單寧酶開(kāi)題報(bào)告

篇一：?jiǎn)螌幟刚獑螌幟甘且环N水解酶，能水解沒(méi)食子酸單寧中的酯鍵和縮酚酸鍵，生成沒(méi)食子酸和其他化合物。在酶制劑工業(yè)發(fā)達(dá)的國(guó)家，如日本、美國(guó)，單寧酶的基礎(chǔ)理論和應(yīng)用研究工作開(kāi)展得較早，并已在茶飲業(yè)中獲得了很好的經(jīng)濟(jì)效益。伴隨國(guó)民經(jīng)濟(jì)的不停發(fā)展，人們生活水平的不停提高，單寧酶得到了更廣泛的應(yīng)用。人們已在皮革業(yè)、飼料業(yè)、化妝品業(yè)等方面開(kāi)發(fā)了單寧酶的多種用途。中國(guó)是個(gè)茶葉大國(guó)，并且可開(kāi)發(fā)資源豐富，單寧酶的應(yīng)用前景十分廣闊。單寧酶的性質(zhì)國(guó)外對(duì)單寧酶性質(zhì)的研究相對(duì)較多，也較深入，為此后的應(yīng)用研究提供了有價(jià)值的參照。單寧酶的酶學(xué)性質(zhì)來(lái)源于不一樣菌種的單寧酶動(dòng)力學(xué)性質(zhì)稍有區(qū)別。yamadah.等報(bào)道的黃曲霉單寧酶活性穩(wěn)定ph值范圍最窄，為5.0～5.5另?yè)?jù)韓國(guó)的chaesoo-kyu等報(bào)道的曲霉菌種an-11單寧酶活性穩(wěn)定的ph值為5.0～6.5其他菌種單寧酶活性穩(wěn)定ph范圍大都在3.0～8.0之間，最適ph值為4～6，熱穩(wěn)定范圍在70～80℃如下，最適反應(yīng)溫度為35～60℃。日本科學(xué)家hdeaki4yamada等就底物濃度對(duì)黃曲霉的影響進(jìn)行了研究，測(cè)出km(以單寧為底物)為0.5×104mol/l;km(以葡萄糖212沒(méi)食子酸為底物)為1.4×10mol/l；km(以沒(méi)食子酸甲酯為底物)4為8.6×10mol/l。經(jīng)6mol/l鹽酸胍處理后，單寧酶將發(fā)生不可逆失活，多種金屬離子以及edta對(duì)酶活性影響報(bào)道結(jié)論不一。單寧酶的物理化學(xué)性質(zhì)純單寧酶在紫外光區(qū)280nm處，有一種最大吸取峰，在濃度為10%，比色皿為1cm×1cm條件下，吸光系數(shù)a為11.8，260nm處吸光度與280nm處吸光度之比為0.51。sadaakiiibuchi，chaesoo-kyu分別用凝膠過(guò)濾法測(cè)定出它們各自選育的菌種單寧酶相對(duì)分子質(zhì)量都為200000。osaoadachi等分別用沉降法和電泳法測(cè)定黃曲霉單寧酶相對(duì)分子質(zhì)量，分別是194000和192000。chantal等測(cè)出黑曲霉lcf8單寧酶相對(duì)分子質(zhì)量為186000，其等電點(diǎn)在4左右。chantal和chaesoo-kyu在對(duì)各自提純的酶進(jìn)行sds-聚丙烯酰胺凝膠電泳分析時(shí)發(fā)現(xiàn)，單寧酶分子由2種亞基構(gòu)成，但這個(gè)成果與kengiaoki對(duì)酵母單寧酶構(gòu)造分析的成果有所不一樣。后者用同樣的措施，只好到一條電泳蛋白帶。saoadachi等深入研究了黃曲霉單寧酶的其他構(gòu)造特性，其分子中氮含量為12.9%(凱氏定氮法)，用二硝基氟苯法測(cè)氨基末端，有2個(gè)dnp-氨基酸產(chǎn)物，分別為dnp-丙氨酸與dnp-精氨酸,這一成果深入指明黃曲霉單寧酶為2種亞基構(gòu)成。單寧酶另一重要特性是，它為一種糖蛋白，而不一樣來(lái)源的單寧酶糖含量有差異。例如，黃曲霉單寧酶糖基占總相對(duì)分子質(zhì)量的25%，糖基為甘露糖。