附子炮制減毒作用及機(jī)制研究概述

附子炮制減毒作用及機(jī)制研究概述

附子最早出現(xiàn)在《神農(nóng)本草經(jīng)》中。它嘗起來又冷又甜，性質(zhì)特別熱，有毒。據(jù)說“在困難時(shí)期，合理的將軍返回陽(yáng)陽(yáng)是第一位替代品，以及對(duì)生命和真火的第一次渴望?！??！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》謂:“附子,味辛溫,主風(fēng)寒欬逆邪氣,溫中,金瘡,破癥堅(jiān)積聚,血瘕,寒濕踒躄,拘攣膝痛,不能行步”?！毒霸廊珪分^:“人參、熟地黃、附子、大黃,實(shí)乃藥中之四維,病而至于可畏,勢(shì)非庸庸所濟(jì)者,非此四物不可?！薄坝莶?稟雄壯之質(zhì),有斬關(guān)奪將之氣,能引補(bǔ)氣藥行十二經(jīng),以追復(fù)散失之元陽(yáng);引補(bǔ)血藥入血分,以滋養(yǎng)不足之真陰;引發(fā)散藥開腠理,以驅(qū)逐在表之風(fēng)寒。引溫暖藥達(dá)下焦,以祛除在里之冷濕”。《名醫(yī)別錄》則謂有“大毒”,后世多因其有“毒”而畏之。惲鐵樵說:“附子最有用,亦最難用”。近代研究表明,附子含有烏頭堿,而烏頭堿則對(duì)心臟、血壓、心率都有著廣泛的影響,中毒后可出現(xiàn)流涎、惡心、嘔吐、腹瀉頭暈、舌頭四肢發(fā)麻、手足抽搐、呼吸困難、心律紊亂等等表現(xiàn)。由于附子的毒性之大,附子的炮制就顯得格外重要?！侗静輪柎稹?“四川彰明縣采制附子,必用鹽腌,其腌附子之鹽,食之毒人至死,并無藥可解,可知附子之毒甚矣。然將腌附子之鹽,放于竹筒中,用火煅過,則無毒,入補(bǔ)腎藥,又溫而不烈,反為良藥”。本文就近幾年附子的炮制減毒研究略作表述。1附片加肉和烘烤對(duì)附子質(zhì)量的影響漢代張仲景的《傷寒論》中共載方113條,運(yùn)用附子的方占33條。其中17條方用生附子(配干姜),16方用炮附子,說明漢代時(shí)已開始用“炮”的方法制附子了。《傷寒論》與《金匱要略》中,其炮制方法是“口父咀”“炮,去皮”;晉代葛洪的《肘后備急方》中方法是“炮,炮去皮臍,燒”;南齊《劉涓子鬼遺方》有“炮裂”之說;《雷公炮炙論》則較為詳細(xì)地介紹了火炮法制附子。唐宋時(shí)期已經(jīng)發(fā)展為火制和輔料制兩種方法。以后歷代不斷發(fā)展改進(jìn),主要有火制法的炮、燒、炒、炙、蒸、煮等;輔料制法的醋制、蜜制、姜汁制、童便制、甘草制等。隨著現(xiàn)代技術(shù)的法展,結(jié)合傳統(tǒng)炮制工藝,又有許多新的附子炮制方法出現(xiàn),對(duì)附子的減毒存效、臨床應(yīng)用具有重要意義,下面略作總結(jié)。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展,附子的炮制還出現(xiàn)一些現(xiàn)代炮制方法,如王莉等將洗凈的附子浸入食鹽膽巴水?dāng)?shù)日,經(jīng)漂洗切片后,在110℃及0.7kg·cm-2條件下蒸30min,干燥即得。此方法可破壞毒性生物堿成分,保留強(qiáng)心成分且簡(jiǎn)化工藝。盧文清等采用的塘灰火炮附子的煨制方法,首先將附子凈選,清水浸漂,鹽附子漂至以微咸為度,晾干表皮。