生物學(xué)細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)用液及培養(yǎng)基

主要內(nèi)容培養(yǎng)用液培養(yǎng)基（液）主要內(nèi)容培養(yǎng)用液培養(yǎng)基（液）培養(yǎng)用液細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，除需要培養(yǎng)基，還需要大量的液體，包括·水·鹽溶液·消化液·緩沖液·維生素液等3培養(yǎng)用液·水?細(xì)胞培養(yǎng)所必須的成分（吸收與代謝）?維持細(xì)胞形態(tài)、調(diào)節(jié)滲透壓及PH?細(xì)胞培養(yǎng)對(duì)水質(zhì)的要求極高培養(yǎng)用液·水?自來水?蒸餾水 （三蒸）?離子交換水培養(yǎng)用液·水培養(yǎng)用液·水?超純水將水中的導(dǎo)電介質(zhì)幾乎完全去除，又將水中不離解的膠體物質(zhì)、氣體及有機(jī)物均去除至很低程度的水。電阻率大于18MΩ*cm，或接近18.3MΩ*cm極限值。培養(yǎng)用液·平衡鹽溶液（BSS）?組織細(xì)胞培養(yǎng)基中常用的基本液體。?功能維持滲透壓、調(diào)節(jié)PH、供給細(xì)胞生存所需能量及無機(jī)離子成分。?用途合成培養(yǎng)基（液）的基礎(chǔ)液及用于洗滌組織、細(xì)胞等培養(yǎng)用液·平衡鹽溶液9培養(yǎng)用液·消化液-用途?分散組織、細(xì)胞?使細(xì)胞脫離附著底物培養(yǎng)用液·消化液-成分?胰蛋白酶?二乙烯四乙酸二鈉（EDTA）?膠原酶溶液培養(yǎng)用液·消化液-胰蛋白酶胰蛋白酶：從動(dòng)物胰臟分離的一種水解酶功能：使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)水解、細(xì)胞分散配置比例：1:125或1:250培養(yǎng)用液·消化液-胰蛋白酶注意事項(xiàng)配置胰蛋白酶消化液時(shí)應(yīng)采用不含Ca2+、Mg2+和血清的液體使用時(shí)，一旦細(xì)胞分散后，立即用適量含血清的培養(yǎng)基終止消化反應(yīng)培養(yǎng)用液·消化液-EDTAEDTA是一種化學(xué)螯合劑，能螯合Ca2+、Mg2+而使細(xì)胞分離，對(duì)細(xì)胞毒性較小。工作濃度：

0.02%培養(yǎng)用液·消化液-EDTA注意事項(xiàng)①

需用不含離子的平衡鹽緩沖液溶解②

與胰酶聯(lián)合使用可提高消化效率③

EDTA不能被血清中和，消化后應(yīng)徹底清洗培養(yǎng)基（液）維持體外細(xì)胞生存和生長(zhǎng)的基本溶液，是組織細(xì)胞培養(yǎng)最重要的條件分類·天然培養(yǎng)基·合成培養(yǎng)基培養(yǎng)基（液）-天然培養(yǎng)基取自動(dòng)物體液或從動(dòng)物的組織中分離提取優(yōu)點(diǎn)·營(yíng)養(yǎng)成分豐富，培養(yǎng)效果良好缺點(diǎn)·成分復(fù)雜，來源受限培養(yǎng)基（液）-天然培養(yǎng)基類型·生物性液體（血清）·組織浸液（胚胎浸液）·凝固劑（血漿）·……培養(yǎng)基（液）-天然培養(yǎng)基·血清?最常用的天然培養(yǎng)基?促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖、粘附并中和usu?常用的血清為小牛血清和胎牛血清培養(yǎng)基（液）-天然培養(yǎng)基·血清-使用注意事項(xiàng)?使用前需滅活?-20℃保存，避免反復(fù)凍融?優(yōu)質(zhì)血清外觀為透明、無溶血、淡黃色液體、無沉淀，滅活后顏色略深?保證無菌，且球蛋白含量越低者質(zhì)量越佳培養(yǎng)基（液）-天然培養(yǎng)基·血清-鑒定方法?細(xì)胞集落形成率?連續(xù)傳代培養(yǎng)?生長(zhǎng)曲線法培養(yǎng)基（液）-天然培養(yǎng)基·血漿?可支持培養(yǎng)組織塊，且還供給細(xì)胞生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，但易發(fā)生液化。?常用禽類血漿 小于一歲的雄性雞類該類血漿鈣水平恒定，激素含量少，易于采集，整個(gè)采集過程需要注意無菌培養(yǎng)基（液）-合成培養(yǎng)基對(duì)細(xì)胞體內(nèi)生存環(huán)境中各種已知物質(zhì)在體外人工條件下模擬為細(xì)胞提供了一個(gè)近似體內(nèi)生存環(huán)境、又便于控制和標(biāo)準(zhǔn)化的體外生存環(huán)境。培養(yǎng)基（液）-合成培養(yǎng)基·成分?氨基酸-L型氨基酸