chantal從黑曲霉中提取的單寧酶，其糖基含量高達(dá)43%，而酵母單寧酶糖基含量為62%。parthasarathyn.等探明其選育的黑曲霉單寧酶碳水化合物為葡萄糖和甘露糖，肽鏈通過(guò)絲氨酸和蘇氨酸與糖基相連接。糖基與酶的功能關(guān)系尚未見(jiàn)報(bào)道。單寧酶的催化性質(zhì)saddakiiibuchi等對(duì)米曲霉單寧酶的催化途徑、底物的專一性和阻遏作用進(jìn)行了研究。成果表明，單寧酶催化葡萄糖酸酯，水解成沒(méi)食子酸與葡萄糖。中間產(chǎn)物為1，2，3，4，6-黃酰單寧和2，3,4，6-四酰單寧以及兩種沒(méi)食子酸葡萄糖。反應(yīng)途徑如下所示：?jiǎn)螌幟钢荒芩鉀](méi)食子酸化合物中的酯鍵，不對(duì)底物類似物如甲基間二羥甲酸鹽起作用。酶對(duì)底物與否有催化作用決定于es復(fù)合物的形成。es復(fù)合物形成條件有3點(diǎn)：a.只要是沒(méi)食子酸形成的酯,對(duì)醇沒(méi)有限制；b.酚羥基在苯環(huán)上相對(duì)位置不一樣，將影響其與酶的結(jié)合作用；c.形成的es復(fù)合物中酚羥基形成的酯鍵可被水解，而其他酯鍵或羧基由于沒(méi)有直接與酶結(jié)合，不能發(fā)生以上的反應(yīng)。酶反應(yīng)受到含酚羧基的底物類似物的競(jìng)爭(zhēng)性克制，但2,6--二羥基苯甲酸是非競(jìng)爭(zhēng)性克制。這表明盡管底物與酶結(jié)合的復(fù)合物都是沒(méi)食子酸化合物，但因酶與底物結(jié)合位點(diǎn)不一樣，它對(duì)某些酚羥基底物起作用，而對(duì)另某些底物類似物又不起作用。單寧酶的來(lái)源單寧酶重要來(lái)源于微生物，菌種重要為曲霉菌。此外，青霉、酵母、細(xì)菌、植物也有產(chǎn)單寧酶的報(bào)道，國(guó)外資料報(bào)道的多種產(chǎn)酶菌種列于表1.這些菌種都是以單寧作為誘導(dǎo)物來(lái)產(chǎn)生單寧酶的，充足證明單寧酶為一種誘導(dǎo)酶。doiseniji等從基因體現(xiàn)調(diào)控方面對(duì)菌種產(chǎn)生單寧酶進(jìn)行了探索,證明指導(dǎo)單寧酶生物合成的mrna極不穩(wěn)定,而放線菌酮可迅速制止單寧酶的產(chǎn)生。單寧酶的提取與純化單寧酶的提純技術(shù)伴隨蛋白質(zhì)提純技術(shù)的進(jìn)步而不停提高。在分離純化此酶的過(guò)程中，重要困難表目前破壁取酶。曲霉單寧酶為胞內(nèi)酶，它分布于真菌的細(xì)胞壁與細(xì)胞膜之間，結(jié)合得非常牢固，可以認(rèn)為是固定在細(xì)胞中。要充足提取酶，首先面臨的是怎樣有效地破壁，使酶最大程度地釋放出來(lái)。運(yùn)用超聲波、石英砂研磨、滲透法等經(jīng)典措施破壁時(shí)，酶得率較低。法國(guó)科學(xué)家運(yùn)用凍融法，再加入伴刀豆球蛋白(凝集素)破壁，此法是在菌種產(chǎn)酶高峰過(guò)后，待胞壁韌性減少時(shí)采用的，酶得率雖較第一類措施有所提高，但損失仍然嚴(yán)重。翌年，他們將生產(chǎn)幾丁質(zhì)酶的鏈霉素菌絲體與產(chǎn)單寧酶菌種保溫培養(yǎng)一段時(shí)間后，53%的胞內(nèi)酶得以釋放。在此之前，也有有關(guān)幾丁質(zhì)酶、α-葡聚糖酶或β-葡聚糖酶破壁的報(bào)道。酶法破壁大大提高了酶得率，但也不可防止地給后期提純工作帶來(lái)了麻煩。