然后進(jìn)行煨制,有2種方法,一是柳木灰火煨制法,一是谷殼灰火煨制法。煨附子經(jīng)漂、煨、姜汁制后,毒性變小,副作用減少,其性溫和,有回陽(yáng)救逆、益氣固脫、補(bǔ)精髓、溫腎陽(yáng)、補(bǔ)腦化虛痰的作用。楊明等用微波炮制附子。凈附子去皮后、入50%老水中浸泡10~15h,再換清水浸漂20~24h,如此反復(fù)2~4次的水處理后蒸制10~20min,晾干或烘干后用2450MHz或915MHz的微波機(jī)進(jìn)行輻射干燥,制得含水量為10%以下的附子。其生產(chǎn)效率大大提高,且易控制火候,成本低,制得附子毒性低且藥效好。吳榮祖運(yùn)用現(xiàn)代工藝控溫、控濕、常壓水提、醇沉、濃縮、噴霧干燥制粒作附子顆粒,不僅保持了附子的原有藥效,而且還表現(xiàn)出增效的多項(xiàng)試驗(yàn)指標(biāo),提高了附子的有效性和藥用價(jià)值,為高效,安全,穩(wěn)定的附子新型顆粒制劑。對(duì)炮制產(chǎn)物總生物堿的含量測(cè)定和炮制過程中每一步驟母液總生物堿含量進(jìn)行回收測(cè)定可以看出,附子生物堿的流失主要在泡、浸、漂的過程中,三步總計(jì)損失總生物堿80%以上。鄧文偉探討了烘箱烘烤對(duì)附子中雙、單酯型生物堿含量的影響。采用切片→護(hù)色→燙漂→烘烤的方式對(duì)附子進(jìn)行加工,以雙、單酯型生物堿含量作為檢測(cè)指標(biāo),通過正交設(shè)計(jì)考察燙漂時(shí)間、烘烤溫度、烘烤時(shí)間對(duì)附子中兩類生物堿含量的影響。結(jié)果《中國(guó)藥典》中對(duì)白附片、黑順片、淡附片的限量要求,有效減少了生物堿的損失,達(dá)到既減毒又使得有效成分不流失。本試驗(yàn)結(jié)果說明烘箱烘烤能很好地降低附子中毒性成分含量,增加藥效成分含量,為附子新型炮制品和降毒增效工藝的研發(fā)提供試驗(yàn)依據(jù)。對(duì)于附子炮制,質(zhì)量好的判定標(biāo)準(zhǔn)是既有療效,又有安全性,臨床醫(yī)生考慮最多的是使用同樣炮制方法炮制出的附子的用量和劑型的搭配,若能夠把此兩者結(jié)合,對(duì)于臨床醫(yī)生安全應(yīng)用附子將會(huì)有很大幫助。但是關(guān)于附子炮制前后以及改變劑型是否會(huì)影響療效值得進(jìn)一步研究。另外,臨床應(yīng)用中應(yīng)注意使用正規(guī)產(chǎn)地、正規(guī)渠道所得藥品,一般可防止因炮制引起中毒的問題。2樣品的色譜鑒別藥典采用烏頭堿限量法:取黑順片、白附片或淡附片粗粉20g,置具塞錐形瓶中,加乙醚150mL,振搖10min,加氨試液10mL,振搖30min,放置1~2h,分取醚層,蒸干,加無水乙醇2mL使溶解,作為供試品溶液。另取烏頭堿對(duì)照品,加無水乙醇制成每1mL含2mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2000年版附錄VIB)試驗(yàn),吸取供試品溶液6μL、對(duì)照品溶液5μL,分別點(diǎn)于同一堿性氧化鋁薄層板上,以正己烷-醋酸乙酯(1∶1)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以碘化鉀碘試液與碘化鉍鉀試液的等容混合液。