微生物檢測培訓(xùn)課件

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-無菌操作與GLP10/7/20231SummaryfromGlobalMicroTrai學(xué)習(xí)目的Explaintheimportanceofasepsisinthemicrolab/無菌的重要性Explainthemethodsusedtosterilizeequipment/設(shè)備滅菌的方法Identifywaystoprepareasepticworkplace/無菌工作區(qū)域的準(zhǔn)備Identifypracticeforaseptictechniqueduringtestingprocess/實驗過程中的無菌技術(shù)Explainhowtosetupalabsoitpromotesasepticpracticeandsafety/實驗室布局Identifywaystoensuresafetywhileworkinginalab/安全工作10/7/20232學(xué)習(xí)目的Explaintheimportanceof主要內(nèi)容介紹無菌技術(shù)無菌的過程實驗的無菌技術(shù)實驗室布局GLP要點安全工作10/7/20233主要內(nèi)容介紹7/28/20233無菌的重要性第一章在微生物實驗室,必須達到一定程度的無菌狀態(tài),免于微生物污染.假如在一個骯臟的實驗室或者早先打翻過樣品的地方作微生物實驗,引入新的微生物污染樣品的幾率是很大的.微生物的實驗可以分為兩大部分:準(zhǔn)備培養(yǎng)基和樣品檢驗.事實上,保持整個實驗室清潔是非常重要的,這樣就不用在滅菌前擔(dān)心太多了,然而,滅菌后必須保證樣品或者培養(yǎng)基免受污染.其實,可以把滅菌想像成”一扇門”,在培養(yǎng)基中或者一些設(shè)備比如吸管的微生物都在滅菌過程中被殺死了,沒有微生物困擾實驗了.必須保證滅菌后的環(huán)境(門后的部分)的潔凈,杜絕滅菌后的培養(yǎng)基和設(shè)備受到污染.10/7/20234無菌的重要性第一章在微生物實驗室,必須達到一定程度的無菌狀無菌技術(shù)–高壓濕熱滅菌(Autoclave)要點描述原理在壓力下產(chǎn)生的濕熱的蒸汽殺死微生物的營養(yǎng)體和孢子.密封滅菌鍋必須密閉以阻隔外部空氣,

避免空氣的存在會影響壓力并降低滅菌鍋里面的溫度滅菌壓力在滅菌國內(nèi),合適的滅菌溫度是通過壓力達到的,

壓力對于滅菌沒有效用但是使蒸汽溫度上升.對于標(biāo)準(zhǔn)操作來說,15lbs/inch2時的1210C并趕走所有空氣可以達到滅菌的效果滅菌時間當(dāng)?shù)竭_一定的溫度和壓力時,

需要保持一定的時間來達到效果,為了殺滅微生物,1210C必須保持至少15分鐘培養(yǎng)基的滅菌大部分情況下,實驗室配置培養(yǎng)基后應(yīng)滅菌,滅菌時應(yīng)根據(jù)供應(yīng)商指導(dǎo),

使用合適的溫度時間;有些培養(yǎng)基不適合滅菌的.器皿的滅菌當(dāng)滅菌那些器皿時,

需要考慮使用數(shù)量,比如,一天用10根吸管,在滅菌時,一般就可以以10根為一包,這樣可以減低器皿在使用過程中遭受微生物的污染的可能性.滅菌條在滅菌過程中,可以用滅菌條來監(jiān)控效果,滅菌條在滅菌前是有顏色的,滅菌后會變成黑色.重新滅菌假如一次滅菌無效,可以重新進行滅菌過程,但是,培養(yǎng)基是不可以進行第二次滅菌的,應(yīng)拋棄.儲存滅菌完成后,培養(yǎng)基和器皿應(yīng)妥善儲存.一般來說,培養(yǎng)基應(yīng)存放于避光的潔凈空間,同時應(yīng)參照供應(yīng)商的指示.