單寧酶的分離提純手段大體可以歸納為如下幾條路線：硫酸銨沉淀a、細(xì)胞破壁（物理措施）→利凡諾（乳酸-6，9-二氨基-7-氧基吖啶）沉淀→丙酮沉淀陰離子互換柱→葡聚糖凝膠過(guò)濾b、細(xì)胞破碎（物理措施）→超濾（200000）→超濾（100000）→proteinpaksw300c、細(xì)胞破壁→聚合物沉淀→透析d、細(xì)胞破壁（幾丁質(zhì)酶等）→反向膠束系統(tǒng)。上述幾條路線表明：為適應(yīng)單寧酶商品化需求，單寧酶的提純技術(shù)在從復(fù)雜且成本高的試驗(yàn)室提純手段向簡(jiǎn)要的工業(yè)化生產(chǎn)過(guò)渡。chantal報(bào)道的反向膠束系統(tǒng)可有效地提高酶產(chǎn)量，大大地縮短純化過(guò)程。反向膠束系統(tǒng)是80年代初期興起的一項(xiàng)蛋白質(zhì)提純技術(shù)，它的基本原理是運(yùn)用表面活性劑在有機(jī)溶劑中形成一種個(gè)膠團(tuán)，極性基團(tuán)向內(nèi)排列，而形成極性區(qū)域，膠團(tuán)內(nèi)部能為酶提供最佳微環(huán)境，在熱力學(xué)上穩(wěn)定且表面活性劑的性質(zhì)和水含量最佳化時(shí)，反向膠束系統(tǒng)中的酶穩(wěn)定性可大大提高。酶分子可容納于此，這樣酶分子就可與其他雜質(zhì)分開(kāi)。與其他提純手段相比，反向膠束系統(tǒng)更適于工業(yè)化生產(chǎn)。單寧酶活力測(cè)定措施單寧酶活力測(cè)定措施有滴定法、紫外分光光度法、比色法以及高效液相色譜法,多種措施基本原理簡(jiǎn)述如下.滴定法由于單寧在單寧酶作用下分解生成游離的沒(méi)食子酸，可用堿對(duì)之進(jìn)行滴定，確定底物單寧的減少許而測(cè)得酶活力。不過(guò)，由于緩沖液對(duì)堿的緩沖力以及單寧自身的褐色干擾了滴定終點(diǎn)，再者，隨溶液ph值增高，單寧會(huì)逐漸發(fā)生水解，將影響測(cè)定成果的穩(wěn)定性與精確性。紫外分光光度法日本sadaakiiibuchi等于1967年建立了紫外分光光度法，基本原理是通過(guò)測(cè)定底物單寧反應(yīng)前后在紫外光區(qū)310nm處光密度的變化，求得單寧酶活力。這個(gè)措施成為后來(lái)單寧酶活力測(cè)定的經(jīng)典措施。此法簡(jiǎn)樸快捷，且誤差在1%～3%之間，但底物單寧純度規(guī)定非常高。1995年,sadaakiiibuchi建立的紫外分光光度法基礎(chǔ)上，改建了單寧酶活力測(cè)定措施，以沒(méi)食子酸丙酯(pg)為底物，在270nm處,pg濃度在一定范圍內(nèi)與吸光度成正比，根據(jù)此原理建立的酶活力測(cè)定措施，簡(jiǎn)便敏捷，反復(fù)性好。視讀法1993年，澳大利亞科學(xué)家osawer.等建立了細(xì)菌單寧酶活力測(cè)定措施，其根據(jù)有兩點(diǎn)：a.單寧可水解生成游離的沒(méi)食子酸；b.沒(méi)食子酸在空氣中暴露被氧化，顏色從綠色變成褐色。通過(guò)比色求其變化量而測(cè)得酶活力。高效液相色譜法1994年,法國(guó)的chantalbarthomeuf等用高效液相色譜法持續(xù)測(cè)定反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)物沒(méi)食子酸變化量，直接測(cè)定出酶反應(yīng)的初速度，此法迅速精確，但對(duì)儀器規(guī)定較高。篇二：?jiǎn)螌幟竼螌幟讣捌湓诓栾嬃现械膽?yīng)用【摘要】單寧酶可水解沒(méi)食子酸單寧中的酯鍵和縮酚羧鍵，重要由曲霉屬等微生物發(fā)酵生產(chǎn)。