碩世手足口試劑性能驗(yàn)證報(bào)告

江蘇碩世生物公司手足口試劑性能驗(yàn)證報(bào)告試劑名稱：柯薩奇病毒A16型、腸道病毒71型和腸道病毒通用型核酸檢測試劑盒（熒光PCR法）試劑廠家：江蘇碩世生物科技股份有限公司儀器名稱：實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀型號規(guī)格：ABI7500實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)：長沙金域檢驗(yàn)中心實(shí)驗(yàn)時(shí)間：2017.9.6一、性能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)方案精密度實(shí)驗(yàn)：選擇中值陽性樣本，同一批次內(nèi)重復(fù)檢測臨床樣本，測試20次，統(tǒng)計(jì)Ct值，進(jìn)行批內(nèi)精密度驗(yàn)證，需滿足CV<3/5TEa。臨床特異性、敏感度實(shí)驗(yàn)：選取EVU、EV71、CA16臨床樣本，選取20例陽性-敏感度；選取20例陰性-特異性；要求特異性和敏感度均為100%。測定下限實(shí)驗(yàn)：選取EVU、EV71和CA16陽性樣本，進(jìn)行倍比稀釋，稀釋至Ct為36左右，驗(yàn)證檢測下限是否與說明書相符。防污染實(shí)驗(yàn)：取高濃度樣本20例與陰性標(biāo)本20例組成梅花樁試驗(yàn)，結(jié)果應(yīng)確保陽性樣本檢出率為100%，陰性樣本檢出率為0%?？垢蓴_實(shí)驗(yàn)：選取臨床陽性樣本，每個(gè)項(xiàng)目分別加入溶血陽性樣本、UU陽性樣本、ST陽性樣本、CT陽性樣本進(jìn)行擴(kuò)增，驗(yàn)證是否存在干擾情況。在滿足方法學(xué)驗(yàn)證的前提下，最終確定具體驗(yàn)證方案如下：精密度符合率檢測下限防污染抗干擾CA16/EVU10個(gè)重復(fù)20例陽性，20例陰性6個(gè)濃度，兩個(gè)重復(fù)20個(gè)陽性20個(gè)陰性4個(gè)干擾，一個(gè)對照EV71/EVU10個(gè)重復(fù)性能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析（一）精密度測試批內(nèi)精密度擴(kuò)增曲線圖1批內(nèi)精密度EV71項(xiàng)目擴(kuò)增曲線圖2批內(nèi)精密度EVU(EV71)項(xiàng)目擴(kuò)增曲線圖3批內(nèi)精密度CA16項(xiàng)目擴(kuò)增曲線圖4批內(nèi)精密度EVU(CA16)項(xiàng)目擴(kuò)增曲線注：手足口試劑在CA16或EV71陽性的情況下，EVU也會是陽性。圖2批內(nèi)精密度EVU(EV71)項(xiàng)目擴(kuò)增曲線代表的是EV71陽性樣本下EVU的曲線圖4批內(nèi)精密度EVU(CA16)項(xiàng)目擴(kuò)增曲線代表的是CA16陽性樣本下EVU的曲線CA16：柯薩奇病毒A16型EV71：腸道病毒71型EVU：腸道病毒通用型實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及評價(jià)批內(nèi)精密度EV71EVU(EV71)CA16EVU(CA16)編號測定結(jié)果編號測定結(jié)果編號測定結(jié)果編號測定結(jié)果129.53128.22137.15136.24229.56228.26236.92237.38329.52328.35336.95337.87429.45428.24437.04436.86529.62528.48536.31536.71629.83628.49637.34636.91729.42728.16736.81736.94829.67828.43837.13836.83929.64928.60937.06936.661029.601028.431038.271037.47Mean29.584Mean28.366Mean37.098Mean36.987SD0.118SD0.142SD0.494SD0.466CV0.40%CV0.50%CV1.33%CV1.26%TEa7.5%Tea7.5%TEa7.5%TEa7.5%3/5TEa0.40%<4.5%3/5Tea0.50%<4.5%3/5TEa1.33%<4.5%3/5TEa1.26%<4.5%結(jié)論：分別選擇CA16和EV71中值陽性樣本，同一批次內(nèi)重復(fù)檢測臨床樣本，測試10次，統(tǒng)計(jì)Ct值，進(jìn)行批內(nèi)精密度驗(yàn)證，需滿足CV<3/5TEa。