第二章10/7/20235無菌技術(shù)–高壓濕熱滅菌(Autoclave)要點描述原無菌技術(shù)–過濾(Filtration)要點描述簡述物理分離方法,使用高效過濾將微生物從液體培養(yǎng)基分離使用于對熱敏感的培養(yǎng)基和化學(xué)品,

比如,當(dāng)需要酒石酸來調(diào)節(jié)OSA的酸度時由于不需要加熱和冷卻過程,過濾比高溫濕熱滅菌省時間,過濾頭0.2微米的過濾頭可以分離所有的細菌營養(yǎng)體,

把它安裝在針筒末端.第二章10/7/20236無菌技術(shù)–過濾(Filtration)要點描述簡述物理無菌技術(shù)能夠保持滅過菌的培養(yǎng)基,器皿免受微生物污染保證實驗的有效性第二章10/7/20237無菌技術(shù)能夠保持滅過菌的培養(yǎng)基,器皿免受微生物污染第二章7無菌過程注意點要點描述綜述一旦培養(yǎng)基或者器皿經(jīng)過滅菌過程,這種滅菌狀態(tài)應(yīng)保持直到實驗結(jié)束.區(qū)域最好能把培養(yǎng)基準(zhǔn)備區(qū)域(門外)和實驗區(qū)域(門內(nèi))分開.關(guān)于實驗室布局在第五章討論工作臺面工作前必須消毒,可以用70%的酒精,

也可以用含氯的消毒劑.在第六章具體討論消毒時間不管使用何種消毒劑,需要提供充分的消毒時間來殺滅微生物,

一般5-10分鐘.可以用紙巾擦干表面潔凈臺必須有2個光源:普通照明用和殺菌紫外光.

紫外燈用于保持工作臺面免于微生物污染.在使用前仍然需要使用消毒劑清潔.擺放應(yīng)該有好習(xí)慣把工作桌面的物品擺放好,把移動放到最低限度,

避免帶來污染鑷子如果使用薄膜過濾法,需要準(zhǔn)備一個小燒杯并有少量酒精,

鑷子不用時就放在杯子里培養(yǎng)基培養(yǎng)基使用前,應(yīng)該有相關(guān)日期,比如配置日期,或者實驗室收到日期(直接使用的培養(yǎng)基).假如沒有所需日期,

這個培養(yǎng)基不能使用.實驗服穿著干凈的實驗服,袖子應(yīng)卷起至肘部以避免碰到培養(yǎng)基或樣品帶來污染,當(dāng)然,做實驗前要洗手.第三章10/7/20238無菌過程注意點要點描述綜述一旦培養(yǎng)基或者器皿經(jīng)過滅菌過程,實驗的無菌技術(shù)注意點–前采樣個人衛(wèi)生酒精燈樣品應(yīng)無菌采得使用無菌采樣袋或者采樣瓶采樣員應(yīng)戴防護手套,在采樣前燒采樣口樣品容器應(yīng)緊閉并安全儲存.萬一培養(yǎng)基或者樣品濺到實驗服上,應(yīng)在做完一個實驗后換上干凈的咳嗽或者鼻塞可能會帶來微生物并影響實驗,

應(yīng)戴好防護手套面罩.

在第六章具體討論使用本森燈或者酒精燈,在實驗前點燃火焰在實驗區(qū)域產(chǎn)生一個防護層,可以防止那些懸浮在空氣中的微生物掉落在工作臺面上或者培養(yǎng)基上.第四章10/7/20239實驗的無菌技術(shù)注意點–前采樣個人衛(wèi)生酒精燈樣品應(yīng)無菌采得實驗的無菌技術(shù)注意點–中開瓶瓶口培養(yǎng)皿開瓶前,

應(yīng)用清潔劑的紙巾清潔瓶蓋和附近區(qū)域,除去蓋子上可能留存的微生物蓋子打開后,玻璃瓶口應(yīng)進行滅菌,

可以在酒精燈上方旋轉(zhuǎn)瓶口和螺紋,一般2-3秒.