單寧酶防止冷混濁、提高提取率、保持色澤和減輕苦澀味的作用在茶飲料工業(yè)中有廣泛的應(yīng)用?！娟P(guān)鍵詞】單寧酶；茶飲料；應(yīng)用單寧酶又稱單寧酯酰水解酶（ec3.1.1.20），它可以水解沒(méi)食子酸單寧中的酯鍵和縮酚羧鍵，生成沒(méi)食子酸和葡萄糖，可廣泛應(yīng)用于制革、釀酒、醫(yī)藥、飲料等領(lǐng)域。1單寧酶的性質(zhì)和生產(chǎn)1單寧酶的來(lái)源和性質(zhì)單寧酶除存在于富含單寧的植物中外，還廣泛存在于微生物中?？梢援a(chǎn)生單寧酶的微生物來(lái)源十分豐富，重要是真菌類的曲霉屬、青霉屬和根霉屬，尤其是曲霉屬中的黑曲霉、米曲霉和黃曲霉；此外，酵母菌、寄生內(nèi)座殼菌、巴斯德菌、茄形鐮刀菌和綠色木霉等也可產(chǎn)生單寧酶。單寧酶是一種糖蛋白，不一樣來(lái)源的單寧酶其分子量和糖鏈的含量有所差異，酶蛋白由2-8個(gè)單體聚合而成，糖基含量由12%到62%不等。不一樣來(lái)源的單寧酶溫度和ph穩(wěn)定性不一樣：最適溫度較高的50-60℃，一般在30-40℃之間，熱穩(wěn)定范圍在60-70℃如下；來(lái)源于真菌和植物的單寧酶的最適ph一般為4.0-6.0，ph穩(wěn)定性范圍一般是3.0-7.0之間，細(xì)菌單寧酶的最適ph一般偏中性[2]。金屬離子對(duì)單寧酶活性的影響也有所不一樣：libuchis等[3]發(fā)現(xiàn)許多離子對(duì)單寧酶無(wú)活化作用，但zn2+和ca2+可克制酶活，此外edta溶液會(huì)使酶完全失活，而aokik[4]等發(fā)現(xiàn)edta對(duì)酶活無(wú)明顯影響。rajakumargs等[5]發(fā)現(xiàn)cu2+，zn2+，fe2+，mg2+均對(duì)酶活力有明顯影響。郭魯宏等[6]研究發(fā)現(xiàn)除了mn2+，zn2+克制酶活之外，其他金屬離子對(duì)酶活均無(wú)明顯的激活或克制作用。karb等[7][41]研究表明mg2+、hg+可提高單寧酶活力，ba2+、ca2+、zn、hg、ag會(huì)克制酶活力，fe、co完全克制酶活。2單寧酶的發(fā)酵生產(chǎn)單寧酶是一種誘導(dǎo)酶，可由微生物在單寧酸存在的條件下誘導(dǎo)產(chǎn)生的，目前對(duì)單寧酶發(fā)酵生產(chǎn)研究的重點(diǎn)多集中在曲霉和青霉上，常通過(guò)誘變育種選育和改良生產(chǎn)菌株以及通過(guò)優(yōu)2+++3+2+化發(fā)酵條件等途徑來(lái)提高發(fā)酵產(chǎn)酶活力。如libuchi等[1]以asporyzae為出發(fā)菌株，以單寧酶為誘導(dǎo)物，探討了菌株產(chǎn)單寧酶的最適培養(yǎng)條件。aokik等[4]以酵母屬的candidaspk-ⅰ為出發(fā)菌株，以單寧為誘導(dǎo)物，探討了培養(yǎng)的最適條件，發(fā)現(xiàn)添加了3%的單寧所得的單寧酶積累量最多。bradoos等[8]對(duì)產(chǎn)單寧酶的日本曲霉進(jìn)行搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)條件優(yōu)化，將酶活力提高了13%。龔加順等[9]運(yùn)用離子注入技術(shù)誘導(dǎo)得到一株單寧酶高產(chǎn)的9701菌株，其搖瓶培養(yǎng)的酶活力高達(dá)13.0liu/ml，比出發(fā)菌株9401的酶活力高了2.89倍，且產(chǎn)酶性能穩(wěn)定，反復(fù)性好；對(duì)另一株單寧酶高產(chǎn)菌株進(jìn)行產(chǎn)酶條件優(yōu)化后，獲得了53.58mo1/s的高產(chǎn)酶活力。