乙肝血清標(biāo)志物檢測

乙肝血清學(xué)標(biāo)志物

檢測及意義

山西醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院檢驗科郭先鋒要點簡介抗原組成傳染源傳播途徑病原學(xué)診斷血清學(xué)模式及臨床意義End

前言病毒性肝炎在我國各類傳染病中發(fā)病率最高乙型病毒性肝炎在我國危害極大我國乙型肝炎患者近3千萬病毒性肝炎，一般特指由嗜肝病毒感染所引起的肝炎。HBV-屬嗜肝DNA病毒A病毒性肝炎HepatitisVirus腸道傳播腸道外傳播F,TTV?其它ENANBBDC病毒性肝炎-背景

傳染源糞便血液/血源性物質(zhì)/體液血液/血源性物質(zhì)/體液血液/血源性物質(zhì)/體液糞便傳播途徑糞-口經(jīng)皮膚/經(jīng)粘膜經(jīng)皮膚/經(jīng)粘膜經(jīng)皮膚/經(jīng)粘膜糞-口慢性感染否是是是否病毒性肝炎類型ABCDE基因組類型ssRNAdsDNA

ssRNA

ssRNA

ssRNAHepatitisBVirus乙型肝炎的病原體乙型病毒性肝炎[1]是由乙肝病毒（HBV）引起的、以肝臟炎性病變?yōu)橹鞑⒖梢鸲嗥鞴贀p害的一種傳染病。本病廣泛流行于世界各國，主要侵犯兒童及青壯年，少數(shù)患者可轉(zhuǎn)化為肝硬化或肝癌。因此，它已成為嚴(yán)重威脅人類健康的世界性疾病，也是我國當(dāng)前流行最為廣泛、危害性最嚴(yán)重的一種傳染病。乙型病毒性肝炎無一定的流行期，一年四季均可發(fā)病，但多屬散發(fā)。近年來乙肝發(fā)病率呈明顯增高趨勢估計全球半數(shù)以上人口已被HBV感染過，5%的人口為HBV慢性感染.中國：乙肝高發(fā)區(qū)，人群HBsAg的檢出率達(dá)9.8%電鏡下HepatitisBVirus乙型肝炎病毒HBV乙型肝炎病毒（HBV）為專一的嗜肝病毒，近年由于核酸分子雜交技術(shù)的進(jìn)展，在肝外器官細(xì)胞也能檢出HBV-DNA。通過北京乙肝肝病毒試驗研究提供了在肝外細(xì)胞復(fù)制的證據(jù)。人HBV也可能在肝外細(xì)胞內(nèi)復(fù)制，有待深入研究。HBV感染者血清經(jīng)電鏡檢查有3種病毒顆粒.1.大球形顆粒，完整的HBV顆粒直徑為42nm，又名Dane顆粒，分為包膜與核心的兩部分，外衣殼及包膜含有表面抗原，衣殼內(nèi)為核心結(jié)構(gòu)，有核心抗原，核心抗原下面藏有e抗原。乙型肝炎病毒HBV２.小球形顆粒，陽性血清中最多的顆粒，主要為表面抗原，不含核酸及ＤＮＡ成分，為不完整的ＨＢＶ．３.管形顆粒，實際上是一串小球形顆粒聚合在一起的，也含有表面抗原．1.HBV形態(tài)結(jié)構(gòu)大球形顆粒（Dane顆粒）小球形顆粒管形顆粒HBVvirionTheinfectiousvirioniscalledtheDANEparticle.Dane顆粒（完整的病毒）形態(tài)HBsAgHBcAgHBVDNADNAP（外膜蛋白）（核衣殼蛋白）BothcomprisedofHBsAgHBVnomenclatureHBV:hepatitisB

virusHBsAg:hepatitisBvirussurfaceantigenHBsAb:hepatitisBvirussurfaceantibodyHBcAg:hepatitisBviruscoreantigenHBcAb:hepatitisBviruscoreantibodyHBeAg:hepatitisBviruse

antigenHBeAb:hepatitisBviruse

antibody抗原組成(一)--HBsAg位于病毒表面，是一種糖蛋白(曾用名：澳抗)出現(xiàn)時間：HBV感染后2～6個月（潛伏期）HBsAg有10個亞型，各亞型間存在不完全的交叉免疫。近年用亞型單克隆抗體研究表明，d和y、w和r決定簇可以同時存在于同一病毒抗原顆粒上，形成adwr、aywr、adyw和adyr復(fù)合亞型。其機(jī)制為①不同亞型病毒的雙重感染；②單一亞型病毒感染后，有的HBV-DNA發(fā)生點突變。臨床表現(xiàn)病情反復(fù)，肝臟損害較重，因而有的HBV感染者血清中同時HBsAg陽性、抗-HBs陽性。4種亞型(adr,adw,ayr,ayw)。刺激機(jī)體產(chǎn)生保護(hù)性抗體即抗-HBs.

