO2作為碳源(2)倒置(3)在一定的培養(yǎng)條件下,不同種微生物表現(xiàn)出各自穩(wěn)定的菌落特征(4)滅菌解析(1)能同時提供碳源、氮源的成分必須同時含有碳和氮兩種元素,蛋白胨、葡萄糖和NaNO3中,只有蛋白胨同時含有這兩種元素。不同細菌生長繁殖所

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