梅毒檢測技術(shù)及進(jìn)展

梅毒的實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)

及進(jìn)展梅毒概述實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)及臨床意義梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測策略探討主要內(nèi)容

梅毒概述梅毒起源于美洲，然后從美洲到西班牙，從歐洲到亞洲印度，1505年從印度傳入廣東嶺南（“廣東瘡”），后傳到全國各地。少數(shù)民族地區(qū)居民梅毒感染率=10%牧區(qū)人群梅毒感染率=48%部分城市地區(qū)人群梅毒感染率=5%部分農(nóng)村地區(qū)人群梅毒感染率=2-3%（此幻燈片內(nèi)容源自中國疾病預(yù)防控制中心性病控制中心陳祥生教授）我國梅毒流行的歷史-經(jīng)濟(jì)繁榮的附帶品51350萬我國根據(jù)2011年全國HIV哨點(diǎn)監(jiān)測患病率結(jié)果進(jìn)行初步估計(jì)：我國梅毒疾病負(fù)擔(dān)占全球的比重？我國占全球8%，亞太地區(qū)22%，是西太區(qū)平均水平的2倍STDepi&control-ChenXS我國梅毒報(bào)告疫情趨勢隱性梅毒一期梅毒二期梅毒胎傳梅毒三期梅毒7梅毒報(bào)告病例數(shù)444,952例，甲乙類傳染病第3位淋病報(bào)告病例數(shù)103,085例，甲乙類傳染病第6位2013年全國梅毒、淋病病例報(bào)告82011年全國HIV哨點(diǎn)監(jiān)測資料(NCAIDS)我國的梅毒在哪里？9重點(diǎn)人群中的梅毒高危人群？10我國預(yù)防與控制梅毒規(guī)劃衛(wèi)生部2010年6月下發(fā)《中國預(yù)防與控制梅毒規(guī)劃（2010-2020年）》STDepi&control-ChenXS

實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)及臨床意義下列說法是否正確？二期梅毒時(shí)，TPPA和RPR兩種血清學(xué)試驗(yàn)100％陽性RPR只能用于梅毒初篩RPR滴度應(yīng)在1：8以上才能作為診斷隱性梅毒，梅毒血液標(biāo)本的核酸檢測陰性，表明無梅毒螺旋體感染接受抗梅治療的嬰兒，隨訪18個(gè)月后TPPA試驗(yàn)陽性，RPR試驗(yàn)陰性可確診為胎傳梅毒----12常用梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測方法病原學(xué)檢測血清學(xué)檢測病原學(xué)檢查原理：一期、二期梅毒時(shí)，取硬下疳、扁平濕疣、黏膜斑等皮損部位組織液或淋巴結(jié)穿刺術(shù)得到的組織液，在暗視野顯微鏡下，光線從聚光器的邊緣斜射到涂片上的梅毒螺旋體而發(fā)出亮光，從而可根據(jù)其特殊形態(tài)和運(yùn)動(dòng)方式進(jìn)行檢測。方法：（1）暗視顯微鏡檢查

（2）鍍銀染色法

（3）核酸檢測（血液標(biāo)本？）注：梅毒螺旋體目前體外人工培養(yǎng)還沒有獲得成功，僅能通過接種兔睪丸等部位進(jìn)行有限增殖。

病原學(xué)檢查不同標(biāo)本核酸檢測研究初步結(jié)果：

皮損部位標(biāo)本：陽性率85%

血漿標(biāo)本陽性率：0%

全血標(biāo)本：一期梅毒陽性率：0%

二期梅毒陽性率：36%

隱性梅毒陽性率：20%：病原學(xué)檢查的臨床意義螺旋體檢查是診斷早期梅毒的最佳方法，對于患者的早期診斷、及時(shí)治療、預(yù)后和盡早切斷傳染源都有十分重要的意義。如未見到梅毒螺旋體，并不能排除患梅毒的可能性。梅毒血清學(xué)檢測方法(1)非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)（非特異性梅毒抗體）(2)梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)

（特異性梅毒抗體）兩類方法。問題：

為什么梅毒診斷需要上述兩類血清學(xué)檢測方法？非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)原理梅毒螺旋體一旦感染人體，宿主可對螺旋體表面的脂質(zhì)作出免疫應(yīng)答，產(chǎn)生抗類脂抗原的抗體（非特異性抗體）。未經(jīng)治療的病人，其血清內(nèi)的非特異性抗體可長期存在。經(jīng)正規(guī)治療后，非特異性抗體可以逐漸減少滴度至轉(zhuǎn)為陰性。問題：

臨床上非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)為什么需要做定性和定量兩種檢測方法？

非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)原理方法包括：（1）快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)(RPR)

（2）甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)（TRUST）（3）性病研究實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)(VDRL)等。基本成分是心磷脂卵磷脂和膽固醇抗原抗體結(jié)合形成復(fù)合物，凝集成網(wǎng)狀沉淀顆粒被肉眼所見上述方法的敏感性和特異性都基本相似非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)原理示意圖非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)操作要點(diǎn)1、儀器：水平旋轉(zhuǎn)儀，轉(zhuǎn)速？轉(zhuǎn)幅？2、定性試驗(yàn)加樣：吸取0.05mL血清(漿)放在卡片圈中，