HBsAg血清中HBsAg陽性是HBV感染的標(biāo)志。本身具有抗原性，無傳染性。但由于HBsAg常與HBV同時存在，故認(rèn)為是傳染性標(biāo)志之一。但須注意，HBV-DNA可自X基因區(qū)終點起逆向與肝細(xì)胞發(fā)生整合，整合后的S基因表達(dá)較強(qiáng)，不斷產(chǎn)生HBsAg，整合的HBcAg基因組被抑制，不表達(dá)HBeAg、HBcAg，在這種情況下，即使HBV已從體內(nèi)清除，而HBsAg仍可持續(xù)陽性，從理論上講，這種HBsAg陽性血液并無傳染性。急性HBV感染后，血清中首先出現(xiàn)HBsAg，整個急性期均可陽性，至恢復(fù)期可滴度下降或轉(zhuǎn)陰。如HBsAg持續(xù)陽性半年以上，稱為慢性HBsAg攜帶者（無癥狀HBsAg攜帶者），可持續(xù)陽性達(dá)數(shù)年。一般認(rèn)為HBsAg滴度與病變程度不成比例。肝功能正常，HBsAg滴度高，肝臟可重要病變，若HBsAg陰性及DNAp陰性，表示無重要傳染性。反之，肝功能異常，HBsAg滴度不高，肝臟可有明顯病變，如有部分肝硬化、肝癌患者呈HBsAg陰性或低滴度。無癥狀HBsAg攜帶者或慢性活動性乙型肝炎均可有相同的HBsAg滴度變化不能代表病情的輕重，因此分解此不能將HBsAg滴度的變化作為判斷病情輕重和藥物治療效的指標(biāo)。

用免疫電鏡及免疫熒光法在肝細(xì)胞漿內(nèi)證實有HBsAg,而血清中HBsAg陰性，其機(jī)制尚無確切解釋。已知原因之一是現(xiàn)用的RIA檢測法，其測試靈敏度為10-5,尚不能測出最低感染量(10-7)，因此有10%假陰性，故對HBsAg的判斷，以陽性有診斷意義，陰性不能排除HBV感染。近年發(fā)現(xiàn)血清中HBV標(biāo)志均陰性，而在白細(xì)胞或肝細(xì)胞內(nèi)檢出HBV-DNA，說明確定或除外HBV感染不能單憑HBsAg是否陽性，應(yīng)與其他標(biāo)志結(jié)合判斷。HBsAg持續(xù)時間●急性自限性肝炎：血中HbsAg大多可持續(xù)1-6周，最長可達(dá)6個月內(nèi)可消失●慢性肝炎或慢性HBsAg攜帶者：可持續(xù)陽性?？乖M成(二)--HBcAgHBcAg為HBC復(fù)制指標(biāo).位于Dane顆粒核心部分和肝細(xì)胞核內(nèi)，在血清中不易檢出游離的HBcAg主要成分是蛋白質(zhì)刺激機(jī)體產(chǎn)生抗-HBc(非保護(hù)性抗體)存在于受感染的肝細(xì)胞核內(nèi)，有很強(qiáng)的免疫原性，在乙肝急性期、恢復(fù)期和HBsAg攜帶者中?？蓹z出抗-HBc。除非HBVC基因序列出現(xiàn)極少數(shù)變異或感染者有免疫缺陷。抗-HBcIgM陽性提示急性期或慢性感染急性發(fā)作，抗HBcIgG出現(xiàn)較遲，但可保持多年或者終生。（抗-HBs●出現(xiàn)時間：急性感染后期或HBsAg轉(zhuǎn)陰后（數(shù)月才能檢測出）.6-12月內(nèi)逐步上升至高峰，可持續(xù)多年，但滴度會逐漸下降?！窨?HBs為保護(hù)性抗體（中和抗體）其出現(xiàn)標(biāo)志著HBV感染進(jìn)入恢復(fù)期●-HBs對相同HBsAg亞型的HBV再感染有免疫力，但對不同亞型的HBV保護(hù)力不完全?？乖M成(三)--HBeAg位于HBV的核心,是一種可溶性蛋白抗原HBeAg和Dane顆粒出現(xiàn)相平行，且與DNA多聚酶在血中的消長動態(tài)相符合血中HBeAg的出現(xiàn)可作為HBV復(fù)制及血清有感染性的指標(biāo).急性HBV感染時HBeAg的出現(xiàn)時間略晚于HBsAg，在病變極期后消失，如果HbeAg持續(xù)存在預(yù)示趨向慢性。大部分情況持續(xù)存在表示患者處于高感染低應(yīng)答期。刺激機(jī)體產(chǎn)生抗-HBe。轉(zhuǎn)換過程意味著由免疫耐受轉(zhuǎn)換為免疫激活，此時常有病變活動的激化?？?HBe能與受染肝細(xì)胞表面的e抗原結(jié)合,通過補(bǔ)體介導(dǎo)破壞受染的肝細(xì)胞,抗-HBe的出現(xiàn)是預(yù)后良好的征象?？笻Be陽轉(zhuǎn)后，病毒復(fù)制處于靜止?fàn)顟B(tài)，傳染性降低。部分病人仍有病毒復(fù)制，肝炎活動，稱為HBeAg陰性慢性肝炎。HBVDNA是病毒復(fù)制和有傳染性最直接的證據(jù)檢測方法：斑點雜交法、PCR法近年用多聚酶鏈反應(yīng)（PCR）這一體外DNA擴(kuò)增技術(shù)，使靈敏度提高100倍以上（10FGfg/ml），可測出極微量的病毒。HBV-DNA-p是HBV核心所具有的DNA-p，在病毒復(fù)制過程中起逆轉(zhuǎn)酶作用。DNA-p活性是表示HBV復(fù)缺點活力的重要指標(biāo)。HBV-DNA及DNA-p檢測有助于判斷HBV感染者病毒復(fù)制程度及傳染性大小，較靈敏評價抗病毒藥物的療效。