王征等[10]對(duì)黑曲霉的產(chǎn)酶發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化研究，獲得316u/m1的較高酶活力。劉如石等[11]對(duì)黑曲霉no.3菌株產(chǎn)酶發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化研究，最高酶活力可達(dá)144.25u/100ml發(fā)酵液，酶比活力為17.71。近期余鈞池等[12]采用先培養(yǎng)菌體后再誘導(dǎo)產(chǎn)酶的方式，在誘導(dǎo)劑濃度為1.5%，誘導(dǎo)培養(yǎng)基初始ph5.0，30℃培養(yǎng)48h的條件下，發(fā)酵米曲霉得到的單寧酶活力相稱于167.4u/ml發(fā)酵液?；蚬こ逃N具有能定向、穩(wěn)定遺傳、目的性強(qiáng)、育種周期短和能克服遠(yuǎn)緣雜交的障礙等長(zhǎng)處，國(guó)內(nèi)外都開(kāi)展了構(gòu)建高產(chǎn)單寧酶基因工程菌的研究。hatamotoo等[13]克隆了米曲霉單寧酶的基因，用3個(gè)脫氧核糖核苷酸探針按照單寧酶n-末端和內(nèi)在的氨基酸序列合成了單寧酶基因。單寧酶低產(chǎn)菌株米曲霉ao1被包括單寧酶基因的質(zhì)粒pt1轉(zhuǎn)化后，轉(zhuǎn)化株的單寧酶活力增長(zhǎng)了，且與轉(zhuǎn)化的質(zhì)粒數(shù)成比例。陳志仕克隆并分析了米曲霉單寧酶基因序列，構(gòu)建了含單寧酶基因的載體，實(shí)現(xiàn)了在大腸桿菌（e.coli）和畢赤酵母（pichiapastoris）中的體現(xiàn)。鄭穗蘭[15]改造了重組米曲霉單寧酶基因的體現(xiàn)質(zhì)粒，成功地進(jìn)行了基因體現(xiàn)框架的改造，通過(guò)轉(zhuǎn)化篩選獲得了轉(zhuǎn)化子并進(jìn)行了搖瓶體現(xiàn)的初步探索。zhongxf等[16]研究了米曲霉單寧酶基因在畢赤酵母（pichiapastoris）中的體現(xiàn)，酶活力比出發(fā)菌株提高了3倍。由于天然菌生產(chǎn)單寧酶重要是通過(guò)曲霉屬微生物的發(fā)酵獲得，曲霉屬發(fā)酵工藝成熟、易于大規(guī)模的培養(yǎng)、成本低廉、副產(chǎn)物少、產(chǎn)物分離簡(jiǎn)樸，人們也對(duì)運(yùn)用重組曲霉體現(xiàn)系統(tǒng)提高單寧酶的體現(xiàn)進(jìn)行了嘗試。如黃小鳳等運(yùn)用pcr擴(kuò)增得到米曲霉單寧酶基因的編碼序列，然后將其連接到黑曲霉的體現(xiàn)載體aned2-sp2上。將構(gòu)建好的單寧酶基因體現(xiàn)載體通過(guò)原生質(zhì)轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入黑曲霉菌株st31中，該重組菌株的單寧酶活力最高為104.02u/ml，比原始天然菌株提高了2-3倍。tadashit等價(jià)值。單寧酶的生產(chǎn)可采用固體發(fā)酵和液體深層發(fā)酵兩種措施。雖然固體發(fā)酵的設(shè)備規(guī)定比較簡(jiǎn)樸，易于推廣，但其缺陷是輕易污染雜菌；而液體深層發(fā)酵比較輕易控制，不易污染雜菌，并且生產(chǎn)效率高，目前單寧酶的研究和生產(chǎn)多采用液體深層發(fā)酵的措施。[18][17][14]將外源的dna整合到大豆曲霉和米曲霉的染色體中，提高了在ku70和ku80基因斷裂過(guò)程中基因的中靶頻率，為單寧酶基因的整合提供了參照2單寧酶在茶飲料中的應(yīng)用1防止茶飲料的冷渾濁在茶飲料的生產(chǎn)中，茶葉的高溫提取液冷卻后會(huì)變渾濁，并產(chǎn)生絮狀沉淀（茶乳酪）。