并均勻地涂布在整個(gè)圈內(nèi)加抗原：將抗原輕輕搖勻，用9號針頭加1滴抗原反應(yīng)：水平旋轉(zhuǎn)儀旋轉(zhuǎn)8分鐘(23℃-29℃）

，亮光下觀察結(jié)果？滴/mL，1滴=？ul非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)操作要點(diǎn)1、儀器：水平旋轉(zhuǎn)儀，轉(zhuǎn)速、轉(zhuǎn)幅2、定性試驗(yàn)加樣：吸取0.05mL血清(漿)放在卡片圈中，

并均勻地涂布在整個(gè)圈內(nèi)加抗原：將抗原輕輕搖勻，用9號針頭加1滴抗原反應(yīng)：水平旋轉(zhuǎn)儀旋轉(zhuǎn)8分鐘(23℃-29℃）

，亮光下觀察結(jié)果60滴/mL，1滴=17ul100r/min約18mm非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)操作要點(diǎn)3、定量試驗(yàn)稀釋夜準(zhǔn)備：在反應(yīng)紙板圈內(nèi)加入50uL生理鹽水（根據(jù)需要確定圈數(shù)),勿將鹽水涂開加樣：吸取50uL血清（漿）與各圈中鹽水作系列稀釋，并涂布整個(gè)圈內(nèi)。下同定性試驗(yàn)。？1:21:41:81:161:321:641:2561:1281:512定量試驗(yàn)結(jié)果判斷血清稀釋度結(jié)果？1:21:41:81:16+----？++---？++++-？問題：定量試驗(yàn)原倍血清滴度是多少？問題：定量試驗(yàn)血清稀釋需要使用試管嗎？TRUST1:16非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果判斷RPR1:2561:11:21:41:81:161:11:21:41:81:161:321:641:1281:2561:5121:321:641:1281:2561:512非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)臨床意義早期梅毒（一期、二期）經(jīng)足量規(guī)則抗梅毒治療后一期梅毒1年后轉(zhuǎn)為陰性二期梅毒2年后轉(zhuǎn)為陰性。晚期梅毒治療后血清滴度下降緩慢，2年后約50%病人血清反應(yīng)仍為陽性。非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)臨床意義非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)方法簡單、快速、敏感性和特異性較好。適用于大量人群的篩查。因治療后血清滴度可下降并陰性，故可作為療效觀察、判愈、復(fù)發(fā)或再感染的指征。VDRL試驗(yàn)用于神經(jīng)梅毒腦脊液檢測特異性高，檢測陽性可以作為神經(jīng)梅毒確診依據(jù)，但敏感性較低，即檢測陰性不能排除神經(jīng)梅毒。梅毒病期敏感性(%)特異性(%)一期86（77-99）-二期100隱性98(95-100)（一般滴度>1:8，但不排除<1:8）晚期73非梅毒-98(93-99)非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)特點(diǎn)假陽性反應(yīng)技術(shù)性假陽性反應(yīng)一般是由于操作錯(cuò)誤引起的假陽性反應(yīng)，經(jīng)過重復(fù)試驗(yàn)即可排除。生物學(xué)假陽性反應(yīng)(一般滴度小于1:8），應(yīng)采用梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)如TPPA等進(jìn)行排除。梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)原理抗原為梅毒螺旋體特異蛋白（包括螺旋體重組特異抗原），檢測梅毒患者血中特異性抗梅毒螺旋體抗原的抗體。感染梅毒螺旋體后，一旦梅毒螺旋體抗體試驗(yàn)呈陽性，則患者終身陽性。問題：梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)的定量試驗(yàn)在梅毒診療中有意義嗎？梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)方法梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)(TPPA)

梅毒螺旋體血球凝集試驗(yàn)(TPHA)

梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIA）

梅毒免疫層析法-梅毒快速檢測(RT)

熒光螺旋體抗體吸收試驗(yàn)（FTA-ABS）梅毒螺旋體蛋白印跡試驗(yàn)（WB）TPPATPPA試驗(yàn)用梅毒螺旋體致敏明膠顆粒人血清中的抗梅毒螺旋體抗體結(jié)合，產(chǎn)生可見的凝集反應(yīng)，具有較高的敏感性和特異性。TPPA是目前WHO公認(rèn)的梅毒抗原血清學(xué)試驗(yàn)的“金標(biāo)準(zhǔn)”，常用于新方法、新試劑的參照標(biāo)準(zhǔn)。+明膠顆粒梅毒抗原+抗原致敏顆?？乖旅纛w粒血液中抗體抗原抗體凝集TPPA試驗(yàn)原理示意圖324+：粒子光滑覆蓋整個(gè)孔底，有時(shí)邊緣有折疊3+：粒子光滑覆蓋大部分底2+：粒子光滑聚集覆蓋孔底，周圍有一細(xì)胞環(huán)1+：粒子光滑集聚覆概孔底，周圍有一明顯細(xì)胞環(huán)±：粒子沉集孔底，中央形成一小點(diǎn)–：粒子緊密沉積孔底中央

TPPA試驗(yàn)結(jié)果判讀敏感性特異性病期一期二期隱性臨床試驗(yàn)a10010