當(dāng)打開培養(yǎng)皿時,

不能完全移除蓋子,而應(yīng)該保持在培養(yǎng)皿的上側(cè),從而能夠倒入培養(yǎng)基或者樣品,這樣可以減少空氣灰塵或者微生物的污染;倒完培養(yǎng)基或者樣品后,

瓶口重新過火,蓋蓋子,用消毒劑清潔.第四章10/7/202310實驗的無菌技術(shù)注意點–中開瓶瓶口培養(yǎng)皿開瓶前,應(yīng)用清潔實驗的無菌技術(shù)注意點–中濾膜鑷子打開薄膜包裝,絕對不能碰到薄膜!用鑷子把薄膜移除包裝并放到過濾頭上,過濾的漏斗不能完全移開,只需移開一點點放入濾膜即可過濾完后,用鑷子把濾膜轉(zhuǎn)到培養(yǎng)皿中,放置于中間用鑷子轉(zhuǎn)移濾膜過火時,拿住鑷子的尾部,放到火焰上,保持一下能夠到火就好,時間太長會在尖部結(jié)碳

拿鑷子的時候,尾部向上直至燒完.第四章10/7/202311實驗的無菌技術(shù)注意點–中濾膜鑷子打開薄膜包裝,絕對不實驗的無菌技術(shù)注意點–后實驗結(jié)束打掃廢棄物實驗結(jié)束后,培養(yǎng)皿放入培養(yǎng)箱;剩余的培養(yǎng)基可以放回儲存區(qū)域,蓋子必須蓋緊

拋棄廢棄物,比如樣品袋;可回用的物品放在遠離工作區(qū)域的地方以回收,清洗,滅菌.用含有消毒劑的紙巾清潔工作臺面.在實驗過程中暴露于微生物的物品應(yīng)作為有害廢棄物這些廢棄物可能含有微生物并致病;假如含有致病菌可能會產(chǎn)生公共衛(wèi)生的事件.最好廢棄物能夠進行濕熱滅菌第四章10/7/202312實驗的無菌技術(shù)注意點–后實驗結(jié)束打掃廢棄物實驗結(jié)束后,實驗室布局一個設(shè)計合理的實驗室能提供一個合格的環(huán)境以支持實驗?zāi)軌虬踩行У剡M行.首先,需要為實驗室選擇一個合適的物理位置:遠離其他操作區(qū)域,比如,生產(chǎn)或者儲運沒有從其他區(qū)域進入實驗室的直接入口實驗室必須是微生物實驗專用實驗室應(yīng)分為準(zhǔn)備區(qū)域和測試區(qū)域.濕熱滅菌鍋,作為這兩個區(qū)域的典型的分隔(門).這種分隔保證了能有效使用無菌技術(shù)并幫助防止培養(yǎng)基和樣品的交叉污染.假如兩個區(qū)域無法分開,實驗室應(yīng)根據(jù)實驗準(zhǔn)備和測試兩個行為來區(qū)分不同的區(qū)域.第五章10/7/202313實驗室布局一個設(shè)計合理的實驗室能提供一個合格的環(huán)境以支持實驗實驗室布局–要點通風(fēng)和氣流安保工作區(qū)域微生物實驗室應(yīng)該有單獨的通風(fēng)系統(tǒng),與其他操作區(qū)域的空氣供給分開;房間應(yīng)該是負壓的,

這表示實驗室里面的空氣永遠是向內(nèi)流動的;空調(diào)系統(tǒng)的排氣必須直接排出實驗室,空調(diào)系統(tǒng)應(yīng)定時清洗,并關(guān)注空氣過濾器的清潔實驗室應(yīng)該是限制進入的,可以是卡片控制或者其他方式,

只有那些被允許進入實驗室的人員才能進入實驗室人員應(yīng)該有充足的工作區(qū)域,從GLP標(biāo)準(zhǔn)來說,

每人應(yīng)有20平方米的區(qū)域.充足的工作區(qū)域可以避免工作中人員的碰撞,也避免了交叉污染.可編輯第五章10/7/202314實驗室布局–要點通風(fēng)和氣流安保工作區(qū)域微生物實驗室應(yīng)該有實驗室布局–要點易清潔門和窗照明實驗室的墻面,屋頂和門都應(yīng)該是平滑的,光潔易于清洗消毒的;墻的接縫包括強和墻之間,