茶葉提取液中固形物濃度越高，這種沉淀現(xiàn)象越嚴(yán)重，影響了茶飲料的穩(wěn)定。此外，茶飲料在冷藏中也會(huì)變得渾濁，滋味和香氣都會(huì)產(chǎn)生很大的影響，這種現(xiàn)象使其作為冷飲的商品價(jià)值受到很大的損害。茶飲料產(chǎn)生茶乳酪沉淀的原因是茶水中的咖啡因與兒茶素或者是以茶黃素等為關(guān)鍵形成的不溶性復(fù)合物，防止產(chǎn)生沉淀的措施包括原料茶葉的選擇、合適的抽提條件、膜過(guò)濾處理、減少水溶性固形物的濃度等，也有采用添加pvpp進(jìn)行處理。但不管是哪一種措施都會(huì)使茶葉的特有成分咖啡因和兒茶素類的含量下降，添加糖類雖然可克制沉淀生成，但也存在增長(zhǎng)熱量等問(wèn)題。單寧酶是將茶乳酪轉(zhuǎn)溶的專一酶，它能斷裂兒茶酚與沒(méi)食子酸間的酯鍵，使苦澀味的酯型兒茶素水解，釋放出的沒(méi)食子酸陰離子又能與茶黃素、茶紅素競(jìng)爭(zhēng)咖啡堿，形成分子量較小的水溶性短鏈物質(zhì)，從而減少茶湯的混濁度[20]。takinoy[21]運(yùn)用米曲霉產(chǎn)生的單寧酶作用于6%的紅茶茶湯，發(fā)現(xiàn)單寧酶在茶湯ph為5.6，溫度為45℃的條件下作用30-60分鐘后，茶乳酪產(chǎn)生至少?？煽诳蓸?lè)企業(yè)運(yùn)用單寧酶處理茶飲料中的“冷后渾”，獲得了良好的效果，渾濁度由80%降至8%[22]。對(duì)紅茶進(jìn)行單寧酶處理，成果發(fā)現(xiàn)速溶茶完全溶于冷水，并且滋味良好，而無(wú)酶處理的茶的固形物和浸提物產(chǎn)量均低于酶處理的茶[23]。日本專利jp3951260報(bào)道：將提取物的溫度控制在單寧酶合適溫度（20-80℃），添加酶量為每克干茶0.5～50單位，調(diào)整ph4.0～7.0，經(jīng)酶處理的茶湯用分子量不少于5000道爾頓的超濾膜過(guò)濾，再經(jīng)反滲透濃縮后，冷凍干燥即得冷水可溶的速溶茶[24]。近年來(lái)由于透明塑料瓶的大量使用，飲料的透明度比以往有更高的規(guī)定，單寧酶防止茶飲料產(chǎn)生冷渾濁的作用效果愈加受到關(guān)注。2提高茶葉的提取率3保持茶汁的色澤和減輕苦澀味一般茶飲料由于浸出后產(chǎn)生沉淀，就會(huì)使提取液中的固形物濃度下,降而色澤變淡。單寧酶的作用提高了茶成分的得率，就能防止這種現(xiàn)象的發(fā)生。同步，由于茶葉中所含的咖啡因、維生素、兒茶素類物質(zhì)具有多種生理功能，例如茶多酚類的抗氧化作用、抗菌作用等，通過(guò)單寧酶處理，提高茶葉有效成分的得率，也就提高了其功能性。美國(guó)斯福冰茶企業(yè)研究認(rèn)為，在加工速溶紅茶的提取工序之前，將紅茶先用單寧酶和纖維素酶的溶液噴灑，然后將茶葉放入封閉系統(tǒng)中放置一段時(shí)間，不僅可提高原料的制取率，增長(zhǎng)可溶性物質(zhì)的含量，并且還能減輕某些苦澀味，增長(zhǎng)茶葉的香氣。在綠茶、烏龍茶加工中的應(yīng)用研究中也發(fā)現(xiàn)，加入一定量的單寧酶能減少酯型兒茶素的含量，從而消除夏秋茶的部分苦澀味道[22]。3展望單寧酶防止冷混濁、提高提取率、保持色澤和改善口味的作用在茶飲料工業(yè)中有廣泛的應(yīng)用。怎樣采用更高效的措施培育高產(chǎn)菌株、提取單寧酶液，以減少成本，是單寧酶研究中的重要內(nèi)容。此外，單寧酶假如是以水溶性酶的狀態(tài)進(jìn)行作用，酶在整個(gè)反應(yīng)系統(tǒng)中與底物、產(chǎn)物混在一起，難以回收運(yùn)用。