實(shí)驗(yàn)3-線粒體和液泡系的

實(shí)驗(yàn)三線粒體和液泡系的

超活染色與觀察一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、了解細(xì)胞和細(xì)胞器的超活染色技術(shù)。2、觀察動(dòng)、植物活細(xì)胞內(nèi)線粒體、液泡的形態(tài)、數(shù)量和分布,了解植物細(xì)胞液泡系的發(fā)育過程。二、實(shí)驗(yàn)原理

活體染色是指對(duì)生活有機(jī)體的細(xì)胞或組織能著色但又無毒害的一種染色方法。它的目的是顯示活細(xì)胞內(nèi)的某些結(jié)構(gòu)，而不影響細(xì)胞的生命活動(dòng)和產(chǎn)生任何物理、化學(xué)變化以致引起細(xì)胞的死亡。活染技術(shù)可用來研究生活狀態(tài)下的細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)和生理、病理狀態(tài)。根據(jù)所用染色劑的性質(zhì)和染色方法的不同，通常把活體染色分為體內(nèi)活染與體外活染兩類。體內(nèi)活染是以膠體狀的染料溶液注入動(dòng)、植物體內(nèi)，染料的膠粒固定、堆積在細(xì)胞內(nèi)某些特殊結(jié)構(gòu)里，達(dá)到易于識(shí)別的目的。體外活染又稱超活染色，它是由活的動(dòng)、植物分離出部分細(xì)胞或組織小塊，以染料溶液浸染，染料被選擇固定在活細(xì)胞的某種結(jié)構(gòu)上而顯色。活體染色之所以能固定、堆積在細(xì)胞內(nèi)某些特殊的部分，主要是染料的“電化學(xué)”特性起重要作用。堿性染料的膠粒表面帶陽離子，酸性染料的膠粒表面帶有陰離子，而被染的部分本身也是具有陰離子或陽離子，這樣，它們彼此就發(fā)生了吸引作用。但不是任何染料都可以作為活體染色劑之用，應(yīng)選擇那些對(duì)細(xì)胞無毒性或毒性極小的染料，而且總要配成稀淡的溶液來使用。一般是以堿性染料最為適用，可能因?yàn)樗哂腥芙庠陬愔|(zhì)的特性，易于被細(xì)胞吸收，JanusgreenB和中性紅兩種堿性染料是活體染色劑中最重要的染料，對(duì)于線粒體和液泡系的染色各有專一性。線粒體是細(xì)胞內(nèi)重要的細(xì)胞器，線粒體內(nèi)膜上分布有細(xì)胞色素氧化酶，該酶能使詹姆斯綠B保持在氧化狀態(tài)，呈現(xiàn)藍(lán)綠色從而使線粒體顯色，而細(xì)胞質(zhì)中的染料被還原成無色。液泡是細(xì)胞內(nèi)濃縮產(chǎn)物的主要場(chǎng)所，有十分重要的功能。中性紅是液泡的特殊染色劑，將液泡染成紅色。在活細(xì)胞中，細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核不著色。如果細(xì)胞死亡，染料會(huì)彌散開來，使核著色。三、實(shí)驗(yàn)用品（一）器材顯微鏡、恒溫水浴鍋、鑷子、刀片、載玻片、蓋玻片、吸管、牙簽、吸水紙等。（二）試劑1、Ringer溶液生理鹽水、緩沖液氯化鈉0.85g（變溫動(dòng)物用0.65g）；氯化鉀0.25g；氯化鈣0.03g；蒸餾水100ml2、1/3000中性紅Ringer溶液棕色瓶備用。3．1/5000詹姆斯綠BRinger溶液最好現(xiàn)用現(xiàn)配，以保持它的充分氧化能力。

（三）材料人口腔上皮細(xì)胞洋蔥鱗莖內(nèi)表皮細(xì)胞小麥幼根根尖四實(shí)驗(yàn)方法(一)線粒體的超活染色與觀察詹納斯綠B能專一對(duì)線粒體進(jìn)行超活染色，呈藍(lán)綠色。1、人口腔粘膜上皮細(xì)胞線粒體的超活染色觀察

載玻片→37℃水浴鍋的金屬板→滴兩滴詹納斯綠B染液牙簽→從口腔粘膜刮取上皮細(xì)胞→放入載玻片染液→染色10-15分鐘（注意不可使染液干燥,必要時(shí)可再加滴染液）

→蓋上蓋玻片用吸水紙吸去四周溢出的染液→觀察五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果在低倍鏡下，選擇平展的口腔上皮細(xì)胞，換高倍鏡進(jìn)行觀察?？梢姳馄綘钌掀ぜ?xì)胞的核周圍胞質(zhì)中分布著一些被染成藍(lán)綠色的顆粒狀或短棒狀的結(jié)構(gòu)，即線粒體。

線粒體2009年攝于新大生科院數(shù)碼互動(dòng)顯微鏡室口腔頰部上皮細(xì)胞示線粒體2.洋蔥鱗莖表皮細(xì)胞線粒體的