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核酸作為一切分子生物學(xué)研究的基礎(chǔ)，而且提取的核酸質(zhì)量高低也是決定下游實驗成敗的關(guān)鍵因素之一。磁珠法提取和硅膠膜離心柱法提取是的兩種提取方法。那么，這兩種提取方法各有什么特點？提取流程與原理又是什么呢？核酸提取過程中的常見問題有哪些呢？

硅膠膜離心柱法核酸提取原理

硅膠膜表面的硅醇基團(tuán)呈弱酸性，其水化后帶負(fù)電。當(dāng)溶液中存在一定濃度的陽離子后，形成的陽離子橋能夠中和DNA和硅醇基團(tuán)之間的表面負(fù)電荷，從而使DNA牢固地吸附在硅膠膜表面。反之，處于低鹽水溶液狀態(tài)下時，由于硅膠膜的硅醇基團(tuán)與DNA磷酸基團(tuán)之間的靜電排斥，硅膠膜釋放DNA。

流程

特點實驗流程操作簡單；價格低廉；提取濃度濃度高，純度高。

磁珠法核酸提取原理運(yùn)用納米技術(shù)，對超順磁性納米顆粒的表面進(jìn)行表面修飾制備成超順磁性氧化硅納米磁珠。核酸結(jié)合到磁珠上主要依靠靜電作用、疏水作用和氫鍵作用。在鹽離子和外加磁場的作用下，能從樣本中分離出核酸，并洗去非特異性吸附的雜質(zhì)，得到純化后的核酸。

流程

特點能夠?qū)崿F(xiàn)自動化、大批量的實驗操作；操作簡單，用時短，如核酸提取10分鐘內(nèi)可以完成；安全無毒，符合環(huán)保理念。

核酸提取常見的問題及解決方案

問題一：

A260/A280異常是什么原因呢？

A260/A280比值應(yīng)大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。DNA提取中RNA污染會增高260/280比值；RNA提取中RNA降解會增高260/280比值；蛋白的污染會降低A260/A280比值。

問題二：A260/A230異常是什么原因呢？

較純凈的核酸A260/A230的比值一般在1.8-2.2之間；酚、胍鹽、蛋白的污染會降低A260/A230的比值；當(dāng)樣本核酸濃度太低時，A260/A230結(jié)果不準(zhǔn)確，會導(dǎo)致比值偏低；當(dāng)樣本濃度低于50ng/μl，A260/A280、A260/A230比值波動非常大，應(yīng)謹(jǐn)慎對待！

問題三：提取的基因組DNA生物活性差，為什么？

提取的基因組DNA中鹽分濃度過高，請嚴(yán)格按照說明書操作；提取的基因組DNA中含有乙醇。離心的速度和時間應(yīng)該嚴(yán)格遵循說明書要求進(jìn)行。

問題四、質(zhì)粒提取時出現(xiàn)細(xì)菌基因組的污染是怎么回事呢？

菌體裂解和中和過程中,劇烈混合造成基因組DNA斷裂所致。請溫和地進(jìn)行菌體的裂解和中和；每一步嚴(yán)格按照說明書的操作時間；細(xì)菌的質(zhì)量差，中有許多斷裂或降解而游離的基因組DNA，請使用生長良好的新鮮細(xì)菌。

問題五：磁珠法提取時，洗脫液中有磁珠有殘留怎么辦？

篩選、選擇匹配的磁珠；調(diào)節(jié)設(shè)備，增強(qiáng)外磁場；放慢磁介入速度并延長磁吸時間。

問題六：洗滌洗脫時磁珠有結(jié)塊怎么辦？

縮短干燥時間；增強(qiáng)混勻震蕩強(qiáng)度。

問題七：增加磁珠量是否可以提高核酸得率？

NO！通常情況下，磁珠法試劑盒給出的參考磁珠用量都是略微過量的。過多的磁珠將無法均勻分散于液體中；過量的磁珠會吸附更多的雜質(zhì)；過多的磁珠會吸附蛋白酶、溶菌酶等功能成分，導(dǎo)致整個提取效率降低。

問題八：一種磁珠是否適配所有的核酸提取體系？

NO！于不同磁珠適合的體系和用量是不同的，往往需要調(diào)整后才能獲得更好的提取效果。有的磁珠適合偏酸性系列的試劑體系，有的適合偏堿性系列的試劑體系；有的磁珠磁響應(yīng)性好但是沉降速度快，更適合磁棒式自動提取儀；有的磁珠沉降速度慢但是磁響應(yīng)時間長，更適合移液式自動提取儀。

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