熒光法研究曲克蘆丁和

熒光法研究曲克蘆丁和人血清白蛋白的相互作用

摘要：目的：研究曲克蘆丁(Troxerutin)與人血清白蛋白(HSA)的相互結(jié)合作用。方法：以HSA為熒光劑,Trox-erutin為熒光猝滅劑,在激發(fā)波長(zhǎng)為220nm,發(fā)射波長(zhǎng)為345nm下測(cè)定兩者結(jié)合后的熒光強(qiáng)度,推測(cè)其猝滅機(jī)理;分別測(cè)定相同濃度的HSA的熒光發(fā)射光譜圖和紫外可見吸收光譜圖,來推斷兩者結(jié)合的作用力類型。結(jié)果：Troxerutin與HSA的相互作用為靜態(tài)猝滅過程,平衡常數(shù)K0(25℃)=6·18×105L/mol、K0(37℃)=3·76×105L/mol,供體(HSA)與受體(Troxerutin)間的作用距離r=4·66nm。Troxerutin和HSA的作用力類型為疏水作用力。結(jié)論：通過兩種分析方法清楚的研究了曲克蘆丁與血清白蛋白的相互作用。

曲克蘆丁(Troxerutin)是一種重要的黃酮類化合物,它是羥基蘆丁中最重要的有效成分,醫(yī)藥上用于治療靜脈障礙血栓癥及腦血管疾病。最近幾年國(guó)外把曲克蘆丁應(yīng)用于防治長(zhǎng)途飛行引起的微血管病，使曲克蘆丁臨床研究拓展到新的領(lǐng)域。藥物進(jìn)入體內(nèi)一般都需要通過血漿的儲(chǔ)存和運(yùn)輸來到達(dá)受體部位,發(fā)生藥理作用。血清白蛋白是血漿中含量最豐富的載體蛋白,可與許多內(nèi)源及外源性化合物結(jié)合。因此,研究藥物與白蛋白的相互作用,具有重要的理論和現(xiàn)實(shí)意義。

本文在模擬生理?xiàng)l件下,用熒光光譜法和紫外吸收光譜法,從分子水平上研究了曲克蘆丁與人血清白蛋白(HSA)相互作用,并計(jì)算了其平衡常數(shù)及結(jié)合點(diǎn)位。根據(jù)能量轉(zhuǎn)移機(jī)制計(jì)算了兩者結(jié)合時(shí)的作用距離,推測(cè)了二者之間的主要作用力。

實(shí)驗(yàn)部分

原理：

蛋白質(zhì)具有內(nèi)源熒光,可作為能量予體與某些藥物受體發(fā)生反應(yīng)形成絡(luò)合物,從而猝滅內(nèi)源熒光。研究這種猝滅行為可以為研究熒光能量予體與藥物受體之間的作用提供一系列理論依據(jù)。同時(shí)熒光能量給予體與受體分子間可發(fā)生非輻射能量轉(zhuǎn)移,而這種能量轉(zhuǎn)移過程效率決定于供體的發(fā)射光譜與受體的吸收光譜兩者重疊的程度。重疊的程度越大,能量轉(zhuǎn)移的效率越高。因此,能量轉(zhuǎn)移的幾率是供體的發(fā)射光譜與受體的吸收光譜兩者重疊程度的函數(shù)。基于熒光和紫外可見吸收光譜兩種分析方法,本文研究曲克蘆丁與人血清白蛋白的相互結(jié)合作用。實(shí)驗(yàn)方法

加入1×10-5mol/L的HSA1.0ml,一定量4×10-4mol/L的曲克蘆丁溶液,1.0mol/L的NaCl溶液1.0ml(用以維持體系中的離子強(qiáng)度)及pH=7.40的Tris-HCl緩沖溶液1.0ml于10ml比色管中,以蒸餾水定容至刻度,25℃恒溫2h。以1cm石英比色皿保持25℃恒溫,在激發(fā)和發(fā)射狹縫寬度均為5nm,λex為225nm,測(cè)定熒光強(qiáng)度。按上述操作,37℃恒溫2h同樣測(cè)定。移取1.0ml4×104mol/L的曲克蘆丁溶液于10ml比色管中,加入pH=7.4的Tris-HCl緩沖溶液定容至刻度,以Tris-HCl緩沖溶液做參比,測(cè)定紫外吸收光譜。結(jié)果：曲克蘆丁與人血清白蛋白的相互結(jié)合反應(yīng)

蛋白質(zhì)中由于色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸的存在使其具有內(nèi)源熒光(λex/λem=225nm/345nm