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文檔簡介
第二章
基因工程制藥
DNA分子中含有特定遺傳信息的一段核苷酸序列,是遺傳物質(zhì)的最小功能單位?;仡櫍夯蚬こ痰幕A(chǔ)知識一、基因的概念:二、基因工程技術(shù)是將目的基因插入載體,拼接、轉(zhuǎn)入新的宿主細胞,構(gòu)建成工程菌(或細胞),實現(xiàn)遺傳物質(zhì)的重新組合,并使目的基因在工程菌內(nèi)進行復(fù)制和表達的技術(shù)。第二節(jié)基因工程藥物生產(chǎn)的基本過程
(掌握)⒈目的基因的克?、矘?gòu)建DNA重組體⒊DNA重組體轉(zhuǎn)入宿主菌⒋構(gòu)建工程菌⒌工程菌發(fā)酵⒍表達產(chǎn)物的分離純化⒎產(chǎn)品的檢驗等基因工程藥物制藥的主要程序上游階段:
下游階段:一目的基因的獲得
一、反轉(zhuǎn)錄法反轉(zhuǎn)錄法就是分離純化目的基因的RNA,再反轉(zhuǎn)錄成cDNA,然后進行cDNA克隆表達。二、反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)
RT-PCR是將以RNA為模板的cDNA合成同PCR結(jié)合在一起,該法是mRNA經(jīng)反轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一鏈,在以隨機引物、oligo(dT)或基因特異性的引物(GSP)起始協(xié)助下,PCR擴增,特異性的合成目的cDNA鏈(目的基因)。三、化學(xué)合成法
合成目的基因DNA不同部位的兩條鏈的寡核苷酸短片段,再退火成為兩端形成粘性末端的DNA雙鏈片段,然后將這些雙鏈片段按正確的次序進行退火連接成較長的DNA片段,再用連接酶連接成完整的基因。
問題:
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