供試品色譜中,在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上出現(xiàn)的斑點(diǎn)應(yīng)小于對(duì)照品的斑點(diǎn)或不出現(xiàn)斑點(diǎn)。有文獻(xiàn)研究表明酯型生物堿在酸性條件下穩(wěn)定,因而采用0.05mol·L-1鹽酸溶液超聲提取無需控制溫度,酸水可直接進(jìn)樣50μL,6種酯型生物堿色譜峰分離良好,供試品制備方法簡(jiǎn)便,易于操作。3以養(yǎng)肉和抗炎為主的藥物治療組附子生品有毒,現(xiàn)極少內(nèi)服,多外用,如治久患口瘡,生附子未醋調(diào),貼足心(《衛(wèi)生易簡(jiǎn)方》);治療腫,研末醋調(diào)外用。經(jīng)加工炮制后,可降低毒性,便于內(nèi)服。附片、黑順片、白附片可直接入藥,炮附片以溫腎暖脾,補(bǔ)命門之火力勝。用于心腹冷痛,虛寒吐瀉,冷痢腹痛,冷積便秘,或久痢赤白等證。淡附片以回陽(yáng)救逆,散寒止痛為主。用于亡陽(yáng)虛脫,肢冷脈微,寒濕痹痛,心腹疼痛,陽(yáng)虛水腫,陽(yáng)虛感冒等證。如治寒濕痹痛的甘草附子湯(《傷寒論》);治陽(yáng)虛水腫的腎氣丸(《金匱要略》);治陽(yáng)虛感冒的麻黃細(xì)辛附子湯(《傷寒論》)治精瀉不禁的正陽(yáng)丸(《圣濟(jì)總錄》);治肢厥無脈的回陽(yáng)救急湯(《重訂通俗傷寒論》)。邵峰等通過醋酸扭體法,以小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)為考察指標(biāo),觀察附子不同炮制品的鎮(zhèn)痛作用;通過二甲苯致小鼠耳腫脹法,以小鼠耳腫脹度為考察指標(biāo),觀察附子不同炮制品的抗炎作用。結(jié)果與模型組比較,鹽附子與黑順片均可明顯抑制醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)次數(shù),黑順片可明顯降低二甲苯所致的小鼠耳腫脹度(P<0.05)。證明隨著炮制工藝的不同,可能雙酯型烏頭堿類成分遭到不同程度的破壞,造成附子不同炮制品的鎮(zhèn)痛抗炎作用不盡相同,其中黑順片具有良好的鎮(zhèn)痛抗炎作用,鹽附子僅鎮(zhèn)痛作用效果明顯,白附片鎮(zhèn)痛抗炎作用效果均不明顯。炮制后由于雙酯型烏頭堿類成分的分解使其毒性降低,但鎮(zhèn)痛、抗炎作用仍然很明顯,如果炮制太過,水解完全,則藥效也會(huì)降低?，F(xiàn)已證明附子中的劇毒物雙酯類烏頭堿遇高熱易被破壞,分解為毒性較小的生物堿,可見古代醫(yī)家用火來處理附子,確有一定的科學(xué)道理?；鹬品ú坏芙档透阶拥亩拘?而且在避免有效成分的流失,保存藥效等方面都有很大好處。其缺點(diǎn)是去毒的程度很難掌握,并容易燒焦、燒壞藥材。不同炮制方法的附子功用各有側(cè)重,但是目前臨床應(yīng)用區(qū)分不大,醫(yī)院常用者為黑順片。4不同濃度的附子炮制品從古至今,為了臨床應(yīng)用的安全有效,人們對(duì)附子的炮制減毒機(jī)制進(jìn)行了研究探討。明代《景岳全書》精辟地總結(jié)出甘草解附子毒的原理;“以附子之性急,得甘草而后緩;附子之性毒,得甘草而后解;附子之性走,得甘草而后益心脾;附子之性散,得甘草而后調(diào)營(yíng)衛(wèi)”“若欲急用,以厚紙包裹,沃甘草湯,或煨,或炙,待其柔軟,切開,再用紙包頻沃,又炙,以熟為度?！