苦土豆總生物堿注射用凍干粉針的處方工藝研究

苦土豆總生物堿注射用凍干粉針的處方工藝研究

苦豆是人們經(jīng)常使用的藥物。它廣泛分布于河北、河南、山西等地。具有清熱解毒、抗菌消炎的功效。目前學(xué)者對苦豆子總生物堿的研究較多,包括苦參堿、氧化苦參堿、氧化槐果堿等,發(fā)現(xiàn)苦豆子總生物堿具有抗炎、抗菌、免疫、抗腫瘤等作用。本實驗擬制備苦豆子總生物堿注射用凍干粉針,并考察其對小鼠肝癌移植性腫瘤的抑制作用。1上海寧光電技術(shù)有限公司DLG-6型真空冷凍干燥機(上海市離心機械研究所有限公司),JJ-200型精密電子天平(美國雙杰兄弟有限公司),PHB-8型筆式pH計(上?？祵庪姽饧夹g(shù)有限公司)?？喽棺涌偵飰A提取物(鹽池縣都順生物化工有限公司,質(zhì)量分?jǐn)?shù)95%,批號01210054),氧化苦參堿對照品(中國食品藥品檢定研究院,批號0780-200004),生理鹽水(石家莊四藥有限公司),小鼠肝癌H22腹水瘤瘤株(中國中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所腫瘤組提供),一水葡萄糖、D-甘露醇、乳糖、羥丙基-β-環(huán)糊精(HP-β-CD)均購自北京鳳禮精求商貿(mào)有限責(zé)任公司,水為自制注射用水,其他試劑均為分析純。2方法和結(jié)果2.1原液方、水葡萄糖、氯化鈉的反應(yīng)及結(jié)果以凍干針劑的外觀、色澤和復(fù)溶性為考察指標(biāo),選取甘露醇、一水葡萄糖、氯化鈉、乳糖、HP-β-CD為充填劑,分別考察不同輔料不同加入量(40,60,80,100,120g·L-1)對凍干成型的效果,共26個處方(1個處方為凍干原液,其他25個為加輔料處方),以確定充填劑的種類和用量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)原液方、一水葡萄糖的5個配方、乳糖的5個配方及氯化鈉2個低質(zhì)量濃度配方均在凍干過程出現(xiàn)發(fā)泡、萎縮現(xiàn)象;氯化鈉3個高質(zhì)量濃度配方和HP-β-CD的3個配方(40,60,120g·L-1)成型較差;HP-β-CD的另外2個配方成型一般,且凍干樣品顏色不均一、且有裂紋;低質(zhì)量濃度甘露醇的2個配方成型一般,甘露醇(80,100g·L-1)的2個配方成型較好、外觀光潔、顏色均一、產(chǎn)品飽滿呈團塊狀,120g·L-1甘露醇凍干產(chǎn)品有花斑,顏色不均一。2.2總原則質(zhì)量濃度對凍干效果的影響配制苦豆子總生物堿質(zhì)量濃度分別為25,50,80,100g·L-1的凍干前藥液,加入不同質(zhì)量濃度的甘露醇作為充填劑,進(jìn)行凍干,觀察成品性狀,見表1。結(jié)果顯示藥液中總生物堿質(zhì)量濃度為25g·L-1時凍干效果最好;甘露醇質(zhì)量濃度為80,100g·L-1時,凍干液的體積小,厚度適宜,有利于冷凍干燥過程的進(jìn)行,且凍干樣品在外觀、水溶性及澄明度等方面最好,綜合考慮,選擇甘露醇質(zhì)量濃度80g·L-1。2.3凍干質(zhì)量的測定取苦豆子總生物堿原液(pH9.5),用磷酸調(diào)pH5.0,5.5,6.0,6.5,7.0,7.5,8.0,分別取不同pH液體及原液,加入適量甘露醇進(jìn)行凍干,考察凍干質(zhì)量的變化情況。同時以氧化苦參堿為對照品,供試品及對照品均用適量甲醇超聲溶解,采用酸性染料比色法,精密吸取對照品溶液及供試品溶液20μL,于80℃水浴蒸干,精密移取pH7.6的溴麝香草酚藍(lán)緩沖溶液4mL,三氯甲烷6mL,振搖2min,加至分液漏斗中,放置2h,取下層,于420nm處比色,外標(biāo)兩點法測定,以氧化苦參堿計算總生物堿含量,結(jié)果見表2,凍干前后pH無明顯變化,苦豆子總生物堿含量無顯著性差異,溶液顏色隨pH的增加而加深,故選擇與人體血液相近的pH6.5~7.5為優(yōu)選pH。2.4臨界溫度的影響冷凍干燥時,在凍結(jié)與升華過程中,制品的溫度超過了最低共熔點,則部分溶質(zhì)或全部溶質(zhì)將處于液相中,冰晶體的升華被液體濃縮蒸發(fā)所取代,干燥后制品將發(fā)生萎縮,溶解速度亦降低,因此最低共熔點是獲得最佳凍干效果的臨界溫度。