注射用脈絡(luò)寧對血管閉塞性脈管炎大鼠模型的影響

注射用脈絡(luò)寧對血管閉塞性脈管炎大鼠模型的影響

血栓閉塞性脈管炎是周圍血管慢性閉塞性炎癥之一。伴有復(fù)發(fā)性神經(jīng)變化，主要發(fā)生在四肢中部、小動脈和靜脈，通常可見下肢。其臨床特點為患肢皮膚發(fā)涼、間歇性跛行、肢體酸脹、麻木、受累動脈搏動減弱或消失,伴有游走性血栓性淺表靜脈炎,嚴重者有肢端潰瘍或壞死,是我國慢性周圍血管病中較常見的病種。脈絡(luò)寧注射液是由牛膝、玄參、石斛、金銀花等制備而成,臨床用于血栓閉塞性脈管炎、靜脈血栓形成、動脈硬化性閉塞癥、腦血栓形成及后遺癥。注射用脈絡(luò)寧是棕紅色的疏松狀固體制劑,本研究旨在觀察注射用脈絡(luò)寧靜脈注射給藥對大鼠實驗性血栓閉塞性脈管炎以及血液流變學(xué)等的影響。1血管閉塞性脈管炎大鼠臨床模型的建立1.1動物SD雄性大鼠60只,體重280~320g,由中國科學(xué)院上海分院動物中心提供,動物合格證號:SCXK(滬)2002-0010。1.2藥品與試劑注射用脈絡(luò)寧,山西亞寶藥業(yè)有限集團公司提供,批號:20050206;月桂酸由國藥集團化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn),批號:F20040204;快速醫(yī)用膠508系列,廣州白云醫(yī)用膠有限公司生產(chǎn),批號:050201;脈絡(luò)寧注射液,南京金陵藥業(yè)股份有限公司南京金陵制藥廠生產(chǎn),批號:0411111。1.3儀器LBY-N6B自清洗旋轉(zhuǎn)式粘度計,由北京普力生公司生產(chǎn)。1.4方法60只大鼠隨機為假手術(shù)組、病理模型組(簡稱模型組)、脈絡(luò)寧注射液對照組、注射用脈絡(luò)寧低、中和高劑量組共6組,每組10只。參照文獻方法稍加改進,制作大鼠血管閉塞性脈管炎(TAO)模型:將大鼠用10%水合氯醛3ml/kg腹腔注射麻醉,仰位固定后,右下肢股內(nèi)側(cè)剪毛。碘伏皮膚消毒,縱行切開,1.5~2.0cm切口,游離股動脈,夾閉阻斷血流,假手術(shù)組于動脈夾下方遠心端注入0.2ml生理鹽水,其余大鼠于動脈夾下方1.0cm處向近心端注入0.2ml月桂酸,直至血管明顯充盈,略顯白色而無明顯腫脹時,輕柔取針,用醫(yī)用粘涂膠封針孔。各組均于注射后15min去掉動脈夾,觀察結(jié)果。第3d尾靜脈注射給藥,模型組及假手術(shù)組靜注生理鹽水(1ml/100g)每天1次,連續(xù)給藥7d。1.4.1大鼠體征變化:觀察大鼠患肢皮膚溫度、顏色、動脈搏動、患肢腫脹程度、壞疽和木乃伊化的病變程度和范圍。參照王軍等采用的分級標準分級,Ⅰ級:病變局限于趾甲部;Ⅱ級:病變局限于趾部;Ⅲ級:病變局限于足爪部;Ⅳ級:病變局限于膝關(guān)節(jié)以下;Ⅴ級:病變發(fā)展到膝關(guān)節(jié)以上。1.4.2病理切片血栓分級:取大鼠右下肢,10%福爾馬林液固定3d后用10%硝酸脫鈣,足趾、踝關(guān)節(jié)上、下及股部4個部位橫斷切片,HE染色,對血栓進行分級,0級:無血栓;Ⅰ級:1個血栓;Ⅱ級:2~3個血栓;Ⅲ級:4個以上血栓。同時分別對動脈壁炎性細胞浸潤、纖維增生及血栓機化與再通等情況進行觀察。1.4.3血液流變學(xué)檢查:大鼠分別斷頭取血4ml,置于肝素試管中,采用LBY-N6B型自清洗旋轉(zhuǎn)式粘度計,測量大鼠全血粘度、血漿粘度、紅細胞壓積。