蓖瑫r(shí)認(rèn)為附子長(zhǎng)久煎煮亦能解其毒性。對(duì)于炮制所用輔料:“有單用童便煮者,有用姜汁鹽水者,有用甘草、黃連者,有數(shù)味皆兼而用者,其中宜否,最當(dāng)詳辯。”“附子之性熱而剛急,走而不守,士人腌以重鹽,故其味咸而性則降。今之所以用之者,正欲用其熱性以回元陽(yáng),以補(bǔ)脾腎,以行參、芪、熟地黃等功,若制以黃連,則何以藉其回陽(yáng)?若制以鹽水,則反以助其降性。若制以童便,則必不免于尿氣,非惟更助其降,而凡脾氣大虛者,極易嘔噦,一聞其臭,便動(dòng)惡心,是藥未入口,而先受其害,且其沉降尤速,何以達(dá)脾?”“惟是姜汁一制頗通,第其以辛助辛,似欠和平,若果直中陰寒等證,欲用其熱,此法為良;至若常用而欲得其補(bǔ)性者,不必用此?！闭J(rèn)為附子藥性剛急,走而不守。臨床主要是利用其熱性挽回過多損耗的元陽(yáng),補(bǔ)脾腎之陽(yáng),增強(qiáng)人參、黃芪、熟地黃等藥的補(bǔ)益作用。如果用黃連水制,則不能起到回陽(yáng)功效;如果用大量鹽腌制或鹽水制,則使其味咸,藥性也隨之下降;如果用童便制,難免沾上尿氣,加劇其下降之性,而且脾氣大虛的人容易嘔吐,聞到味便會(huì)覺得惡心,更不能使藥力達(dá)到脾臟而補(bǔ)益脾陽(yáng)。如果用姜制,以生姜的辛熱增強(qiáng)附子的辛熱,藥性雖有些偏激,但對(duì)于寒邪較重的病癥需用藥物的熱性時(shí),則該法合適。但若需長(zhǎng)期用藥以獲得藥物的補(bǔ)益作用時(shí),則不用此法。炮制太過將失去藥效,“白水煮之極熟,則亦全失辣味,并其熱性俱失,形如蘿卜可食矣”?，F(xiàn)代研究表明,其炮制減毒機(jī)制主要為:(1)劇毒性的雙酯型烏頭堿在加工炮制過程中水解成苯甲酰單酯型生物堿,進(jìn)而水解成醇胺類烏頭原堿類生物堿;(2)烏頭堿類成分其結(jié)構(gòu)上8位乙?；恢觉；脫Q,而生成毒性較小的脂生物堿;(3)在炮制過程中浸、泡、漂、煮等使各種類型的生物堿均被破壞和流失。浸、泡、漂的過程,損失總生物堿80%以上,而蒸法則可比較有效地保持成分和降低毒性。另外一個(gè)流失去向是去皮。附子中含有的多種二萜雙酯類生物堿具有很強(qiáng)的心臟毒性,其水解后形成的烏頭原堿則毒性大大降低,水解后二萜雙酯堿含量下降而苯甲酰烏頭原堿含量升高,按生藥計(jì),其LD50值提高10~100倍不等。很多實(shí)驗(yàn)報(bào)道證明附子炮制毒性降低,相應(yīng)雙酯型生物堿含量也相應(yīng)減少。朱日然等通過測(cè)定附子及熟附片(干片蒸制)、黑順片、熟附片(鮮片蒸制)、鹽附子、炮附片中次烏頭堿、烏頭堿、新烏頭堿的量,結(jié)果發(fā)現(xiàn)與生附子相比,次烏頭堿、烏頭堿、新烏頭堿在清水黑順片、鹽附子等炮制品中的量大大降低。王瑞等也通過RP-HPLC方法,分離和測(cè)定15種附子炮制品中烏頭堿、新烏頭堿、次烏頭堿的含量。發(fā)現(xiàn)不同附子炮制品中烏頭堿、新烏頭堿、次烏頭堿含量差異懸殊。