通過統(tǒng)計(jì)計(jì)算得出三個(gè)項(xiàng)目批內(nèi)精密度的CV值均小于3/5TEa（4.5%），均符合要求。（二）臨床特異性、敏感度實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)選取EVU、EV71和CA16臨床樣本，選取20例陽性-敏感度；選取20例陰性-特異性；要求特異性和敏感度均為100%。編號結(jié)果編號結(jié)果編號結(jié)果編號結(jié)果編號結(jié)果1CA16+9－17CA16+25－33CA16+2－10CA16+18－26EV71+34－3CA16+11－19EV71+27－35CA16+4－12－20－28EV71+36－5EVU+13－21CA16+29－37CA16+6－14EV71+22－30CA16+38－7CA16+15－23EV71+31－39EV71+8－16CA16+24－32CA16+40－結(jié)論：選取EVU、EV71和CA16臨床樣本40例，其中陰性樣本20例，陽性樣本20例，提取完核酸后，采取陰陽間隔的方式點(diǎn)樣。檢測結(jié)果與樣本結(jié)果完全相符，計(jì)算結(jié)果均符合：臨床特異性=[20/（20+1）]*100%=95%；臨床敏感度=[20/（19+0）]*100%=100%（三）測定下限試驗(yàn)擴(kuò)增曲線圖5EV71項(xiàng)目梯度稀釋擴(kuò)增曲線圖6EVU(EV71)項(xiàng)目梯度稀釋擴(kuò)增曲線圖7CA16項(xiàng)目梯度稀釋擴(kuò)增曲線圖8EVU(CA16)項(xiàng)目梯度稀釋擴(kuò)增曲線實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)：取EV71和CA16陽性樣本，進(jìn)行10倍比稀釋，向下稀釋5個(gè)梯度，驗(yàn)證檢測下限是否與說明書相符項(xiàng)目原樣本結(jié)果稀釋10倍結(jié)果稀釋100倍結(jié)果稀釋1000倍結(jié)果稀釋10000倍結(jié)果稀釋100000倍結(jié)果EV7127.2932.4236.1540.2041.91Undet27.5932.5635.9940.20UndetUndet均值27.4432.4936.0740.2041.91陰性EVU(EV71)25.9830.9334.7139.2240.02Undet26.1130.9035.0539.04UndetUndet均值26.0530.9234,.8839.1340.02陰性CA1623.7027.9431.3535.5238.71Undet24.0428.0631.4135.8238.8541.74均值23.8728.0031.3835.6738.7841.74EVU(CA16)22.3426.4129.6133.7336.79Undet22.3626.1429.5233.6537.5439.77均值22.3534.2829.5733.6937.1739.77結(jié)論：試劑盒說明書EVU測定下限Ct值為<35.5，EV71測定下限Ct值為<35.3，CA16測定下限Ct值為<35.3時(shí)報(bào)告陽性，本次對EVU、EV71、CA16陽性樣本進(jìn)行梯度稀釋最低檢測出結(jié)果分別為35.05、36.07、35.67，符合說明書規(guī)定的陽性樣本最低檢出限。（四）防污染結(jié)果統(tǒng)計(jì)：取高濃度陽性樣本20例與陰性標(biāo)本20例間隔點(diǎn)樣，組成梅花樁試驗(yàn)，結(jié)果應(yīng)確保陽性樣本檢出率為100%，陰性樣本檢出率為0%。手足口項(xiàng)目防污染驗(yàn)證結(jié)果情況結(jié)果結(jié)果結(jié)果結(jié)果結(jié)果ACA16+－CA16+－CA16+B－CA16+－EV71+－CCA16+－EV71+－CA16+D－－－EV71+－EEVU+－CA16+－CA16+F－EV71+－CA16+－GCA16+－EV71+－EV71+H－CA16+－CA16+－注：陰陽間隔點(diǎn)樣，梅花樁分布。結(jié)論：本次實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果顯示19例陽性檢出率(19/19)*100%=100%，21例陰性樣本檢出率為(0/21)*100%=0%，符合預(yù)期結(jié)果。（五）抗干擾實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及評價(jià)：項(xiàng)目生理鹽水溶血樣本CT樣本ST樣本UU樣本EV7126.2827.4428.0227.5326.57EVU（EV71）26.7228.1227.9727.8226.71CA1627