乙肝抗原組成(四)--Pre-S抗原位于HBV的外衣殼上，有兩種刺激機(jī)體產(chǎn)生抗Pre-S1和抗Pre-S2，能阻斷HBV與肝細(xì)胞受體結(jié)合，從而起到抵抗病毒的作用抗Pre-S1和抗Pre-S2的出現(xiàn)，表示病情好轉(zhuǎn)，趨向痊愈傳染源患者潛伏期急性期慢性期無癥狀HBsAg攜帶者

高中等低/不能檢出血液精液尿血清陰道分泌物糞便傷口滲出物唾液汗液淚液乳汁各種體液中HBV的濃度血源性傳播輸血、注射、外科和牙科手術(shù)、針刺等剃刀、牙刷和蚊蟲叮咬等母嬰垂直傳播宮內(nèi)傳播分娩時微小皮損處傳播產(chǎn)后母嬰密切接觸性傳播HBV傳播途徑病原學(xué)診斷(一)--抗原抗體檢測項目：HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc以及抗-HBcIgM方法ELISA(enzyme-linkedimmunosorbentassay，最常用，定性)發(fā)光免疫分析(定量)反相間接血凝試驗(少用)ELISA的基本原理利用抗原和抗體特異性結(jié)合主要的試劑固相抗原或抗體酶標(biāo)記的抗原或抗體酶的底物ELISA的主要方法間接法:測定抗-HBs夾心法：測定HBsAg和HBeAg競爭法：測定抗-HBc中和法：測定抗-HBe捕捉法：測定抗-HBcIgM病原學(xué)診斷(二)—核酸檢測核酸雜交探針PCR引物各項HBV血清標(biāo)志物的解釋HBsAg–HBV感染的標(biāo)志,可能是急性或慢性Anti-HBs–既往感染自然免疫/接種疫苗產(chǎn)生Anti-HBcIgM–急性HBV感染標(biāo)志Anti-HBcIgG–既往或慢性HBV感染HBeAg–病毒復(fù)制活躍，具有高度傳染性

Anti-HBe–慢性感染,病毒不再復(fù)制,低傳染性HBV-DNA–直接測定病毒復(fù)制狀態(tài)，比HBeAg更準(zhǔn)確；臨床主要用于監(jiān)測治療反應(yīng)為什么要開展乙肝“兩對半”定量檢測乙型病毒性肝炎是世界性的傳染病，嚴(yán)重地威脅著人類的健康。我國是乙型病毒性肝炎高發(fā)病國家。據(jù)統(tǒng)計全世界無癥狀攜帶者（HBsAg攜帶者）超過2.8億，我國占1億以上，且多數(shù)無癥狀。所以乙肝的早期診斷對控制傳染源、降低發(fā)病率及疾病的治療均具有很重要的意義。酶標(biāo)（ELISA）檢測始于20世紀(jì)80年代中期，它對乙肝“兩對半”定性測定在疾病的診斷，病情監(jiān)測，療效觀察起到了一定的作用，但酶標(biāo)檢測HbsAg靈敏度較低，不能真正意義上定量測定血清中HbsAg含量。隨著臨床醫(yī)學(xué)的發(fā)展，定性檢測已經(jīng)遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足臨床及患者的要求?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析定量測定乙肝“兩對半”大大彌補(bǔ)了酶標(biāo)定性測定及靈敏度低的不足。血清學(xué)檢測的臨床意義HBsAg抗-HBsHBeAg抗-HBe抗-HBc臨床意義

急性或慢性感染(大三陽)+-+-++++乙肝后期或慢性感染(小三陽)--++---潛伏期或急性乙肝早期--+++痊愈或恢復(fù)期,有免疫力-----+++--痊愈,有免疫力疫苗接種或曾經(jīng)感染過,有免疫力血清學(xué)檢測的臨床意義HBsAg抗-HBsHBeAg抗-HBe抗-HBc臨床意義血清學(xué)檢測的臨床意義血清學(xué)檢測的臨床意義

急性或慢性感染(傳染性弱)+---+-++急性乙肝恢復(fù)期或既往感染------+急性窗口期或既往感染康復(fù)期-----未感染過HBV++--+++--+急性感染趨向恢復(fù);慢性攜帶者HBV感染已恢復(fù),有免疫力SymptomsHBeAganti-HBeTotalanti-HBcIgManti-HBcanti-HBsHBsAg04812162024283236521