王小平分別采用江西建昌幫煨制法、樟樹幫法與《中國(guó)藥典》方法制備附子炮制品,以高效液相色譜(HPLC)方法測(cè)定其中新烏頭堿、烏頭堿與次烏頭堿含量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同的附子炮制品中新烏頭堿、烏頭堿與次烏頭堿的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為:建昌幫煨制法:(2.11±0.28),(6.70±0.19),(11.24±0.93)μg·g-1;樟樹幫法:(2.35±0.37),(3.21±0.89),(8.05±0.90)μg·g-1;《中國(guó)藥典》法(1.41±0.16),(1.64±0.21)μg·g-1。趙納分別采用炒法、蒸法、膽水浸泡及混合溶液浸泡對(duì)附子進(jìn)行炮制。采用UV和RP-HPLC方法分別測(cè)定附子4種加工品中總生物堿和新烏頭堿、烏頭堿、次烏頭堿等雙酯型生物堿的含量。結(jié)果表明附子不同炮制品中生物堿的含量呈現(xiàn)明顯的差異,蒸制品和炒制品含量可以達(dá)到《中國(guó)藥典》規(guī)定酯型生物堿以烏頭堿計(jì),不得超過0.15%的規(guī)定。生附子和白附片煎煮過程中酯型生物堿含量的變化規(guī)律不同,總體趨勢(shì)是雙酯型生物堿轉(zhuǎn)化為焦新烏頭堿、焦烏頭堿、焦次烏頭堿和苯甲酰新烏頭原堿、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿。以上實(shí)驗(yàn)證明不同炮制方法對(duì)附子生物堿含量有顯著影響。李志勇通過對(duì)不同炮制時(shí)間附子飲片的毒-效性與飲片3種雙酯型生物堿的含量變化進(jìn)行相關(guān)性研究。發(fā)現(xiàn)具有“回陽(yáng)救逆”功效和“高效低毒”特點(diǎn)的附子飲片保存了適量的中烏頭堿和次烏頭堿,烏頭堿干擾了附子回陽(yáng)救逆功效的顯現(xiàn)(負(fù)相關(guān)),次烏頭堿與附子的毒性和回陽(yáng)救逆功效均成正相關(guān)。所以說中烏頭堿、次烏頭堿在飲片中的適當(dāng)配比存在是保證附子“回陽(yáng)救逆”及安全性的關(guān)鍵。張鈺祺利用紫外譜線組法測(cè)試附子生品及4種炮制品在不同極性溶劑中的紫外譜線圖譜,根據(jù)它們的紫外譜線圖譜峰位置的差異,對(duì)其加以區(qū)分鑒別,并比較炮制前后的變化,發(fā)現(xiàn)附子生品及炮制品的紫外譜線組圖像、最大吸收峰數(shù)目及峰位值具有明顯的差異,其中三氯甲烷提取部位尤其明顯,可以從一定程度上說明附子中所含的生物堿成分經(jīng)不同的方法炮制后產(chǎn)生了量與質(zhì)的變化,這與炮制方法的不同而減毒作用、減毒程度不同有密切的關(guān)聯(lián)。比較炮制附子時(shí)使用的不同輔料與其毒性的關(guān)系,結(jié)果表明,僅甘草、干姜有一定的解毒作用。金銀花、黑豆、白礬、豆腐、皂角等均不甚明顯,其中白礬還有增強(qiáng)毒性的現(xiàn)象,附子的毒性能遇熱分解,加熱處理是降低附子毒性的關(guān)鍵。各種炮制方法和工藝均能使附子中生物堿含量下降。應(yīng)該指出,附子中總生物堿含量的多少不能準(zhǔn)確反應(yīng)其毒性大小,而應(yīng)該分別測(cè)定幾種雙酯類生物堿的含量,因?yàn)殡p酯類生物堿是決定其毒性作用的主要因素。5對(duì)社會(huì)主義政藥學(xué)者進(jìn)行規(guī)制的必要性中藥經(jīng)炮