按最佳處方配制溶液,對苦豆子總生物堿進(jìn)行最低共熔點的測定,結(jié)果見圖1,說明處方溶液的共熔點為-18℃。2.5添加不同密度微生物濾膜將苦豆子總生物堿中間體制備成總生物堿質(zhì)量濃度為25g·L-1的溶液,加入適量甘露醇(80g·L-1),攪拌使溶解,過0.2μm微孔濾膜后分裝于西林瓶中,置-45℃預(yù)凍8h,在一定真空度下以10℃·h-1升溫至-18℃,維持8h,以15℃·h-1升溫至25℃,保溫4h出箱,加塞壓蓋,即得。凍干曲線見圖2。2.6-4-甲基苯基-4-甲基-4-甲基苯磺酸酯的合成綜上所述,苦豆子總生物堿注射用凍干粉針的最終工藝確定為:取苦豆子總生物堿中間體25g,加注射用水適量(約全量的80%)使溶解,加入甘露醇80g,攪拌使溶解,用1mol·L-1磷酸調(diào)節(jié)pH至7.2~7.5,添加注射用水至1L,過0.2μm微孔濾膜后分裝于西林瓶中,每瓶2mL,置-45℃預(yù)凍8h,然后在一定真空度下以10℃·h-1升溫至-18℃,維持8h,再以15℃·h-1升溫至25℃,保溫4h出箱,加塞壓蓋,即得。2.7苦充液溫度對質(zhì)量穩(wěn)定性的影響按2.6項下方法制備3批凍干產(chǎn)品,批號分別為1201,1203,1205,在(40±2)℃、相對濕度(75±5)%條件下進(jìn)行6個月的加速穩(wěn)定性試驗,以性狀、復(fù)溶性及總生物堿含量為主要考察指標(biāo),經(jīng)過6個月加速試驗檢測,苦豆子總生物堿注射用凍干粉針各項檢測指標(biāo)與“0”月比較,均未見明顯變化,表明該制劑在(40±2)℃、相對濕度(75±5)%條件下質(zhì)量穩(wěn)定,可以預(yù)測該制劑在室溫條件下2年內(nèi)質(zhì)量穩(wěn)定。2.8腫瘤抑瘤作用的研究2.8.1給藥劑量3不同充填劑對凍干過程的影響原苦豆子注射液為醫(yī)院院內(nèi)制劑,主治慢性宮頸炎及宮頸糜爛等各類婦科疾病。該注射液經(jīng)藥效學(xué)試驗和臨床試驗反復(fù)驗證,具有顯著的抗菌消炎作用。由于藥物的化學(xué)降解多發(fā)生在溶液環(huán)境中,凍干粉針劑較水針劑質(zhì)量更穩(wěn)定,提高了藥物的穩(wěn)定性,更利于制品的貯運。冷凍干燥法制備粉針,影響因素較多,且凍干后易吸濕,成型困難。冷凍干燥過程中,若直接以藥液進(jìn)行凍干,由于成品疏松、比表面積大,極易吸濕,不能成型,故需加入充填劑,使之能形成團塊結(jié)構(gòu),但充填劑須具備純度高、無毒、無抗原性、引濕性小、干燥后復(fù)溶性好等優(yōu)點。不同充填劑種類及用量對所得凍干產(chǎn)品的性狀、成型性有很大影響,甘露醇較其他充填劑共熔點高,用量少,成品飽滿不皺縮,色澤均一,且多次重復(fù)凍干后所得結(jié)果穩(wěn)定。冷凍干燥過程中,除了要控制藥液質(zhì)量濃度、充填劑種類和用量外,各階段溫度、時間的控制很關(guān)鍵。冷凍干燥包括預(yù)凍、升華干燥和解析干燥3個過程。常采用凍干曲線表示凍干過程中產(chǎn)品溫度、壓力隨時間的變化關(guān)系,并由凍干曲線確定預(yù)凍速率、升華速率和干燥時間等主要參數(shù),凍干曲線因凍干設(shè)備不同會有一定差異,故未對凍干過程做過多研究,僅測定了樣品的共熔點約-(18±2)℃?？喽棺涌偵飰A注射用凍干粉設(shè)120,60,30mg·kg-1共3個劑量組,陽性對照藥環(huán)磷酰胺劑量為25mg·kg-1。2.8.2苦東南角生物基化學(xué)成分對苦生物注射用凍干粉后含銅的胞小鼠右腋皮下無菌接種小鼠肝癌H22腹水瘤瘤株(每只鼠約含106個瘤細(xì)胞),接種后次日按體重均勻分組,模型對照組為生理鹽水0.01mL·g-1,陽性對照組為環(huán)磷酰胺25mg·kg-1,高、中、低劑量組分別為苦豆子總生物堿注射用凍干粉120,60,30mg·kg-1。2.8.3動物平均瘤重及抑瘤率采用腹腔注射給藥,苦豆子總生物堿注射用凍干粉每日1次,