強和地面之間應(yīng)該是弧形的任何地方都應(yīng)該不能聚集灰塵,

例如窗臺或者窗簾柜子應(yīng)該是可移動的或者是不著地的以方便清掃.窗戶應(yīng)密封,門應(yīng)緊閉以避免外面空氣進入實驗室如果窗戶壞了或者有裂縫額,應(yīng)及時報修,并盡快修好實驗室應(yīng)有充足的照明,包括不間斷電源或者備用發(fā)電機.第五章10/7/202315實驗室布局–要點易清潔門和窗照明實驗室的墻面,屋頂和門實驗室布局設(shè)計合理的實驗室可以降低交叉污染的風(fēng)險并營造一個讓無菌操作和其他GLP規(guī)范能很好實施的環(huán)境第五章10/7/202316實驗室布局設(shè)計合理的實驗室可以降低交叉污染的風(fēng)險并營造一個讓GLP要點–工作區(qū)域要點描述總體安排實驗前應(yīng)做好儀器,

試劑和培養(yǎng)基的所有準(zhǔn)備工作,這樣可以合理利用時間并得到穩(wěn)定的實驗結(jié)果桌面安放多余的培養(yǎng)皿,燒瓶或者濾紙可能會干擾實驗并帶來潛在的濺出,

打碎或者交叉污染.實驗前消毒在配制培養(yǎng)基或者開始試驗前,

應(yīng)該清潔并消毒工作桌面.最佳的消毒劑是70%的酒精溶液,含氯水的溶液,或者公司批準(zhǔn)的其他消毒劑.最好使用一次性的消毒紙巾,不能使用毛巾或者海綿.清潔后,應(yīng)等待幾分鐘以使有充分的時間殺滅微生物,可以用紙巾擦干.試驗后消毒實驗結(jié)束后,徹底清潔工作區(qū)域,仍然使用70%酒精溶液或者公司批準(zhǔn)的其他消毒劑,保持一段時間,然后擦干有害廢棄物的處置必須有效管理微生物的有毒廢棄物,任何和微生物培養(yǎng)或者培養(yǎng)基相關(guān)的物品都應(yīng)被看作有害物質(zhì);

因為他們可能含有致病菌,需要小心處理廢棄物的滅菌濕熱滅菌是最簡單也是最有效的處理污染物質(zhì)和有害物質(zhì)的方法.用過的培養(yǎng)皿應(yīng)放在滅菌袋中.滅菌后,可以當(dāng)作一般廢棄物處理重復(fù)使用器皿的滅菌當(dāng)需要對小件物品(比如移液管)滅菌時,

可以根據(jù)實際用量分組包裝.濕熱滅菌后,袋包裝冷卻并保存.避免浪費合理安排是非常重要的;實驗室工作需要精準(zhǔn),但是有時候我們也需要快速工作,因為花非常多時間會延長設(shè)備,

培養(yǎng)基,或者樣品暴露在環(huán)境中的時間.把需要用的物品放在手邊可以用的地方可以節(jié)約時間并提高工作的有效性.第六章10/7/202317GLP要點–工作區(qū)域要點描述總體安排實驗前應(yīng)做好儀器,GLP要點–工作區(qū)域桌面安放實例樣品采集工具未使用培養(yǎng)皿已使用培養(yǎng)皿樣品和器皿工作區(qū)域已使用器皿第六章10/7/202318GLP要點–工作區(qū)域桌面安放實例樣品采集工具未使用培養(yǎng)皿GLP要點–潔凈工作臺簡介使用監(jiān)控潔凈工作臺提供了控制來自環(huán)境的污染并提供工作區(qū)域的潔凈空氣.

潔凈空氣吹向工作區(qū)域,同時,可以避免外部空氣進入工作區(qū)域使用時,紫外光線(或者紫外燈)應(yīng)關(guān)閉,但是使用后應(yīng)打開.如果紫外燈沒有打開工作臺沒有開啟,工作臺不能開始使用;

必須清潔工作臺,開啟電源并打開紫外燈,保持30分鐘.潔凈工作臺需要進行日常的確認(rèn),一般有第三方公司進行.第六章10/7/202319GLP要點–潔凈工作臺簡介使用監(jiān)控潔凈工作臺提供了控制來GLP要點–個人衛(wèi)生要點描述概述應(yīng)確保樣品和培養(yǎng)基沒有被任何可能被衣服或者身體帶來的灰塵或者微生物污染.工作服在實驗室,必須穿合適的,