1.5統(tǒng)計學(xué)處理實驗數(shù)據(jù)用Xˉˉˉ±SDXˉ±SD表示,計數(shù)等級資料采用秩和檢驗,計量資料采用SPSS10.0軟件進行單因素方差分析處理。2結(jié)果2.1各組大鼠的臨床病理情況比較大鼠經(jīng)股動脈注入月桂酸造模后,約5min后開始出現(xiàn)患肢足爪部變蒼白繼而青紫,皮膚溫度降低,動脈搏動減弱或消失,次日受累足趾變黑,并逐漸向上發(fā)展,形成壞疽及木乃伊化。少數(shù)動物手術(shù)后表現(xiàn)為患肢疼痛、跛行和曳行現(xiàn)象。一周內(nèi)少數(shù)大鼠出現(xiàn)患側(cè)壞疽部分脫落,模型組的病變最嚴重,注射用脈絡(luò)寧中、高劑量組的病變最輕,與模型組比較有顯著性差異(P<0.05),而假手術(shù)組未出現(xiàn)病變表現(xiàn),各組與假手術(shù)組比較均具有非常顯著性差異(P<0.01)。結(jié)果見表1。2.2管路無血栓形成假手術(shù)組手術(shù)區(qū)組織均有輕微粘連,有輕度炎細胞浸潤,以淋巴細胞為主,但股動脈均呈通暢狀態(tài),內(nèi)膜光滑,血管內(nèi)無血栓形成;經(jīng)造模后TAO模型大鼠患肢動脈內(nèi)均有不同程度的血栓形成,注射用脈絡(luò)寧3個劑量組和脈絡(luò)寧注射液對照組大鼠的血栓數(shù)明顯減少,程度非常顯著降低(P<0.01),注射用脈絡(luò)寧中、高劑量組大鼠未發(fā)現(xiàn)血栓機化現(xiàn)象,血栓再通數(shù)增多,動脈內(nèi)皮增生及中膜與外膜的炎細胞浸潤程度均明顯低于模型組。結(jié)果見表2。2.3各組血漿比粘度和高切變率的比較假手術(shù)組與TAO模型組相比,血液流變值(含血漿粘度及全血粘度)差異有非常顯著性(P<0.01),而紅細胞壓積無顯著差異;注射用脈絡(luò)寧三個劑量組及脈絡(luò)寧注射液對照組與模型組比較:血漿比粘度均非常顯著降低(P<0.01),全血比粘度中低切變率下均非常顯著降低(P<0.01),中切變率下低劑量組顯著降低(P<0.05),而其它各劑量組均非常顯著降低(P<0.01);在高切變率下,低劑量組雖降低但無顯著差異,中劑量及脈絡(luò)寧注射液對照組顯著降低(P<0.05),高劑量組則非常顯著降低(P<0.01)。各劑量組間紅細胞壓積變化不明顯。結(jié)果見表3。3治療血栓閉塞性脈管炎血栓閉塞性脈管炎是常見多發(fā)的周圍血管慢性閉塞性疾病之一,主要累及下肢血管,現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認為本病的病理變化為血流緩慢,中小血管持續(xù)性痙攣,血管壁營養(yǎng)障礙,最后導(dǎo)致血管閉鎖,局部組織缺血,肢體末端壞死脫落,對其治療尚無特效藥。血栓閉塞性脈管炎與血管內(nèi)皮損傷、血流動力學(xué)改變及血液凝固性增高等因素密切相關(guān),從而導(dǎo)致微循環(huán)障礙及組織的缺血、缺氧而發(fā)病。注射用脈絡(luò)寧的有效成分綠原酸、阿牙品、香豆類素化合物,具有抑制紅細胞與血小板聚集,降低全血比粘度和血漿比粘度,增加局部血流量、擴血管、促血液循環(huán);增加纖溶酶原,降低纖維蛋白含量,提高組織型纖溶酶原激活物