谷氨酰胺?維生素?糖類?無機(jī)離子?其他成分培養(yǎng)基（液）-合成培養(yǎng)基·常用培養(yǎng)基?199培養(yǎng)液?Eagle培養(yǎng)液?RPMI-1640?Ham培養(yǎng)液培養(yǎng)基（液）-合成培養(yǎng)基·常用培養(yǎng)基?199培養(yǎng)液在Earle生理鹽水的基礎(chǔ)上添加各種添加成分。因配置比較復(fù)雜，現(xiàn)已較少使用。培養(yǎng)基（液）-合成培養(yǎng)基·常用培養(yǎng)基?Eagle培養(yǎng)Eagle等人在該培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，將13種氨基酸和8種維生素濃度調(diào)整至接近細(xì)胞內(nèi)含量水平，制成最低必須培養(yǎng)基（Eagle’sminimum

essential

media,MEM）MEM為目前常用的培養(yǎng)基培養(yǎng)基（液）-合成培養(yǎng)基·常用培養(yǎng)基?Eagle培養(yǎng)BMEMEM高糖型-DMEM低糖型生長(zhǎng)快粘附差培養(yǎng)基（液）-合成培養(yǎng)基·常用培養(yǎng)基?RPMI-1640最初用于培養(yǎng)小鼠白血病細(xì)胞，故該培養(yǎng)基特別適合懸浮細(xì)胞生長(zhǎng)。RPMI-1640不但適于腫瘤細(xì)胞亦適用于正常細(xì)胞。目前應(yīng)用最廣泛的培養(yǎng)基培養(yǎng)基（液）-無血清培養(yǎng)基·為什么要使用無血清培養(yǎng)基？?血清成分復(fù)雜，干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果?血清含有毒性物質(zhì)、抑制性物質(zhì)、影響某些細(xì)胞功能30培養(yǎng)基（液）-無血清培養(yǎng)基·無血清培養(yǎng)基-缺點(diǎn)?通用性較差?細(xì)胞增殖緩慢、成本較高?可能失去血清的一些保護(hù)性作用31培養(yǎng)基（液）-無血清培養(yǎng)基32Ham’s

12+DMEM·無血清培養(yǎng)基-配置方法基礎(chǔ)培養(yǎng)液 輔加成分培養(yǎng)機(jī)制營(yíng)養(yǎng)成分酶抑制劑培養(yǎng)用液·水?細(xì)胞培養(yǎng)所必須的成分（吸收與代謝）?維持細(xì)胞形態(tài)、調(diào)節(jié)滲透壓及PH?細(xì)胞培養(yǎng)對(duì)水質(zhì)的要求極高培養(yǎng)用液·水?自來水?蒸餾水 （三蒸）?離子交換水培養(yǎng)用液·消化液-成分?胰蛋白酶?二乙烯四乙酸二鈉（EDTA）?膠原酶溶液培養(yǎng)用液·消化液-胰蛋白酶胰蛋白酶：從動(dòng)物胰臟分離的一種水解酶功能：使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)水解、細(xì)胞分散配置比例：1:125或1:250培養(yǎng)基（液）-合成培養(yǎng)基對(duì)細(xì)胞體內(nèi)生存