生物競賽-生物化學-44重組DNA技術-楊榮武《生物化學原理(第二版)(三)》教學課件2

生物競賽一步物化學原理(分子生物學)一南京大學楊榮武生物化學原理分子生物學)梧榮武可指京大NANJINGUNIVERSITY生物競賽一步物化學原理(分子生物學)一南京大學楊榮武第四十四章重紐DNA技術生物競賽一步物化學原理(分子生物學)一南京大學楊榮武提綱重組DNA技術簡介基因克隆的詳細步驟基因克隆的應用四.聚合酶鏈式反應五.蛋白質工程六.研究核酸與蛋白質相互作用的主要方法七.研究蛋白質之間相互作用的主要方法SELEX技術九.生物芯片技術○.基因組學研究概述生物競賽一步物化學原理(分子生物學)一南京大學楊榮武重組DNA★重組DNA也稱為基因克隆或分子克隆,是通過某種手段將不同來源的DNA片段連接起來形成嵌合體分子,并進行擴增和純化以供進一步研究的技術?！镉行У幕蚩寺≈辽贊M足五個條件:(1)具有容納外源基因或序列的載體;(2)具有將外源基因或序列導入載體的工具;(3)具有合適的宿主細胞;(4)具有將重組DNA引入到宿主細胞的途徑;(5)具有選擇和篩選重組體的方法。生物競賽一步物化學原理(分子生物學外源克降載體DNA目的基因載體DNA連接目的基因嵌合體DNA將DNA導入到宿主細胞分離含有重組DNA的細胞宿主細胞克隆基因表達克隆基因表達的蛋白質重組DNA技術的基本步驟生物競賽一生物化學原理(分子生物學)一南京大學楊榮基因克隆的載體載體的作用是容納被克隆的目標基因,以便將它們帶入到特定的宿主細胞中進行擴增或表達。★一種理想的載體至少包括:①大多數載體含有原核細胞DNA復制起始區(qū),以便于在原核系統(tǒng)中的擴增;②某些載體還含有真核細胞DNA復制起始區(qū),以方便在真核細胞內的自主復制;③含有集中了多種常用的限制性內切酶切點的多克隆位點,以方便各種克隆片段的插入和建立DNA文庫④帶有抗生素抗性基因或其它選擇性標記,有利于克隆的篩選和鑒別;⑤某些載體含有可誘導的或組織特異性的啟動子或增強子序列,有利于控制被插入的基因在轉染細胞或轉基因動物內的表達代的體體勁量愛:同時兼顧到克隆目前使用的載體多衍生于質粒、噬菌體和病毒生物競賽一步物化學原理(分子生物學)一南京大學楊榮武Eco010912674BstAPI179datll2617SspI2501Ndei18BegI2215MCS(多克隆位點Scai217736pUC18/192686Gsul17341626cr10l17791466Eco31l1766Eaml10511694復制起始區(qū)pUC18/19質粒的基本結構生物競費一物化學原理(分子生物學)一南京大學楊榮武非必需區(qū)域與噬菌體外殼蛋白和尾部蛋白包裝(右臂)RL(左臂)心R黏性末端限制性內切酶消化與外源DNA連接感染性的噬L4菌體顆粒雜合DNAλ啦菌體載體的構建、重組和包裝生物競賽一步物化學原理(分子生物學)一南京大學楊榮武pBACe3.6SacBⅡ(11.5kb)EcORI酶切,去除中間片段與外源DNA連接啟動子SSacBⅡ細菌人工染色體的結構和外源DNA的插入生物競賽一步物化學原理(分子生物學)一南京大學楊榮武CEN4TRPIPYAC3(11.4kb)Smai+