干凈的工作服.如果工作服被培養(yǎng)基或者樣品污染,應(yīng)及時換下.實驗室也可以有一個專門存放使用過的和被污染的工作服,也應(yīng)該準(zhǔn)備充足的干凈的工作服,同時,也應(yīng)該記住工作服不能穿出實驗室頭發(fā)假如你有長發(fā),應(yīng)盤起或夾住以避免發(fā)尾接觸培養(yǎng)基或者樣品.有些實驗室需要發(fā)帽來避免可能污染,不要在實驗室梳頭.洗手應(yīng)該在接觸樣品或者培養(yǎng)基前后徹底洗手,同時確保清洗指甲和縫隙.使用溫水和洗手液,并使用紙巾擦干.指甲應(yīng)保持清潔和光滑,最好不留長指甲,不要在實驗室剪指甲關(guān)注手和手臂的安全如果手上有傷口,必須用防水貼或者繃帶包裹;

如果手或者手臂有傷口感染,在愈合前不能在微生物實驗室工作首飾和服裝在無菌操作培養(yǎng)基或者樣品的時候應(yīng)脫去戒指,耳環(huán),項鏈等物品.

各種蓬松的衣物,比如長絲巾或領(lǐng)帶,可能或碰到樣品或者培養(yǎng)基,也應(yīng)該在進入實驗室前脫去.不要穿露腳趾的鞋.潛在的污染物不應(yīng)該攜帶潛在的污染物,

比如飲料和食物,手機,或者其他媒體播放機進入實驗室.實驗室禁止吸煙.個人衛(wèi)生的益處良好的個人衛(wèi)生微生物實驗室的重要因素,可以避免各種對于實驗的負面影響.第六章10/7/202320GLP要點–個人衛(wèi)生要點描述概述應(yīng)確保樣品和培養(yǎng)基沒有被安全工作一個有效的實驗室應(yīng)該是一個安全的實驗室.假如疏忽安全的話,許多每天使用的培養(yǎng)基或者設(shè)備會產(chǎn)生危害.減少這些危害帶來的風(fēng)險不僅僅保護了工作場所,更重要的是,保護了自身免于危險利用常識并遵照GLP相關(guān)的安全規(guī)則,我們就能把由于微生物相關(guān)的行為帶來的潛在危害降低到最小.第七章本章包含如下內(nèi)容安全用品移動操作明火濕熱滅菌鍋潔凈臺樣品操作10/7/202321安全工作一個有效的實驗室應(yīng)該是一個安全的實驗室.假如疏忽安安全工作(1)安全用品移動安全用品包含口罩,手套和眼部防護.口罩防止培養(yǎng)基和樣品受到污染,可能來自于咳嗽或者鼻涕;根據(jù)當(dāng)?shù)氐囊蠛土?xí)慣,

每個實驗室會有不同的要求戴手套是為了防止培養(yǎng)基或者其他刺激性物質(zhì)接觸皮膚;在從濕熱滅菌鍋內(nèi)取出容器或則器皿時,

需要戴防熱手套在配置培養(yǎng)基和實驗中佩戴防護眼鏡是一個很好的習(xí)慣,能夠購買帶有屈光度的防護眼鏡為佳.當(dāng)移動培養(yǎng)基或者樣品時,應(yīng)小心注意以避免濺出或者潑出;

突然的移動會產(chǎn)生安全危害或者導(dǎo)致實驗無效不要使用夸張的動作或者行為同時,不要把任何東西,比如吸管,放到嘴里第七章10/7/202322安全工作(1)安全用品移動安全用品包含口罩,手套和眼部防安全工作(2)明火濕熱滅菌鍋實驗中需要用到酒精燈或其他明火,但是假如使用不當(dāng)會帶來比較高的安全危險確保酒精燈不用時完全關(guān)閉,當(dāng)有閥門時經(jīng)常檢查墊圈是否有裂痕或者泄露.操作酒精燈時,應(yīng)確保火焰不會接觸衣物或者皮膚.

可燃物品,比如記錄本,應(yīng)遠離火焰以避免意外點燃.同時,要注意可燃液體的容器.每次使用后應(yīng)蓋好蓋子并遠離酒精燈火焰使用火焰進行滅菌工作時,可使用鑷子.把鑷子放在含有95%酒精的燒杯中,使用時,把鑷子在火焰上灼燒1-2秒,移開鑷子并等待火焰熄滅.拿著鑷子是尖端應(yīng)向下,使熱的酒精不會流到手上.濕熱滅菌鍋使