尋找合適的載體，將酶固定化，實(shí)現(xiàn)酶反應(yīng)工藝管道化、持續(xù)化、自動(dòng)化，將深入減少生產(chǎn)成本，提高生產(chǎn)效率。參照文獻(xiàn)[1]libuchis,minoday,yamadak.studiesontanninaeylhydrolaseofmieroorganismspartⅱ.anewmethoddeterminingtheenzymeactivityusingthechangeofultravioletabsorption.agl.biol.chem,1967,31(5):513-518[2]蘇二正,夏濤,張正竹.單寧酶的研究進(jìn)展.茶業(yè)通報(bào),,26(1):16-19[3]libuchis,minoday,yamadak.studiesontanninaeylhydrolaseofmieroorganismspartⅲ.purificationoftheenzymeandsomepropertiesofit.agl.biol.chem.,1968,32(7):803-809[4]aokik,shinker,nishirah.purificationandsomepropertiesofyeasttannase.agr.biol.chem,1976,40(l):79-85[5]rajakumargs,nandysc.isolation,purification,andsomepropertiesofpenieilliumchrysogenumtannase.appliedandenvironmentalmicrobiology,1983,46(2):525-527[6]郭魯宏,楊順楷,曾仲奎.黑曲霉單寧酶的純化及部分性質(zhì)研究.四川大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),1999,36(3):578-582[7]karb,banerjeer.effectofadditivesonthebehaviouralpropertiesoftanninacylhydrolase.procbiochem,,38(9):1285-1293[8]bradoos,guptar,saxenark.parametricoptimizationandbiochemicalregulationofextracellulartannasefromaspergillusjaponieus.proeessbioehemistry,1997,32(2):135-139[9]龔加順,肖琳,姚建銘.單寧酶高產(chǎn)菌株發(fā)酵條件研究.西南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),1999,21(5):234-634[10]王征,謝達(dá)平.黑曲霉產(chǎn)單寧酶發(fā)酵條件優(yōu)化研究.湖南農(nóng)業(yè)科學(xué)學(xué)報(bào),1998,24(5):380-383[11]劉如石,李清明,謝達(dá)平等.asp.nigerno.3液態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)單寧酶條件的研究.食品科學(xué),,22(2):28-32[12]余鈞池,謝慶武.米曲霉單寧酶產(chǎn)酶條件及其應(yīng)用的研究.廣西輕工業(yè),,(7):12-23[13]hatamotoo,watarait.cloningandsequencingofthegeneencodingtannaseandastructura